Спосіб визначення ювенільного гормону у культуральному середовищі

Спосіб визначення ювенільного гормону (ЮГ) у культуральному середовищі, що передбачає інкубацію клітин Drosophila melanogaster in vitro у 3 27011 Даний метод дозволяє визначити у розчині чи у живильному середовищі наявність ЮГ чи його аналога, а також визначити активну концентрацію гормонального препарату. Оскільки гормон нерозчинний у воді, використовують органічні розчинники, зокрема, 1%-ний розчин диметилсульфоксиду (DMSO). Приклади використання способу, що заявляється: Приклад 1. Метою дослідження було визначити за допомогою запропонованого способу активність синтетичного аналога ЮГ - метопрену (ювемону). 4 Слинні залози О-годинних перед лялечок дрозофіли витримували у 1%-ному розчині DMSO, що містив метопрен у концентрації 1мкг/мл при 25°С на протязі 30хв. Потім на давлених ацетоорсеїнових препаратах досліджували пуфінг політенних хромосом. Було встановлено наявність пуфів у індикаторних локусах та визначені їх розміри по відношенню до близько розташованого диску, не залученого у процес пуфіювання (відношення пуф/диск) (табл.1). Таблиця 1 Вплив метопрену на активність пуфів політенних хромосом дрозофіли Розміри пуфів (відношення пуф/диск) 1,83±0,06 1,33±0,04 1,20±0,06 1,32±0,05 Пуф/диск 43Е/44А 58DE/58A 60В/60С 85D/85B Усього у даному експерименті було досліджено по 20-25 пуфів у кожному з указаних локусів політенних хромосом. Таким чином, за здатністю викликати активність пуфів у індикаторних локусах політенних хромосом показано, що метопрен є біологічним аналогом ЮГ. Приклад 2. Метою дослідження було встановити за допомогою запропонованого способу порогову концентрацію метопрену, при якій даний гормональний препарат проявляє свою біологічну дію. Досліджували вплив гормону на пуфінг політенних хромосом слинних залоз 0-годинних перед лялечок дрозофіли у концентраціях 0,1мкг/мл та 1мкг/мл. Одержані дані представлені у таблиці 2. Таблиця 2 Вплив різних концентрацій метопрену на активність пуфів політенних хромосом дрозофіли Пуф/диск 43Е/44А 58DE/58A 60В/60С 85D/85B Розміри пуфів (відношення пуф/диск) Дослід 1 Концентрація метопрену 0,1мкг/мл 1,74 ± 0,05 1,04 ±0,10 0,68 ± 0,10 1,42 ± 0,10 Отримані результати свідчать про те, що при концентрації метопрену 1 мкг/мл активуються пуфи в усіх досліджених локусах політенних хромосом, тоді як при концентрації гормону 0,1мкг/мл пуфи активуються лише у локусах 43Е і 85D, а у локусах 58DE і 60В спостерігали лише первинні етапи формування пуфів, що проявлялось, в основному, у розпушенні та зникненні диску, при цьому збільшення діаметру хромосом, як правило, не спостерігали. Дослід 2 Концентрація метопрену 1мкг/мл 1,83 ± 0,06 1,33 ± 0,04 1,20 ± 0,06 1,32 ± 0,05 Отримані дані дозволяють зробити висновок, що пороговою для метопрену є концентрація 1мкг/мл. Джерела інформації 1. Какпаков В.Т., Шамшурин А.А., Спектор В.И., Мунтян Г.Е. Подавление роста длительно пересеваемых линий эмбриональных клеток дрозофилы под действием гормонов насекомых и циклического АМФ // Физиология и биохимия животных. -1974. №3. - С. 67-71. 5 Комп’ютерна верстка Л. Купенко 27011 6 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601