Спосіб захисту сперміїв при заморожуванні еякулятів бугаїв

Винахід належить до сільського господарства, зокрема до тваринництва, а саме до способів підвищення запліднювальної здатності сперміїв бугая І може бути використаний при штучному осіменінні тварин. Відповідно до "Інструкції по організації І технології роботи станцій і підприємств по штучному осіменінню сільськогосподарських тварин" (1981) для розбавлення І заморожування еякулятів бугаїв використовуються середовища (табл. 1, 2): Вказані середовища призначені для захисту сперміїв при заморожуванні. Однак використання їх середовищ призводить до загибелі великої кількості сперміїв у процесі технологічної обробки еякулятів І не забезпечує високої запліднюваності корів. Тому запропоновані Інші розбавники, які покращують якість розмороженої сперми. До їх складу входять неелектроліти [Лопатко М.М., Тюпіна К.Ф. Способ замораживания спермы быков без глицерина // Животноводство-1972. - № 6 - С. 72-74; Наук В.А. Усовершенствовавший метод сохранения семени быковпроизводителей в глубокозамороженном состоянии // Совершенствование методов воспроизводства сельскохозяйственных животных, Кишинев: Штиинца. -1979. - С. 34-35)] комплексонати кальцію І магнію [Соколовская И.И., Фарид Α.Α., Мо хамед, Действие натрий-кальциевого внутрикомплексного соединения ЭДТУК - карбоксилазы при замораживании спермы быкоз //Животноводство. - 1973. - № 11. - С. 81-83] І сануючі препарати [Балашов Η.Г. Ветеринарный контроль при искусственном осеменении животных. - М.: Колос. - 1980. - С.271]. Серед запропонованих компонентів середовищ для розбавлення сперми бугаїв особливе місце займають речовини з антиоксидантними властивостями - глутатіон (відновлена форма) І аскорбінова кислота. Так, відомий спосіб підвищення запліднювальної здатності спермїїв бугаїв, що здійснюється додаванням аскорбінової кислоти до середовища для розморожування сперми [Стоянов Т.К.; ЗагорешД.І.Дорньов А.П., Георгиев Г.Ж. Активирующая среда для размораживания спермы быка. - Дат. св. НРБ №38513,86.01.15]. Однак дане середовище використовується тільки для розморожування сперми бугаїв і не може захистити структурні компоненти статевих клітин від впливу кріогенних факторів в процесі заморожування. · Найбільш близьким до запропонованого в спосіб покращення якості розмороженої сперми шляхом використання середовища для заморожування сперми бугаїв, що містить - 5 мМ відновленої форми гаутатіону, 78% збираного молока, 15% курячого жовтка, 7% гліцерину, 2 г фр уктози, пеніциліну І стрептоміцину по 500 1.0/мл [Славета P., Ласковська Т. Вплив гяутатіону на активність і запліднювальну здатність сперміїв розмороженої сперми бугаїв //Відтворення тварин. - 1887. — №13. — С.249-253]. Спосіб забезпечує підвищення активності І запліднювальної здатності сперміїв на 5%. Однак, оскільки використовується тільки відновлена форма глутатіону, то таке середовище не забезпечує збалансованості обмінних процесів у розбавленій спермі, високої життєздатності і запліднювальної здатності сперміїв. Крім того, у вказаному середовищі, на відміну від синтетични х, використовується молоко, у якого біохімічний склад не постійний і змінюється залежно від багатьох зовнішніх факторів. Запропонований нами спосіб захисту сперміїв передбачає використання в складі середовища для розбавлення І заморожування еякулятів протекторної добавки, яка містить: Спосіб забезпечує після розморожування більшу кількість живих сперміїв триваліше виживання І вищу запліднювальну їх здатність, в порівнянні з прототипом. Причиною позитивного впливу поєднання відновленої форми глутатіону І аскорбінової кислоти у запропонованому співвідношенні на якість статевих клітин є те, що дан! сполуки, формуючи побічний ланцюг транспорту електронів, здатні знешкоджувати сперміцидальні продукти, які утворюються під час технологічної обробки сперми, підтримувати функціональний стан НАД-залежної і термінальної ланок основного шляху дихання, зберігати оптимальний перебіг обмінних процесів. Використання ж окремо, будь-якої із вищеназваних сполук в якості компонентів середовищ для разбавлення еякулятів бугаїв викликає аміни обмінних процесів в сперміях ι знижує ефективність захисної дії. В основу винаходу покладено завдання створити спосіб захисту сперміїв в бугаїв при заморожуванні еякулятів, який би після розморожування сперми забезпечував велику кількість живих сперміїв, високу їх життєздатність І запліднювальну здатність. Технічний результат; який полягає у підвищенні кількості живих сперміїв після розморожування еякуляту, їх виживання І запліднювальної здатності, досягають внесенням протекторної добавки до сперми розбавленої, відповідно до Інструкції і технологічного процесу племпідприємств. Внесення запропонованої протекторної добавки 0,09-0,1 мл на 1,0 мл розбавленої сперми відповідно до технологічного процесу племпідприємств, підвищує після розморожування кількість живих статеви х клітин на 18,2-20,7%, виживання на 28-30% І запліднювальну здатність на 8% в порівнянні з прототипом. При проведенні заявником патентно-інформаційного пошуку знайдено технічне рішення, в якому є ряд суттєвих ознак, спільних із заявленим [Славета Р. Вплив добавлення відновленої форми глута тіону І цистеїну