Живильне середовище для культивування лептоспір

Живильне середовище для культивування лептоспір, що містить фосфатний буферний розчин та компоненти червоної крові кролів, яке відрізняється тим, що як компонент червоної крові використовують приготовлений з відходів крові гемолізат, у кількості 5,0-6,0 об. % до загального об'єму буферного розчину. (19) (21) u200701634 (22) 16.02.2007 (24) 10.09.2007 (46) 10.09.2007, Бюл. № 14, 2007 р. (72) Савченко Борис Іванович, Могілевський Лев Якович, Третякова Людмила Вікторівна, Малинівська Броніслава Петрівна (73) УКРАЇНСЬКИЙ НАУКОВО-ДОСЛІДНИЙ ПРОТИЧУМНИЙ ІНСТИТУТ ІМ. І.І.МЕЧНИКОВА 3 26116 4 кількості 5-6об.% до забуференої основи живильбачено видалення із отриманого продукту залишного середовища. ків трипсину, що може привести до порушення Задача вирішується наступним чином. До згуслептоспір, які являються високочутливими до хімітків крові, що залишилися в ємностях після відбочних речовин, що негативно відзначиться на зрості ру кролячої сироватки, вносять 2-3 об'єми добролептоспір. якісної дистильованої води відносно до об'єму Відомий [Патент SU №1207140 МПК 7 відібраної сироватки. Стерилізацію гемолізованої C12N1/20, C12Q1/04, [3]], який був обраний в якоскрові проводять фільтрацією через керамічні свічті прототипу, автори якого пропонують в якості ки Шамберлена. Перевіряють стерильність отриосновного компоненту у живильне середовище маної гемолізованої крові, визначають стимулюювносити 0,025-0,1об.% непорушених еритроцитів чу ростову активність. Ростову якість кроля (еритроцитарну масу) та одну із жирних кисгемолізованої крові перевіряють методом пропорлот - мірістинову, пальметинову або стеаринову, ційно зростаючих концентрацій гемолізату у буфекотрі додають до рідкого живильного середовища рному розчині, аналогічно до методу описаного у на забуференій основі. Але цей метод має суттєві [заявці № U200613105 від 11.12.2006 «Спосіб винедоліки. По-перше, це середовище можливо виготовлення живильного середовища для культивукористовувати тільки для ізоляції вірулентних лепвання лептоспір»]. Для приготування гемолізату, тоспір. Свіжоізольовані від людини, або від тваризазвичай використовують свіжо відібрану цільну ни патогенні лептоспіри мають у своєму складі кров кроля донора, котру вносять у дистильовану гемолізини, які спроможні визвати гемоліз еритроводу (тобто без відділення сироватки, що сама по цитів, що сприяє виходу у живильне середовище собі є цінним препаратом). речовин, необхідних для росту лептоспір. В той же В запропонованій корисній моделі кров для час музейні штами, якими користуються для сероодержання гемолізованої крові та кролячої сирологічної діагностики лептоспірозів за довгі роки ватки використовують відходи виробництва при вирощування їх на штучних середовищах втратипромисловому забої кролів. Кров збирають у скляли патогенність та спроможність гемолізувати ерині ємності 3,0-5,0л., де вона згортається впродовж троцити у живильних середовищах, тому еритро5-7 годин. Сироватку відділяють центрифугуванцити у живильному середовищі залишаються ням. Згустки крові подрібнюють, додають дистинепорушеними, викоритовувати це середовище льовану воду, охолоджують до +4°С та витримуможливо тільки для культивування патогенних ють добу. Відбирають світло-рожеву, або темно лептоспір. В той же час, лабораторії використовучервону рідину (гемолізована кров), центрифугують, основним чином, антигени живих культур леють та відділяють осад. Незначне забарвлення птоспір музейних непатогенних штамів для сероживильного середовища при внесенні визначеної логічної діагностики лептоспірозів, визначення кількості гемолізованої крові не відбивалось негазбудника захворювання та визначення титрів антивно при врахуванні РМА. Проводять стерилізатитіл в сироватках хворих на лептоспіроз. Таким цію гемолізату за допомогою керамічних свічок чином, використання запропонованого живильного Шамберлена при негативному атмосферному тиссередовища тільки для ізоляції патогенних штамів кові. Після стерилізації відбирають гемолізовану є недоцільним. До того ж, в лабораторії необхідно кров для перевірки стерильності та визначення постійно тримати живого кроля - донора крові. Біростової якості гемолізованої крові. Перевірка росльшість практичних лабораторій мають справу з тової якості гемолізату виявила, що оптимальна музейними штамами лептоспір діагностичного концентрація у складі буферного розчину Терських набору, які використовують в якості антигену для для вирощування музейних та патогенних лептопостановки серологічної реакції мікроаглютинації спір складає 5-6об.%. Результати порівняльного (РМА). аналізу заявленого рішення та прототипа наведені У зв'язку з виявленими недоліками живильноу табл.1. му середовищі прототипа задачею живильного Таким чином, заявлене живильне середовище середовища для культивування лептоспір є виявмало в 2-2,5 раз вищу біологічну активність, ніж лення біологічної речовини із стимулюючою актиживильне середовище прототипа, сприяло зберівністю, додавання якої могло б у невеликій кількоганню лептоспір з типовою морфологією у життєсті сприяти росту культур лептоспір (як здатному стані та за показників ростової якості є патогенних, так і музейних), була простою для адекватним замінником сироватки кролів. Повна одержання та дешевою у виробництві з перевірепереробка отриманої сировини крові кролів в проною ростовою якістю. мислових умовах сприяє підвищенню економічного Поставлена задача досягається тим, що із відефекту у 2-3 рази. Гемолізовану кров із згустів ходів згортків крові кролів, що лишаються після можливо отримувати також в лабораторних умовідбору цінної біологічної речовини - кролячої сивах санепідстанцій, що спеціалізуються на діагнороватки, одержують гемолізат, який додають у стиці лептоспірозів. 5 26116 6 Таблиця 1 Визначення стимулюючої активності заявленого складу живильного середовища Музейні штами лептоспір 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10 11. 12. 13. Icterohaemorrhagiae Javanica Canicola Ballum Pyrogenes Cynopteri Autumnalis Australis Pomona Grippotyphosa Hebdomais Bataviae Tarassovi Кількість мікроорганізмів в полі зору мікроскопу на 10 добу Буферний розчин + еритроцити (прототип) Заявлене середовище 50-100 200-300 80-100 150-200 50-100 100-200 80-100 150-250 50-80 100-150 50-70 100-150 70-100 150-200 80-100 150-200 50-100 100-200 50-70 150-200 50-80 100-200 80-100 150-200 50-70 100-150 Джерела інформації: 1. Бернасовская Е.П., Угрюмов Б.Л., Вовк А.Д., Могирева Л.А. и др. в кн. Лептоспирозы. Киев "Здоровье" 1978, с.35. 2. Патент РФ 96123058 A, 6C12N1/20, А61К39/02 "Способ приготовления питательной среды для культивирования лептоспир". Комп’ютерна верстка В. Мацело 3. Патент SU 1207140 7 C12N1/20, C12Q1/04 "Питательная среда для выращивания патогенных лептоспир". 4. Заява на корисну модель №u200613105 від 11.12.2006. «Спосіб виготовлення живильного середовища для культивування лептоспір». Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601