Спосіб отримання солестійких рослин тютюну

Спосіб отримання солестійких рослин тютюну, що включає операцію впливу стресового чинника на культур у цієї рослини для підвищення солестійкості рослин тютюну і наступне отримання солестійких рослин тютюну, який відрізняється тим, що попередньо відбирають насіння рослин чистої лінії тютюну, отримують препарати ДНК солестійких рослин пасльону чорного - Solanum nigrum L., готують розчин комплексного препарату ДНК, до складу якого включають отриману ДНК пасльону чорного та очищені ДНК плазмід pCAMVNEO, 3 20373 4 тільки до окремих видів солевого стресу. вирощують рослини тютюну до стадії зацвітання, Найбільш близьким до пропонованого за досявиконують ізолювання суцвіть до зацвітання пергнутим результатом є спосіб отримання солестійшої квітки пергаментними ізоляторами та одержуких рослин тютюну, що включає операцію впливу ють насіння індивідуальних рослин під ізоляторастресового чинника на культур у цієї рослини, з ми, проводять відбір солестійких рослин шляхом метою підвищення солестійкості рослин тютюну, і пророщування одержаного насіння на селективнаступного отримання солестійких рослин тютюну ному середовищі, яке містить 20...23г/л морської [11]. Отримання солестійких рослин тютюну у відсолі, та отримують лінії солестійких рослин тютюповідності до згаданого способу включає операцію ну. впливу стресового чинника на культуру in vitro цієї Авторами експериментальне винайдена оптирослини, з метою підвищення солестійкості рослин мальна концентрація розчину ДНК солестійких тютюн у, і наступного отримання солестійких росрослин пасльону чорного - Solanum nigrum L. Так лини тютюну шля хом регенерації з культур солепри додаванні до пророщеного насіння розчину з стійких клітин. Згаданий спосіб призначений для концентрацією ДНК пасльону, яка дорівнювала відбору та аналізу стійких до сольового та водного 500мкг/мл, та проведенні інфільтрації насіння тастресу клітинних ліній тютюну. При цьому у ролі ким розчином отримати рослини тютюну не вдастресового чинника використовували підвищені лося. Така концентрація ДНК пасльону виявилася концентрації солі в живильному середовищі. токсичною для тютюну. Тому концентрацію ДНК Недоліком описаного способу є те, що він тр упасльону зменшили втричі, а з метою розширення домісткий - потребує введення рослинних тканин у мінливості рослин тютютн у за бажаними ознаками культур у in vitro та тривалої селекції солестійких та відбору серед них оптимальних варіантів ДНК варіантів на засолених поживних середовищах і пасльону його використали в комплексі з ДНК плапотребує спеціального обладнання для роботи зі змід pCAMVNEO, рТі8628. Розчин для інфілтрації стерильними культурами. Також існує проблема готували таким чином, що загальна концентрація отримання регенерантів із стабільних ліній тютюну ДНК у ньому була 500мкг/мл, а концентрація кожв культурі клітин: при тривалому культивуванні, що ної з трьох зазначених ДНК складала приблизно необхідно для отримання стабільних ліній, ростретину від цієї величини. линні клітини часто втрачають здатність до регеОписаний спосіб менш трудомісткий за спосібнерації, особливо під впливом додаткових стресопрототип, оскільки не потребує введення рослинвих факторів, яким є засолення поживного них тканин у культур у in vitro та тривалої селекції середовища, а отриманні із таких культур регенесолестійких варіантів на засолених поживних серанти можуть втрати ти фертильність або мати інші редовищах. небажані мутації. В результаті використання пропонованого В основу пропонованої корисної моделі постаспособу отримують стабільні лінії рослин тютюну, влено задачу створення такого способу отримання серед яких можуть бути відібрані