до замороженої сперми на запліднювальну здатність // Медицина ветеринарна. - 1973. - № 29. - С.11-12]: включення відновленої форми глута тіону у середовище для заморожування сперми бугаїв. Однак даних суттєвих ознак недостатньо для одержання технічного результату заявленого рішення. Технічних рішень, які б за сукупністю ознак повністю співпадали з ознаками заявленої протекторної добавки не знайдено. Це дозволяє зробити висновок про відповідність заявленого технічного рішення критерію "новизна". В джерелах патентної і науково-технічної Інформації не знайдено відомостей про способи захисту сперміїв при заморожуванні еякулятів бугаїв які б містили ознаки, що відрізняють заявлений винахід від прототипу: додавання протекторної добавки, яка містить крім відомих складників (лактоза або сахароза, натрій цитрат трьохзаміщений, п'ятиводний гліцерин, І глутатіон) ще аскорбінову кислоту в кількості 60-65 мг на 100 мл. Отже, заявлене технічне рішення не випливає явним чином з рівня техніки, що дозволяє зробити висновок про відповідність заявленого рішення критерію "винахідницькій рівень". Заявлений спосіб може бути використаний у галузі тваринництва, а саме у штучному осіменінні тварин, зокрема при розбавленні сперми бугаїв і тому відповідає критерію "промислова придатність". Таким чином, заявлене технічне рішення є новим промислово придатним І має винахідницький рівень, тобто, відповідає всім умовам патентної спроможності винаходу відповідно до статті 6 розділу II Закону України "Про охорону прав на винаходи і корисні моделі" (№ 3687-XII). Реалізацію заявленого винаходу здійснюють таким чином: відновлену форму глутатіону (765 мг) І аскорбінову кислоту (62 мг) розчиняють у 100 мл "Середовища №2 для заморожування сперми в облицьовані гранули" - протекторна добавка. При заморожуванні сперми на 1 мл сперми, розбавленої відповідно до технології племпідприємств, вносять 0,1 мл протекторної добавки. Розбавлену таким чином сперму еквілібрують, заморожують, розморожують І використовують згідно "інструкції по організації І технології роботи станцій І підприємств по штучному осіменінню сільськогосподарських тварин" (1981). Для встановлення оптимальної Дози протекторної добавки розбавлені еякуляти ділили на частини перша (контрольна, прототип) - вносили 5 мМ відновленої форми глутатіону, в Інші дослідні - вносили протекторну добавку в дозах, відповідно. 0,08; 0,09; 0,1; 0,11 і 0,12 мл на 1,0 мл розбавленої сперми. Аналіз одержаних результатів свідчить, що внесення в розріджені еякуляти 0,09; 0,10 і 0,11 мл протекторної добавки підвищує після розморожування сперми, порівняно з контролем - кількість живих сперміїв на 18,2-20,7%, виживання на 28,9-30,3%, активність СДГ на 8,8-14,2% (табл. 3). При інших дозах протекторної добавки (0,08 } 0,12 мл) кількість живих сперміїв і активність СДГ не змінювалися І були в межах, відповідно, 26,2-29,2% і 32,5-40,0 од., а виживання підвищилось на 20%. Активність і резистентність статевих клітин розмороженої сперми між пробами з внесенням протекторної добавки і контрольними не відрізнялися і становиди, відповідно, 3,8-4,0 бали І 7,8-8,4 тис. Отже, оптимальною кількістю протекторної добавки, яка підвищувала досліджувані показники якості сперміїв в розбавлених еякулятах бугаїв є 0,1 мл при коливаннях 0,09-0,11 мл на 1,0 мл розбавленої сперми. Для перевірки способу захисту сперміїв при заморожуванні еякулятів у Львівському підприємстві по племінній справі в тваринництві відібрано 30 еякулятів бугаїв. Кожний Із них розбавляли Синтетичним середовищем для заморожування сперми бугаїв в облицьованих· гранулах у відповідності з Інструкцією і розділяли на дві частини. В одну (дослідну) вносили на 1 мл розбавленої сперми 0,1- мл протекторної добавки, інша - контрольна. Заморожування І розморожування сперми проводили згідно "Інструкції по організації і технології роботи станцій 1 підприємств по штучному осіменінню сільськогосподарських тварин" (1981). В господарствах Буського району Львівської області (Грабово, ім. Шевченка, Побужанське) проведено штучне осіменіння 368 гол. клінічно здорових корів. З них 200 гол. осімінено спермою з протекторною добавкою і 168 гол. - контрольною. Ефективність осіменіння корів визначали за відсутністю статеви х ' циклів, ректальним дослідженням тільності та отеленням. Після першого осіменіння розбавленою спермою з дослідним середовищем запліднюваність корів становила, в середньому 67,5% (в окремих господарствах від 36,0 до 76,0%), в контролі 59.5% (коливання 25,0-71,1%; табл. 4). Отже, перевагою запропонованого технічного рішення перед прототипом є підвищення у розмороженій спермі кількості живих сперміїв на 20,7%, їх виживання на 30,3%, запліднювальної здатності на 8,0%. При цьому вартість осіменіння 100 корів І телиць спермою з протекторною добавкою 40,5 гривні (40,5 коп х 100), контрольним 40,00 (40 коп. х 100). При використанні середовища з протекторною добавкою запліднилось більше на 7 голів. Відповідно, втрати на повторне осіменіння в досліді 12,96 гривні (32 гол. х 40,5 коп), в контролі -16,00 (40 гол. χ 40 коп.). Економічний ефект від використання розбавника з протекторною добавкою на 100 коровах 3,04 гривні без врахування втрат від неплідності тварин.