Спосіб збереження препаратів кліща demodex у зіскобах

1. Спосіб збереження препаратів кліща demodex у зіскобах на липку стрічку, який відрізняє ться тим, що на предметне скло по краю липкої стрічки наносять смужку 50 %-го водного розчину гліцерину, потім кліща переносять зі шматочком плівки в краплю 50 %-го розчину гліцерину на предметне скло, а потім очищеного від стрічки кліща переносять у краплю 50 %-го розчину гліцерину під покривне скло. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що використовують соняшникову олію. (19) (21) u200709201 (22) 13.08.2007 (24) 25.01.2008 (72) БОДНЯ КАТЕРИНА ІГОРІВН А, U A, КОЛЕСНИК КАТЕРИНА ІВАНІВН А, UA, РЕВЕНКО ЖАНЕТТА АНАТОЛІЇВНА, U A, БОЛОТОВА СВІТЛАН А ВОЛОДИ МИРІВНА, U A (73) ХАРКІВСЬКА МЕДИЧНА АКАДЕМІЯ ПІСЛЯДИПЛОМНОЇ ОСВІТИ, U A (56) 3 29655 кліща переносять зі шматочком плівки в краплю 50%-го розчину гліцерину на предметне скло, а потім очищеного від стрічки кліща переносять у краплю 50%-го розчину гліцерину під покривне скло. Можливе використання соняшникової олії замість розчину гліцерину. Соняшникова олія - рідкий жир, що легко проникає під плівку, доступний, але на повітрі може загустіти, а при тривалому збереженні псуватися (прогоркать). Гліцерин - трьохатомний спирт, обов'язкова складова жирів і олій. У невеликих кількостях міститься в крові тварин. Добре проникає під плівку, не псується при збереженні. Обидві речовини при контакті з клейкою речовиною стрічки утворюють прозорий шар, що не перешкоджає спостереженню, але клейкі властивості стрічки при цьому цілком губляться. Спосіб, що заявляється, здійснюють таким чином. Позитивні зіскрібки на липкій стрічці поміщають у чашку Петрі. На предметне скло по краї липкої стрічки наносять смужку 50%-го водяного розчину гліцерину чи соняшникової олії так, щоб край стрічки стикався з рідиною по всій довжині. Через 30-40 хвилин можна додати ще небагато гліцерину чи олії і залишити просочуватися. При цьому не можна піднімати стрічку, відокремлювати її від скла, - це може зашкодити препарат. Препарат можна зберігати у відкритій чашці Петрі при кімнатній температурі, бажано, однак, прикрити чашку Петрі листом папера для запобігання препарату від улучення пилу. Для готування препарату кліща Demodex під покривним склом необхідний зіскрібок з живим (рухливим) демодексом. Спочатку зіскрібок переглядають, відзначають місцезнаходження демодекса і додають 50%-й водяний розчин гліцерину так само, як для збереження демодекса під липкою стрічкою. Зіскрібок залишають на 1-1,5 години для проникнення розчину гліцерину під плівку. При цьому стрічка утрачає свої клейкі властивості і сама легко відстає від скла. Ділянку стрічки з демодексом за допомогою пінцета відокремлюють від скла і переглядають під мікроскопом, щоб переконатися, що демодекс залишився на стрічці. Відрізають шматочок стрічки з демодексом і переносять його на чисте предметне скло в краплю 50%-го водяного розчину гліцерину. Потім дуже обережно, постійно контролюючи роботу під мікроскопом, відокремлюють демодекса від стрічки і прикривають краплю гліцерину з демодексом покривним склом. Злегка постукуючи по покривному склу дерев'яною паличкою, придавлюють препарат (під мікроскопом) для того, щоб гліцерин розподілився рівномірно і кліщ прийняв потрібне положення. Усі маніпуляції під мікроскопом дуже тривалі і кропіткі. Через добу препарат переглядають і при необхідності знову злегка піддавлюють. Якщо 4 цього не зробити, демодекс може повернутися