Спосіб прогнозування показників спермопродуктивності бугаїв-плідників

1. Способ прогнозирования показателей спермопродуктпвности быков-производите лей, включающий оценку первых 5~10 эякулятов по объему, количеству и подвижности половых клеток, числу накопленных спермодоз, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что дополнительно определяют активность аспартат-аланин-аминотрансфераз и содер жание глутаминовой кислоты в плазме нагивнои спермы и после воздействия на Изобретение относится к сельскому хозяйству и, в частности, к способам оценки и прогнозирования продуктивности самцов животных, преимущественно быков-производителей. Известен способ оценки быков по спермопродукции, где установлена положительная корреляционная связь между количеством спермиев в первьк 10 эякулятах и за 12 месяцев использования (г -+0,44-0.77). Недостаток известного способа - отсутствие сведений о качестве (морозоустойчи нее в течение 1-2 мин жидким азотом и бидистиллированной водой, после чего устанавливают коэффициент морозоустойчивости по соотношению активности трансфераз и уровня глутаминовой кислоты в замороженной к нативной сперме, а также определяют стабильность качества спермы по показателю нормированного отклонения каждого из определяемых показателей спермы за отдельный промежуток времени. 2. Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что к быкам производителям с высоким уровнем спермопродуктивносіи относят животных, продуцирующих в возрасте 9-Ю мес не менее 5 мл спермы с концентрацией не ниже 1,0 млрд/мл, подвижностью половых клеток в натиеной сперме не ниже 7 баллов, количеством живых клеток в эякуляте не менее 4,0 млрд., с уровнем активности аспартат-аланин-аминотрзнсфераз 6,5 мк/моль мл, содержанием глутаминовой кислоты не ниже 55 мг на 100 мл и коэффициентом морозоустойчивости не ниже 0,6. вости) данных клеток, что не позволяет судить о возможности замораживания клеток и количестве фактически накопленных спермодоз, а значит, не обеспечивает главного процесса - прогнозирования показателей слермолродуктивности. Кроме того, ие учитываются другие основные показатели качества спермы, такие как объем эяк улят а, ко нц ент р ац ия и подвижность клеток в них, что не позволяет сделать вывод, за счет каких показателей увеличивается или уменьшается количество накопленных спермодоз, а С> со со ON 00 О 13368 энлчит отсутствует возможность управлеПоставленная цель достигается тем, что ния процессом молодых быков 9-10-месячного возраста наЬтизким по биологической сущности к чинают использовать на умеренном режиизобретению является способ прогнозироме дуплетной садкой через 9 дней. По вания качества сперми самцов по уровню 5 данным оценки первых 5-Ю зякулятов для фгрментов (ACT и АЛТ) в клетках, включаюдальнейшей оценки оставляют тек быков, щий определение подвижности спермиев количественные показатели спермы (объ(нативнзя спермя) по уровню фермента ACT ем, общее число спермиео в эякуляте) котоп них рых превышают среднее по группе *ш 40% Однако этот способ не предусматривает 10 и более. прогнозирования показателя морозоустойДанный способ отличается тем, что крочивости клеток, а значит, возможного колиме ранее предложенных показателей опречества накопленных спермодоз. Таким деления качества спермы (общее число доз образом, данный способ может быть примепригодной спермы, объем эякулята, подвижним лишь на нативной (свежей) сперме про- 15 ность и концентрация клеток) включаются изводителей. показатели активности аспартэт- и алаиинаминотрансфераз. содержание глутаминовой Также близким к изобретению является кислоты в ппазмс спермы как индикаторы способ, использующий данные о взаимосвязи показателей оплодотворяющей способпригодности спермы к глубокому охлаждености спермиев быков и количества 20 нию и показатель нормированного отклонесвободных аминокислот (например, глутания количественных характеристик спермы, миновая) в плазме нативной спермы. свидетельствующий о начале изменений ее Недостатком этого способа является то. качества. что он также не предусматривает оценку При установлении фертильности быка спермиев по их морозоустойчивости, а зна- 25 учитывается общее количество прямопиней-' чит, не пригоден для работы с заморожен- но-подвижных спермиев в среднем из 5 или 10 ной спермой. эякулятов. определяется количество живых Наиболее близким к изобретению являклеток о одной спермодозе; производное ется способ прогнозирования спермопрочастного от этих чисел на коэффициент дукции быков, заключающийся в 30 потерь клеток при замораживании является прогнозировании количества продуцируепотенциальным показателем репродуктивмой ими спермы по числу заготовленных ной функции быка (количество слермодоз со спермодоз от быка за первые 5-10 эякулястандартным содержанием живых клеток за тов. Данный способ прогнозирования недодень использования