Спосіб визначення концентрації кальцію в біологічних рідинах

Спосіб визначення концентрації кальцію в біологічних рідинах, що включає розведення біологічної рідини дистильованою водою, створення в пробах високолужної реакції (рН-12-13) додаван 3 18361 4 Найбільш близьким по суті до способу що заяїї швидкий розвиток, велика контрастність і чіткість вляється є колориметричний спосіб визначення переходу забарвлень при фотометричному визнакальцію в сироватці крові [3. Словак, Я. Семенкоченні. При цьому додавання ацетону у досліджува. ж."Лабораторное дело" - №1. - 1974р. - С.19вані проби підвищує чутливість реакції і контраст22]. ність зміни забарвлення. Спосіб базується на реакції кальцію сироватки Забарвлення розчинів біологічних рідин, що крові з гліоксаль-біс (2-оксианілом) внаслідок якої досліджуються, стійке біля 1 години, а надалі посв лужному середовищі утворюється комплекс чертупово послаблюється. Чутливість реакції 0,1мкг воного кольору, який визначають фотометрично. кальцію в 1мл розчину. Отже, заявлений спосіб є Спосіб надає можливості отримати дані з точспецифічним, чітким, високочутливим, зручним у ністю ±4,0%. Недоліком способу є те, що забарвзастосуванні. лення в досліджуваних пробах швидко змінюється При проведенні патентно-інформаційного поі зникає, тому вимірювання необхідно проводити шуку заявником і авторами виявлено технічне рітерміново між 5-ю і 15-ю хвилинами після внесеншення, що містить найбільшу кількість суттєвих ня гліоксаль-біс(2-оксиніла). В зв'язку з цим, за ознак, спільних із заявленим рішенням: розведенцим способом рекомендується обробляти серії не ня біологічної рідини, дистильованою водою, ствобільше 10 проб. Крім того, препарат гліоксальрення в пробах високолужної реакції (рН-12-13) біс(2-оксиніл), що забезпечує забарвлення дослідодаванням 0,5N розчину їдкого натру, внесення джуваних проб дуже нестійкий і зберігається не препарату, що викликає специфічне забарвлення більше 10 днів після виготовлення. досліджуваних проб з наступним колориметруванЗаявлений нами спосіб усуває недоліки протоням та аналіз одержаних результатів в порівнянні типу і забезпечує чутливість 0,1-10мкг кальцію в з нормою рівня кальцію в біологічних рідинах для пробі, при цьому специфічне рожево-фіолетове різних видів та вікових груп [3. Словак, Л. Семензабарвлення проб в процесі визначення кальцію кова. ж.: "Лабораторное дело" - 1974. - №1 - С.19триває до 1 години, що надає можливість дослі22]. Однак наявність зазначених, спільних з протодження великих партій біологічних рідин при матипом ознак - недостатня для одержання технічнолих кількостях досліджуваного матеріалу. го результату, який забезпечує заявлений спосіб. В основу корисної моделі покладено завдання Технічних рішень, які б за сукупністю ознак постворити ефективний і точний спосіб визначення вністю б співпадали із заявленим рішенням - не кальцію в біологічних рідинах тваринного організвиявлено. му (крові, плазмі, сироватці, спинномозковій рідині, Це дозволяє зробити висновок про відповідсечі, молоці та інших),економічно вигідний, зручність заявленого технічного рішення критерію виний для застосування. находу (корисної моделі) - "новизна". Технічний результат досягають тим, що в проВ патентній і науково-технічній інформації не би досліджуваних біологічних рідин додатково знайдено технічних рішень, в яких були б описані вносять ацетон (0,7-0,8мл), в якості препарату, що відомості про ознаки, що відрізняють заявлений викликає специфічне забарвлення проб, викорисспосіб від прототипу і забезпечують досягнення товують кальціон у формі 0,02% водного розчину, технічного результату: в проби з досліджуваною який додають у кожну пробу по 1.4-1.6мл, обережбіологічною рідиною вносять ацетон (0,7-0,8мл), а но перемішують і колориметрують при довжині в якості препарату, що викликає специфічне забахвилі 510нм в кюветах товщиною шару 10мм. рвлення проб використовують кальціон у формі Кальцион-1,7',1',7"-Дисазонафталін-8,8',1",8''0,02%водното розчину, який додають в пробу по тетраокси-3,6,3',6',3'',6''-гексасульфокислота (пен1,4-1,6мл, бережно перемішують і колориметрують танатрієва сіль) Ca30H15O22N4S6Na5[IPEA]. при довжині хвилі 510нм в кюветах товщиною шаРеактив являє собою дисазофарбник. Випусру 10мм. кається у вигляді чорного з фіолетовим відтінком Отже заявлене технічне рішення не випливає порошку із вмістом вологи (в т.