найбільш перссолестійких рослин тютюну, який би був менш пективні форми рослин, які можуть стати основою трудомістким, а також дозволив би отримати содля створення нових сортів тютюну з бажаними лестійкі рослини тютюну не з культур клітин in vitro господарське цінними ознаками, а саме скоростигшляхом відбору ліній солестійких клітин з наступлість, висока продуктивність, стійкість до комплекною регенерацією солестійких рослин з таких лісного засолення грунтів, форми рослин тютюну, ній, а на рослинах in planta, діючи стресовим чинякі не містять нікотину, що відкриває перспективи ником на проростаюче насіння, що дозволило б його використання у якості лікарської рослини. зберегти фертильність і не мати інших небажаних Приклад. Відбирали насіння рослин чистої лінії мутації. тютюн у сорту Кр упнолистий 20 (автор - О.П. ГреЗазначена задача вирішується пропонованим бьонкін, Росія, Краснодар, НПО «Табак»), після способом, який, як і відомий спосіб отримання соповерхневої стерилізації насіння пророщували в лестійких рослин тютюну, включає операцію вплистерильних чашках Петрі з невеликою кількістю ву стресового чинника на культуру цієї рослини, з води. Одночасно отримували препарати ДНК сометою підвищення солестійкості рослин тютюну, і лестійких рослин пасльону чорного - Solatium niнаступного отримання солестійких рослин тютюну, grum L. При додаванні до пророщеного насіння а, відповідно до пропозиції, попередньо відбирарозчину з концентрацією ДНК пасльону, яка дорівють насіння рослин чистої лінії тютюну, отримують нювала 500мкг/мл, та проведенні інфільтрації напрепарати ДНК солестійких рослин пасльону чорсіння таким розчином отримати рослини тютюну ного - Solanum nigrum L., готують розчин комплекне вдалося. Така концентрація ДНК пасльону висного препарату ДНК, до складу якого включають явилася токсичною для тютюну. Тому концентраотриману ДНК пасльону чорного та очищені ДНК цію ДНК пасльону зменшили втричі, а з метою плазмід pCAMVNEO, рТі8628 (е-ДНК), а загальна розширення мінливості рослин тютютну за бажаконцентрація ДНК в розчині складає 500мкг/мл - по ними ознаками та відбору серед них оптимальних третині кожної із зазначених ДНК, пророщують варіантів ДНК пасльону його використали в комнасіння чистої лінії тютюну, а операцію впливу плексі з ДНК плазмід pCAMVNEO, рТі8628. Розчин стресового чинника на культур у цієї рослини викодля інфілтрації готували таким чином, що загальна нують інфільтрацією пророщеного насіння тютюну концентрація ДНК у ньому була 500мкг/мл, а конрозчином комплексного препарату ДНК, промивацентрація кожної з трьох зазначених ДНК складають оброблене насіння тютюну водою та вирощула приблизно третину від цієї величини. ють з нього розсаду до стадії 4-6 листочків в умоПроводили інфільтрацію насіння згаданим вах теплиці, висаджують розсаду в гр унт, розчином, потім ретельно промивали водою та 5 20373 6 висівали в стерилізований шляхом автоклавуванселекційне цінні ознаки вже в першому поколінні ня (1,5атм., 1 година) грунт. С хожість насіння (Т1), пророщували на селективному агаризованому складала 31,7% при летальності на стадії паростсередовищі, яке містило 20г/л морської солі. Соків, що дорівнювала 14,6%. Отримані сіянці на лестійкість тютюну оцінювали як кількість життєстадії 4-х листочків пікірували, висаджуючи для здатних паростків (%), отриманих з насіння відіподальшого вирощування в окремі посудини, набраних рослин на вищевказаному селективному повнені звичайним грунтом. Перед зацвітанням середовищі. Дані про кількість життєздатних пасуцвіття отриманих рослин тютюну ізолювали перростків, отриманих у др угому поколінні (T2), навегаментними ізоляторами. Насіння рослин, які мали дені в