Спосіб визначення впливу речовини на нуклеїнову кислоту

Спосіб визначення впливу речовини на нуклеїнову кислоту, що включає формування рідиннокристалічної дисперсії з нуклеїнової кислоти, який відрізняється тим, що висушуванням розчину суміші нуклеїнової кислоти й речовини формують рідиннокристалічну дисперсію та одержують плівку з відповідними текстурами і по величині відношення площі текстурованої плівки до площі всієї плівки роблять висновок про вплив речовини. (19) (21) u200701532 (22) 13.02.2007 (24) 10.09.2007 (46) 10.09.2007, Бюл. № 14, 2007 р. (72) Глибицький Геннадій Марксович, Красницька Алла Абрамівна (73) ІНСТИТУТ РАДІОФІЗИКИ ТА ЕЛЕКТРОНІКИ ІМ. О.Я. УСИКОВА НАЦІОНАЛЬНОЇ АКАДЕМІЇ НАУК УКРАЇНИ 3 phases in concentrated aqueous solutions of Na+DNA. // Biophysics, Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1986. - Vol.83. - P.342-346; Т.Е. Strzelecka, Davidson M.W., R.L. Rill. Multiple liquid crystal phases of DNA at high concentration. // Nature. - 1988. Vol.331. - P.457-460]. Упорядкування напівтвердих полімерів при високих концентраціях відбувається спонтанно й з метою мінімізації виключеного обсягу. Поводження напівтвердих поліелектролітів ускладнюється необхідністю існування захисної зарядженої оболонки. Сильні поліелектроліти оточуються протиіонним шаром, що визначає ефективне осьове відношення й виключений обсяг. Завдяки тому, що фазова поведінка біополімеру залежить від його ефективного обсягу, критична концентрація для впорядкування молекул НК є функцією іонної сили й типу протиіонов. Відомі наступні механізми зменшення ефективного обсягу НК: - зміна до більше впорядкованої фази; - ущільнення протиіонного шару; - зміна конформації НК; - зміни в гідратній оболонці. Останні два фактори залежать від рівня вологості й температури навколишнього середовища. Завдяки тому, що зазначені фактори безпосередньо впливають на характер упорядкування молекул НК у розчині, і, отже, на формування текстури на плівці одержуваної з розчинів НК, то по характеру отриманої текстури можна зробити попередні висновки про здатність досліджуваної речовини сприяти формуванню в концентрованому розчині нуклеїнової кислоти РК фази, або гальмувати формування РК фази. При випарюванні води поступово концентрація НК у розчині наближається до величини, достатньої для утворення РК фази; з іншого боку, процес випарювання вологи з розчину веде до дегідратації молекул НК, що перешкоджає утворенню РК фази. Крім того, фактором, що сприяє або перешкоджає утворенню РК фаз є присутність у розчині молекул речовин, вплив яких на НК і є предметом вивчення. Якщо присутність речовини сприяє виникненню дисперсії, то формується більший об’єм РК фази, якщо присутність речовини не сприяє виникненню дисперсії - то утвориться менший об’єм РК фази при тих самих умовах навколишнього середовища (вологості й температури). Таким чином, відповідні площі текстур на висушеній плівці будуть більше або менше по величині; величина площі текстур на поверхні плівки є функцією властивостей речовини, що впливає на НК і яка перебуває у розчині, з якого отримана плівка. Заявлений спосіб здійснюється таким чином. 26115 4 В кювету наливають розчин НК з досліджуваною речовиною. Висушують розчин до формування дисперсії; подальшим висушуванням одержують в кюветі плівку з текстурою, площа якої відповідає обсягу РК фази у сформованої дисперсії. Обчислюють величини площі всієї плівки, що визначається площею кювети, та площі текстур на плівці. Обчислюють відношення площі текстур на плівці до площі всієї плівки. По величині відношення роблять висновок про вплив речовини на НК. Приклад 1. Визначення впливу солі NaCl на НК. Висушуванням розчину, що містить суміш солі NaCl з концентрацією 0,01М і Na-ДНК з концентрацією 0,02мг/мл при Т=40°С та відносної вологості Н=20% одержана плівка з площею Sп=441мм2. Площа текстур на плівці S T=132мм2, Фіг.1. Sт/Sп=0,299. Приклад 2. Визначення впливу солі КСl на НК. Висушуванням розчину, що містить суміш солі КСl з концентрацією 0,01М і Na-ДНК з концентрацією 0,02мг/мл при Т=40°С та відносної вологості Н=20% одержана плівка з площею Sп=441мм2. Площа текстур на плівці S T=6,7мм2, Фіг.2. ST/SП=0,015. Приклад 3. Визначення впливу солі RbCl на НК. Висушуванням розчину, що містить суміш солі RbCl з концентрацією 0,01М і Na-ДНК з концентрацією 0,02мг/мл при Т=40°С та відносної вологості Н=20% одержана плівка з площею SП=441мм2. Площа текстур на плівці S T=5.24мм2, Фіг.3. ST/SП=0,012. Приклад 4. Визначення впливу солі СаСl2 на НК. Висушуванням розчину, що містить суміш солі СаСl2 з концентрацією 0,01М і Na-ДНК з концентрацією 0,02мг/мл при Т=40°С та відносної вологості Н=20% одержана плівка з площею SП=441мм2. Площа текстур на плівці S T=2,61мм2, Фіг.4. ST/SП=0,006. Таким чином, найбільш сприятливим для природного укладання НК єрозчин з сіллю NaCl, найменш сприятливим є розчин з сіллю СаСl2. Для дослідження текстур плівок, одержуваних з розчинів НК при різних рівнях вологості й температурах, була створена герметична камера, що містить термометр, гігрометр і камеру для кювети з розчином. Герметична камера містить патрубки для прокачування через неї повітря й розташована в термостаті; через допоміжні отвори термостата з’єднується з витратоміром повітря, манометром і вакуумним насосом. 5 Комп’ютерна верстка І.Скворцова 26115 6 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601