ч. кристалізаційної явним чином з рівня техніки, що дозволяє зробити води) до 15% і хлористого натрію до 4-8%. Він довисновок про його відповідність критерію винаходу бре розчиняється у воді і практично не розчиня(корисної моделі) - "винахідницький рівень". ється в ацетоні, бензолі, хлороформі, чотирихлоЗаявлений спосіб відноситься до галузі біолористому вуглеці, етиловому і ізоаміловому гії, зокрема біологічної хімії, а саме, до визначення спиртах. При зберіганні в скляній тарі реактив не рівня кальцію в біологічних рідинах (сироватці або змінюється. Його водні розчини стійкі не менше плазмі крові, сечі, слині, молоці та інших) трьох місяців. Спосіб може бути застосований в біохімічних і Кольорова реакція кальціона з кальцієм спеклінічних лабораторіях, установ з різними формацифічна (від синього до рожевого) розвивається ми власності, які досліджують біологічні рідини на миттєво в лужному середовищі (оптимальна рН наявність і забезпеченість їх кальцієм з діагности12-13), при цьому найбільша контрастність виничними та терапевтичними цілями, а тому відповікає в присутності ацетону. Суть цієї реакції полядає критерію винаходу (корисної моделі) - "промигає в утворенні продукту взаємодії, в якому співслова придатність". відношення реагуючих речовин Ca:HR складає 1:1. Таким чином, заявлене технічне рішення є ноЖоден інший катіон (в т.ч. Ва, Sz, Mg та багато вим промисловo придатним, має винахідницький інших) аналогічної зміни реакції не дає. рівень, тобто відповідає усім умовам патентноспВідмітними властивостями кальціону як реакроможності корисної моделі відповідно до ст.7 тиву для визначення кальцію є достатньо висока розділу II Закону України "Про охорону прав на специфічність і чутливість реакції забарвлення та винаходи і корисні моделі.", №1771-III, 2000р. 5 18361 6 Досліджувану біологічну рідину розводять бівідомим способом (прототип) та новим способом з дистильованою водою. використанням кальціону. Так для сироватки крові: 0,05мл сироватки В дослідах було встановлено, що вміст калькрові вносять в пробірку з 2,2мл бідистильованої цію в сироватці крові знаходиться в межах: у здоводою, двічі промивають піпетку. рових корів - 9,5-11,6мг% (2,4-2,9мМ/л); телят Додаванням 0,5N розчину їдкого натру ство10,0-12,5мг% (2,5-3,12мМ/л); жінок-донорів - 9,0рюють висок лужну реакцію досліджуваної біологі11,6мг% (2,25-2,9мМ/л). У хворих остеодистрофічної рідини (рН=12,5). єю корів - 8,8мг% (2,2мМ/л), бугайців Для сироватки крові: в пробірку додають 0,5мл 7,61(1,91мМ/л); та з перебігом субклінічної форми 0.5N розчину ΝΟΗ і ретельно перемішують вміст хвороби - 8,35мг% (2,09мМ/л). пробірки. Порівняльне визначення кальцію за відомим Для створення найбільшої контрастності реакспособом з гліоксаль-біс(2-оксианілом) дає співпації вносять ацетон одночасно з розчином кальціодаючі наслідки. Однак незручність відомого спосону. Для сироватки крові: в пробірку додають бу полягає у короткотривалому забарвленні проб 0,75мл ацетону і одночасно 1,5мл 0,02% розчину (від 5 до 10 хвилин), що утруднює визначення векальціону, який готують завчасно. Розчин кальціоликих партій дослідного матеріалу. ну зберігається протягом 3-х місяців. Через 5 хвилин після додавання розчину каТаблиця 1 льціону і обережного перемішування проби колориметрують при довжині хвилі 510нм проти контПорівняльні властивості способів визначення кальролю (стандарт) в кюветах при товщині шару цію в біологічних рідинах. 10мм. Стандарт; 100мг% розчин вуглекислого кальПоказники Прототип Новий спосіб цію (2,497г на 1л води) реактив 0,02% водний Оцінку результатів вимірювання здійснюють за ГБОА глі- розчин кальКомплексоутворюючий оптичною щільністю проби і контролю-стандарту. оксальціону з додареагент Приклад конкретного виконання способу біс(2ванням ацеЕфективність заявленого способу та його пеоксианіл) тону реваги перед прототипом підтверджена прикладом Тривалість забарв5-10 хвидо 1 години конкретного виконання способу. лення дослідних проб лин В умовах лабораторії кафедри внутрішніх хво0,1мкг кальцію роб тварин Львівської національної академії ветеЧутливість реакції ±4,0% в досліджуваринарної медицини імені С.З. Ґжицького та них пробах центральної обласної клінічної лабораторії проведено ряд серій клінічних дослідів по визначенню Заявлений нами спосіб визначення кальцію з концентрації кальцію в сироватці крові великої допомогою кальціону специфічний, високочутлирогатої худоби, зокрема корів і телят НДГ "Комарвий, вимагає в 10 разів меншу кількість матеріалу нівське" Львівської області, а також жінок-донорів для дослідження і дозволяє досліджувати великі м.Львів. партії біологічних рідин. Сироватку крові досліджували паралельно за Комп’ютерна верстка В. Мацело Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601