таблиці. Таблиця Дослідження наявності солестійких форм тютюну в поколінні Т2 рослин після дії комплексним препаратом е-ДНК Рослина з Т1, № Варіант досліду 1 5 16 35 Вибірка рослин чистої лінії 1. Комплекс е-ДНК пасльону, рТі8628 та pCAMVNEO Солестійкість (наявність життєздатних рослин при рівні засолення субстрату 20г/л морської солі), % 6,5±0,10 7,7±0,11 6,0±0,13 6,3±0,14 Контроль, Сорт КР20 Із солестійких паростків отримували рослини тютюн у, які вирощували методом ґрунтової культури в окремих посудинах, їх суцвіття до зацвітання ізолювали пергаментними ізоляторами, і подальші відбори (до 5-го покоління) здійснювали теж шляхом пророщування насіння на селективному середовищі спочатку з 20г/л, потім з 23г/л морської солі. В результаті отримали солестійкі рослини тютюну in planta, що крім солестійкості мали комплекс селекціно цінних ознак, зокрема підвищену продуктивність, ранні терміни зацвітання, крупне лисття. Література 1. Locy L.D., Chang С.С., Nielsen B.L., Singh N.K. Photosynthesis in salt-adapted heterotrophyc tobacco cells and regenerated plants // Plant Physiol. - 1996. - 110 (1). - p. 321-328. 2. Ruitz J.M., Rios G.G., Resales M.A., Rivero P.M., Romero L. Grafting between tobacco plants to enhance salinity tolerance // J. Plant Physiol. - 2005. Epub ahed of print. 3. Das-Chatterjee A., Goswami L., Maitra S., Dastidar K.G., Ray S., Majumder A.L. Introgression as a novel salt-tolerant L-myo-inositol 1-phosphate synthase from Posterresia coarctata (Roxb.) Tateoka (PcINO1) confers salt tolerance to evolutionary diverse organisms // FEBS Lett / - 2006. - 580 (16). - P. 3980-3988. 4. Wi S.G., Кіт W.T., Park K.Y. Overe xpression of carnation S-adenosilmethionine decarboxylase gene generates a broad-spectrum tolerance to abiotic stresses in transgenic tobacco plants // Plant Cell Rep. - 2006. - Epub. ahead of print. 5. Jang I.C., Oh S.J., Seo J.S., Choi W.B., Song S.I., Kim C.H., Kim Y.S., Seo H.S., Choi Y.D., Nahm Комп’ютерна в ерстка Г. Паяльніков B.H., Кіm J.K. Expression of a bifunctional fusion of a Escherichia coli genes for tregalose-6-phosphate synthase and tregalose-6-phosphate phosphatase in transgenic rice plants increases tregalose accumulation and abiotic stress tolerance without stunting growth // Plant Physiol. - 2003. - 131 (2). - P. 516524. 6. Holmstrom K.-O., Somersalo S., Mandal A., Palva Т.Е., Welin B. Improved tolerance to salinity and low temperature in transgenic tobacco producing glycine betaine // J. Exp. Bot. - 2000. - 51 (343). - P. 177-185. 7. Kishor К., Hong Z., Miao G.-H., Hu C.-A.A., Verma D.P.S. Overexpression of -pyrroline-5carboxylate synthetese increases proline production and confers osmotolerance in transgenic plants // Plant Physiol. - 1995. - 108. - P. 1387-1394. 8. Wu C.A., Yang G.D., Meng Q.W., Zheng C.C. The cotton GhNHX1 gene encoding a novel putative tonoplast Na+/H+ antiporter plays an important role in salt stress // Plant Cell Physiol. - 2004. - 4 5(5). - P. 600-607. 9. Sanan-Mishra N.. Pham X.H., Sopory S.K., Tuteja N. Pea DNA helicase 45 overexpression in tobacco confers high salinity tolerance without affecting yield // PNAS. - 2005. - 102 (2). - P.509-514. 10. Singla-Pareek S.L., Reddy M.K., Sopory S.K. Genetic engineering of the glyoxalase pathway in tobacco leads to enhanced salinity tolerance // PNAS. - 2003. – 100 (25). - P. 14672-14677. 11. Отбор и анализ устойчивых к солевому и водному стрессу клеточных линий табака и регенерантов из них. Б.А. Левенко, Л.Е. Сергеева, В.А. Виноградов и др. в сб.: Экспериментальная генетика растений в ускорении селекционного процесса. - К.: Наука. - 1989. - С. 101-110. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601