боком чи зжатися, тоді будову кліща буде погано видно. Приклад 1.8.12.2006р. позитивні зіскоби, отримані від пацієнта Л. (8.12.2006, №493), були поміщені в двох чашок Петрі по два зіскоба в кожну. В одній чашці Петрі під стрічку зіскоба була додана соняшникова олія, в іншій - 50% розчин гліцерину. Чашки Петрі зберігалися в умовах кімнатної температури і вологості. Тому що дослідження було попереднім і ставило своєю метою визначити можливість і максимальний термін збереження кліща Demodex в описаних умовах, то кількість, зміни форми, розміру і фарбування особин оцінювалися тільки візуально. Одночасно досліджувалися розходження якості збереження в соняшниковій олії і гліцерині. Зіскрібки проглядалися 11.12.2006, 20.12.2006, 11.01.2007, 17.01.2007 і 23.01.2007р. У вихідних зіскобах були виявлені в основному особи Demodex folliculorum hominis brevis різного ступеня збереженості: - загиблі ушкоджені - близько 1/3 загальної кількості; - загиблі неушкоджені - близько 1/2 загальної кількості; - живі, що зберегли рухливість - близько 1/6 загальної кількості. При переглядах 11.12.2006 і 20.12.2006 у зіскобах зустрічалися ушкоджені і неушкоджені особи приблизно в колишньому співвідношенні. В обох речовинах результати були приблизно однакові, тільки в 50% розчині гліцерину структури кліща виглядали трохи світліше. Плівка помітно не змінилася. При перегляді зіскобів 11.01.2007 в обох речовинах виявлялися неушкоджені особи, кількість ушкоджених особин зменшилася. Плівка зберегла прозорість, але трохи розбухн ула, що ускладнило перегляд зіскобів. 17.01.2007. В обох речовинах були добре видні особи кліща і плівка була прозорою. У соняшниковій олії плівка злегка підсохла і здавалася не такою набряклою. 23.07.2007. У соняшниковій олії препарат виглядав злегка мутним, але кліщі видні досить чітко. Деякі особи злегка зжалися. У гліцерині прозорість препарату помітно не змінилася, кліщі видні чітко. В обох речовинах зустрічаються неушкоджені й особи, що руйн уються. Таким чином, у зіскобах на липкій стрічці за допомогою соняшникової олії чи 50%-го водяного розчину гліцерину можливо зберегти препарат кліща Demodex folliculorum hominis brevis практично без видимих змін протягом 47 діб (з 8.12.2006 по 23.01.2007). Приклад 2. 17.01.2007 із зіскоба пацієнтки С (№20, 17.01.2007) отриманий кліщ Demodex (longus) живий (рухливий). Після додавання під плівку 50%-го розчину гліцерину зберігав рухливість протягом 3,5 годин. Потім кліщ був перенесений зі шматочком плівки в краплю 50%-го розчину гліцерину на предметне скло, а потім перенесений у краплю 50%-го розчину гліцерину 5 29655 під покривне скло, очищений від стрічки. Місцезнаходження кліща відзначене маркером. Усі маніпуляції виконувалися дуже обережно, у результаті чого кліщ під покривним склом зберіг рухливість. 19.01.2007 при першому перегляді препарату кліщ був злегка стиснутий посередині тіла, але не ушкоджений. Після легкого натиснення на покривне скло кліщ "розправився", але на кінці черевця з'явилася тріщина в зовнішньому покриві. 23.01.2007. Кліщ видний чітко. Подальшого руйнування, крім того, що вже було, не спостерігається. Отримано препарат кліща Demodex у 50%-м водяному розчині гліцерину під покривним склом. Препарат зберігався 7 днів (з 17.01 до 23.01.2007). Таким чином, запропонований спосіб дозволяє збільшити термін зберігання кліща для проведення наступної діагностики, а також для навчання кадрів для лабораторної діагностики даного захворювання. 6