Спосіб приготування повітряно-сухих препаратів яйцеклітин ссавців

Спосіб приготування повітряно-сухих препаратів яйцеклітин ссавців шляхом гіпотонічної об Винахід належить до області біологи, медицини та сільського господарства і може бути використаний при цитологічних дослідженнях яйцеклітин ссавців Відомо спосіб приготування тотальних препаратів яйцеклітин /І/, то передбачає гіпотонічну обробку попередньо очищених від клітин фолікулярного епітелію /кумулюсу/ яйцеклітин їх монтування у гіпотонічному розчині на предметному склі з наступною фіксацією, шляхом додавання краплини фіксатора до того моменту, поки не випарувався ГІПОТОНІЧНИЙ розчин Як наслідок, яйцеклітина розпластується й фіксується на предметному склі Для аналога характерне передування видалення клітин кумулюсу ГІПОТОНІЧНІЙ обробці та фіксація яйцеклітин безпосередньо після гіпотонічної обробки на предметному склі Найбільш близьким технічним рішенням є спосіб /2/, за яким яйцеклітини очищають від кумулюсу, піддають ГІПОТОНІЧНІЙ обробці, фіксують у сильно охолодженому фіксаторі певного ХІМІЧНОГО складу, переносять із краплиною цього ж фіксатора на охолоджене предметне скло, додають краплину пом'якшуючого розчину до того моменту, коли фіксатор повністю випарується, після чого остаточно фіксують на предметному склі Недоліком цього прототипу є необхідність низької температури фіксації /-20°С/, що вимагає спеціального обладнання та короткий відрізок часу для розміщення яйцеклітини на предметному склі, що залишається до висихання фіксатора та послідуючого нанесення пом'якшувача Результатом цього є ускладненість процесу фіксації та розмішення фіксованої яйцеклітини на предметному склі робки, фіксації, монтування на предметному склі, обробки пом'якшувальною сумішшю та остаточної фіксації, який відрізняється тим, що фіксацію яйцеклітин проводять гідротермічним способом, а монтування яйцеклітин на предметному склі виконують у середовищі гліцерину Задачею способу, що пропонується, є спрощення процесу фіксації та розміщення яйцеклітини на предметному склі шляхом проведення фіксації гідротермічним способом, а розміщення яйцеклітини на предметному склі у середовищі, що не висихає Поставлена задача вирішується за рахунок того, що фіксацію яйцеклітин проводять у гарячій дистильованій воді при температурі 90 95°С на протязі 30-60 секунд, після чого яйцеклітини звільняють від кумулюсу та переносять у гліцерин, в якому и і розміщують на предметному склі протягом часу, що не лімітується Аналіз співставлений, що заявляється, з прототипом показує,що перший відрізняється від відомого тим, що фіксацію яйцеклітин проводять у гарячій дистильованій воді, а її розміщення на предметному склі перед обробкою пом'якшувачем проводять у гліцерині Приклад конкретного виконання способу Шість ооцит-кумулюсних комплексів одержали з яєчників свиноматки та промили їх в ізотонічному розчині Після ЦЬОГО їх зафіксували перенісши у МІНІ - чашку з гарячою /близько 90° С/ дистильованою водою Після охолодження води, ооцити очистили від клітин кумулюсу піпетуванням Усі ШІСТЬ ооцитів зібрали мікропіпеткою і ввели у краплину гліцерину Після ЦЬОГО ВСІ ООЦИТИ знову зі брали мікропіпеткою і перенесли на предметне скло, де розташували в одну ЛІНІЮ Піпеткою нанесли краплину пом'якшувального розчину Унаслідок цього ооцити розпласталися Не чекаючи повного висихання попереднього реактиву, додали краплину фіксатора Залишки вологи акуратно видалили фільтрувальним папером Після процедури фарбування, виконаної рутинним способом, ю З 51124 4 препарат був готовий для мікроскопічного дослі-1996-5-ИЗ-Р 394-400, дження 2 Dyban A P, An improved method for chromoДжерела інформації some preparation from preimplantation mammalian 1 Tarkowski A K, An air drying method for chroembryos, oocytcs or isolated blasto -mers// Stain mosome preparation from mouse eggs //Citogenetics, Technology -1983,- 58 ,- №2 - P,69-72 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71