Спосіб біохімічної діагностики тубуло-інтерстиційного компонента

Спосіб біохімічної діагностики тубулоінтерстиційного компонента, що включає дослідження біопсійного матеріалу, який відрізняється тим, що наявність тубуло-інтерстиційного компонента встановлюють за вірогідним зростанням вмісту оксипроліну як маркера розростання колагену і зниженню активності сукцинатдегідрогенази в кірковій речовині нирок як кількісного критерію пошкодження ниркових канальців. (19) (21) u200606156 (22) 02.06.2006 (24) 15.11.2006 (46) 15.11.2006, Бюл. № 11, 2006 р. (72) Пішак Василь Павлович, Дікал Мар'яна Вікторівна, Висоцька Віолетта Георгіївна, Магляс Віктор Миколайович, Ломакіна Юлія Вячеславівна (73) Магаляс Віктор Миколайович 3 18785 4 нирки експериментальних тварин (білі щури і ін.). ють по методу [Stegemaun Н. Mikrobestinemung В клініці використовують біопсійний матеріал кірvon Hydroxyprolin mit chloramin-T und pкової речовини нирки хворого. Dimethylaminobensaldehyd // Hoppe - sayler'sz. Активність сукцинатдегідрогенази визначають physiol. chem. - 1958. - Bd.311, №1-3. - S.41-45] 10по методу [Гоженко А.И. Активность сукцинатде20мг сухої обезжиреної тканини (екстракція ліпідів гидрогеназы и содержание пиридиннуклеотидов в в хлороформ-метанольній суміші - 2:1 на протязі корковом веществе почек при нефрите у крыс // IV 24 годин з послідуючою фільтрацією і висушуванВсесоюзная конференция по водно-солевому обням на обеззолених фільтрах) гідролізують при мену и функции почек. - Черновцы, 1974. - С.50100°С в скляних високих пробірках з пришліфова51.], 0,25мл 0,2М сукцинату натрію +0,5мл 0,2% ними пробками на протязі 12 годин в 2мл суміші 2,3,5 - трифенілтертазолыю хлористого + 0,65мл НСl - мурашина кислоти (5:1) 0,2мл гідролізату 0,5М Тріс - НС1 буферу (рН-7,4)+0,1мл 10% гомонейтралізують до 1мл 6N NaOH. Додають 0,5мл генату. Інкубують в термостаті при 37°С на протязі реактиву для окислення (2,82г хлораміну+40мл 30хв. дистильованого буферу, рН-6,0). Реакцію зупиняють шляхом добавлення 5мл Встряхують 5хв, після чого додають 1мл 4М бутанолу. Центрифугують 10хв при 300об/хв. Вихлорної кислоти і 0,5мл 10% розчину диметиламімірюють оптичну густину бутанольних екстрактів ноазобензальдегіду в метанолі. Інкубують 15хв на КФК-2 в 1см кюветі при довжині хвилі 490нм при 60°С. Вимірюють оптичну густину розчину піспроти контролю, в якому замість 0,1мл гомогенату ля охолодження в 1см кюветі на СФ-46 при довжидистильована вода. ні хвилі 558нм проти контролю, в якому замість Активність ферменту розраховують в мкг/мг гідролізату - 1мл дисцильованої води. Концентрабілки/годину. Калібрувальний графік будують по цію оксипроліну виражають в мкг/г сухої тканини. 2,3,5 - трифенілтетразолію хлористому, для переКалібрувальний графік будують по чистому оксиптворення якого в формазан використовують Na2S. роліну. Використання методу в експерименті в Білок визначають по методу [Lowry O.I., момент формування ТІК на 30 день сулемової Rosebraugh N.I., Parr A.L., Raundueall R.I., Protein нефропатії показано вірогідне зростання оксипроmeasurment with Folin phenol reagent // J. Biol. ліну і достеменне зниження активності сукцинатChem. - 1951. - V.193, №1. - P.265-275]. дегідрогенази (таблиця 1). Оксипролін в кірковій речовині нирок визначаТаблиця 1 Активність сукцинатдегідрогенази і концентрація оксипроліну в кірковій речовині нирок на 30 день сулемової нефропатії (x±Sx) Показники, що досліджуються Контроль (n=6) Сулемова нефропатія 30 день (n=6) 5,11±0,09 Оксипролін мкг/г сухої тканини 2,66±0,15 р