быка, см. табл. 1). Устэстаточно объективен. Прежде всего, он не 35 новлена четкая корреляционная связь межучитывает количество половых клеток п доду показателями спермы, полученной в зе, которое может варьировать от 10 до 25 первых десяти vi последующих зякулятах (г = млн. в дозе. Следовательно, сравнивать двух =+0,30-0.83). быков, принадлежащих разным племпредпПо показателю нормированного отклориятиям, между собой не представляется 40 нения качественных характеристик (подвижвозможным. Кроме того, он не отражает поность) половых клеток определяют тенциальную биологическую способность изменение тенденции качества спермы (или спермиев переносить технологическую обсперматогенеза) в среднем по всему стаду работку, вследствие чего хорошая сперма при п - 100 и более (табл. 2). может быть выбракована из-за некачествен- 45 " Сохранение закономерностей увелино проведенных технологических операций чения показателей спермопродукции с (разбавление, замораживание, оттаивание и возрастом быков дает возможность рекот.д.). С другой стороны, он не отражает качемендовать уровень спермопродукции перственных различий спермиев, подвижность вых 5-10 зякулятов в качестве наиболее которых после оттаивания может быть раз- 50 раннего критерия отбора быков. Производиной (от 0,5 до 5 и 6 баллов). Кроме того, на тели, которые характеризуются высшими качество спермы и количество заготовленпоказателями первых 5-10 эякулятов, споных спермодоз может существенно повлисобны продуцировать в течение всего периять режим использования быков, который не ода использования значительно большее учитывается. 55 количество спермы. Целью изобретения является прогнозиУвеличение показателя нормированнорование уровня и качества спермопродукго отклонения подвижности клеток на 3ции молодых быков для повышения 12% свидетельствует об изменении (как эффективности племенного отбора произвоправило, ухудшении) качестоэ продуцируедителей. мой спермы. 13368 В плазме, полученной из первых 5-10 эякулятов молодых быков-производителей, центрифугированием (7-8 тыс. об/мин в течение 30 мин или 15 тыс. об/мин в течение 15 мин) определяют актионость аспзртат- и 5 аланинаминотрзнсфераз и количественное содержание глутаминовой кислоты. Поставленная цель достигается тем, что нативная сперма делится на две равные ча- . сти. Одну из них подвергают температурно- 10 му шоку путем погружения в жидкий азот на 1-2 мин, после чего оттаивают. Затем обе части центрифугируют при 7-15 т ы с . . об./мин о течение 30-15 мин, отбирают плазму, разбавляют ее дистиллированной 15 водой в соотношении 1:2 и определяют уровень активности фермента аспартатаминотрансферазы (ACT) в клетках и плазме. По уровню активности ACT в сперме судят о морозоустойчивости последней. При актив- 20 ности фермента 9,0 мкмоль/мл в час ПО'Г деижность нативной спермы составляет 7,5-7,8 баллов, а после оттаивания - 4-4,5 балла. При уровне активности 4-5 мкмоль/мл в час эти показатели равны соот- 25 ветстоенно 5,6-6,2 балла и 2.5 балла после замораживания-оттаивания. Показателем морозоустойчивости клеток служит также количество вышедшего фермента после того, как их подвергли температурному шоку. 30 Чем больше фермента выходит из спермиев и, таким образом, выявляется в плазме, тем ниже их морозоустойчивость. Отношение активности ACT после воздействия холодом в плазме к активности в клетках с хорошей 35 морозоустойчивостью быков 9-10-месячного возраста должно составлять 0,6:1. Существенным признаком способа является определение глутаминовой кислоты в плазме спермы как показателя, характери- 40 зующего способность спермиеп к глубокому охлаждению. Ее определяют на автоматическом аминокислотном анализаторе с предварительным осаждением белков плазмы спермы 15% раствором сульфосалициловой кислоты, центрифугированием при 7-8 тыс. об/мин & течение 30 мин. 'При уровне глутаминовой кислоты в плазме спермы молодых быков до 45 мг на 100 мл биологические показатели спермы низкие и не соответствуют ГОСТ 20909.175-ГОСТ 20909.-6.75. С повышением уровня глутаминовой кислоты такие показатели качества спермы, как подвижность, морозоустойчивость и выживаемость клеток, повышаются и при уровне 55 мл и выше на 100 мл соответствуют ГОСТ. Пр и м е р . При содержании глутаминовой кислоты в плазме спермы быков двух групп в среднем 40-43 мг/100 мл подвижность клеток составляла 4-6 баллов, зэмораживаемость 2 балла и выживаемость 2,6-2,8 ч. С повышением концентрации глутаминовой кислоты до 60-70 мг/100 мл подвижность нативных клеток составила 8 баллов, замороженно-оттаянных - 3,5-4,0 балла и выживаемость 4-5 ч, что соответствует принятым ГОСТ (табл. 3). Количественное содержание глутаминовой аминокислоты в плазме спермы положительно коррелирует с показателями морозоустойчивости спермиев. Коэффициент корреляции с подвижностью спермиев после размораживания +0,54 (р