Спосіб отримання діагностичної сироватки до вірусу чуми м’ясоїдних

Спосіб отримання діагностичної сироватки проти вірусу чуми м'ясоїдних, який включає триразову імунізацію великої рогатої худоби почергово: 35684 витрати на утримання донорів і високоактивних сироваток для серологічних реакцій, та отримання специфічних діагностичних сироваток всього за 29-35 днів, активність їх у реакції дифузної преципітації становить - 12,4 ±0,09 лог2, в реакції радіальної імунодифузії - 15,3±0,08 лог2, в реакції нейтралізації - 11,15±0,03 лог2. Цей спосіб дозволяв одночасно отримувати 1,5-3,0 л сироватки за один прийом, експлуатувати донора 2-3 роки. Концентрування антигену поліетиленгликолем і введення його безпосередньо в лімфатичні вузли і внутрішньовенно забезпечує невисоку кратність імунізацій - три введення, і отримання високоактивної специфічної сироватки на 29-35 день після першої імунізації. Таким чином, відмінність даного способу імунізації від відомого (прототипу) полягає в наступному: 1. Інактивація концентрованого вірусу антигену формаліном забезпечує екологічну чистоту отримання продукту (гіперімунної сироватки). 2. Скорочення терміну отримання цільового продукту з 70-90 днів до 29-35 днів. 3. Концентрування вірусного антигену поліетиленгликолем (ПЕГ-115) замість гідроокису алюмінію, підвищує концентрацію вірусного антигену порівняно з прототипом в 10-100 разів. 4. Введення вірусного антигену безпосередньо в лімфатичні вузли і внутрішньовенно скорочує кратність щеплень до трьох. 5. Застосування масляного ад’юванту на основі вазелінового масла (з емульгатором ланоліном) замість глікозидного ад’юванту сапоніну збільшує титр антитіл на 4-5 розведень. Приклад 1. Отримані дані (таблиця 1) свідчать про те, що відпрацьований спосіб імунізації великої рогатої худоби дозволяє отримувати за 29-35 днів специфічні, високоактивні імунні сироватки, які можна використати для виготовленню діагностичних і лікувальних препаратів. Майже в 2,5-3 рази скорочується термін отримання цільового продукту, прийому титри преципітинів і нейтралізуючих антитіл є достовірно вищими порівняно з прогином. Кількість комплементзв’язуючих антитіл приблизно на однаковому рівні при обох способах. Запропонований спосіб дозволяє отримати не тільки високоактивну гіперімунну сироватку з широким спектром противірусних антитіл, а й зважаючи на масу донора, достатню кількість сироватки за 1 технологічний прийом відбору крові (1,5-3,0 л сироватки). Отже, запропонований метод імунізації забезпечує екологічну чистоту отримання продукту, концентрування вірусного антигену, а введення його безпосередньо в лімфатичні вузли і внутрішньовеннj різко зменшує термін отримання цільового продукту при значному збільшенні об’єму отриманих діагностичних сироваток, що особливо важливо для біофабрик і науково-дослідних установ. При розробці схеми імунізації великої рогатої худоби за запропонованою схемою були використані віруси хвороби Ауескі і чуми великої рогатої худоби (таблиця 2), тому запропонований спосіб може бути використаний у виробництві діагностичних і лікувальних гіперімунних сироваток при інших інфекціях. Як видно з прикладів 2 і 3 наведених у таблиці 2, запропонований спосіб може бути з успіхом використаний при виготовленні специфічних гіперімунних сироваток при інших інфекціях. Активність отриманих сироваток задовольняє потреби при виготовленні діагностичних і лікувальних препаратів. Джерела інформації 1. Способ получения диагностической сыворотки к вирусу болезни Ауески. Патент РФ. По заявке № 5051099-14 от 12.03.94 г. Мищенко В.А., Корниенко Л.Е., Костюченко М.Г., Белоконь B.C., Корниенко Л.Н. 2. Способ получения диагностической сыворотки к вирусу болезни Ауески. Патент РФ. По заявке № 5065519-14 от 8.10.94 г. Ми щенкоВ.А., Корниенко Л.Е., Корниенко Л.Н., Костюченко.Г., Смирнов А.Б., Базаров М.Б ., Белоконь B.C. 3. Старов O.K., Дудников Л.А., Сарбасов А.Б., Сверчков Е.В., Гусев А.А., Толокнов А.С., Котоева Г.И. Получение лечебно-профилактического глобулина против вируса чумы плотоядных / Вирусные болезни сельскохозяйственных животных: тезисы докладов Всероссийской научнопрактической конференции. - Владимир, 1995. – с. 158 4. Дибиров Ш.С., Карпов Г. М., Ви шняков И.Ф. Получение сывороток свиней против вируса чумы плотоядных и их использование в диагностике данной болезни / Вирусные болезни сельскохозяйственных животных: Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции. Владимир. 1995. - с. 62 5. Zaghawa A., Liess B., Frey H.R. Antigserum Raised in Pigs against Canine Distemper virus and its Utility in Diagnostics Procedures for Morbillivirus Infections // J. veter. Med. 1990. – B. 37. - № 5. – p. 353-362 2 35684 Таблиця 1 Активність гіперімунних сироваток, отриманих з використанням різних схем імунізації Імунізація донорів, спосіб: Запропонованим способом Описаним способом Тривалість імунізації, днів РДП Активність сироваток (лог2), n=6 РРІД РЗК 29-35 12,4±0,09 15,3±0,08 8,0±0 11,15±0,02 70-90 7,3±0,11 11,0±0 8,35±0,07 9,1±0,06 PH Таблиця 2 Активність гіперімунних сироваток за запропонованою схемою імунізації при інших інфекціях Активність сироваток (лог2), n=3 РДП РРІД РЗК PH Приклад 2 5,5±0,09 8,9±0,11 7,35±0,1 8,9±0,04 Приклад 3 4,8±0,03 7,61±0,12 8,01±8,08 6,3±0,02 Примітка: Приклад 2 – запропонованим способом з антигеном вірусу хвороби Ауескі Приклад 3 - запропонованим способом з антигеном вірусу чуми великої рогатої худоби Імунізація донорів __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3