Спосіб моделювання резистивної форми епілепсії

Спосіб моделювання резистивної форми епілепсії, який включає застосування речовин з епілептогенною дією та відрізняє ться тим, що призначають щоденно внутрішньочеревне введення пікротоксину дозою 1,0-1,2 мг/кг протягом трьох тижнів, і після наступної тритижневої перерви у введеннях епілептогену застосовують внутрішньошлуночково каїнову кислоту дозою 4,8-5,0 мкг. (19) (21) 98063261 (22) 23.06.1998 (24) 15.12.2000 (33) UA (46) 15.12.2000, Бюл. № 7, 2000 р. (72) Брусєнцов Олександр Іванович, Шандра Олексій Антонович, Годлевський Леонід Семенович, Вастьянов Руслан Сергійович, Мороз Василь Володимирович, Супрун Світлана Олександрівна, Помазанова Тетяна Миколаївна, Жуковський В'я чеслав Іванович, Сохань Станіслав Євгенович 30942 щення порогу антиепілептичної дії відповідних препаратів. Потрібно зазначити, що відповідно до цього способу фармакорезистентність є вибірковою і визначається у відношенні до впливу лише деяких антиепілептичних препаратів, в той час як, наприклад, вплив карбамазепіну не змінюється (власний досвід). Тобто за умов відтворення резистивної форми епілепсії згідно зі способом-прототипом є змога відтворення лише певних форм резистивності, що може бути пов’язане зі специфічними механізмами впливу пікротоксину на організм експериментальної тварини. Таким чином, спосіб-прототип не відображує загальнопатологічних механізмів виникнення та розвитку фармакорезистивності експериментальної епілепсії. В основу винаходу покладене завдання вдосконалення способу моделювання резистивної форми епілепсії, в якому на першому етапі відтворюють хронічну форму епілепсії шляхом повторного застосування підпорогової дози пікротоксину, а потім викликають генералізовану форму судом шляхом введення агоністу рецепторів збуджуючих амінокислот (каїнової кислоти в дозі 5,0 мкг). Поставлене завдання вирішується таким способом. Статевозрілим щурам лінії Вістар масою 270-320 г внутрішньочеревно щоденно однократно застосовують розчин пікротоксину (Sigma, США) виходячи із розрахунку 1,2 мг/кг. Спостерігають виникнення клонічних судом після третьої-пятої ін’єкції препарату. Ще через 5-7 ін’єкцій судоми охоплюють всі м'язи тулуба і передні кінцівки, а після 15-17-ї ін’єкцій виникають генералізовані клоніко-тонічні судоми. Введення пікротоксину продовжують до 21-ї доби. Відбирають тих щурів, у яких спостерігались повторні генералізовані судоми на останні три ін'єкції епілептогену. Після перерви у введеннях (три тижні) за допомогою мікроін'єктора (Hamilton, США) в об'ємі 5,0 мкл фосфатного буферного розчину в бокові шлуночки через попередньо імплантовану канюлю роблять ін'єкцію розчину каїнової кислоти в дозі 5,0 мкг. Спостерігають виникнення через 2-5 хв з моменту ін'єкції клонічних судом окремих гр уп м'язів, які згодом охоплюють всі гр упи м'язів, виникає тоніко-клонічний приступ з порушенням рівноваги, падінням тварин на бік та вегетативними розладами. Такі генералізовані прояви носять повторний характер і закінчуються летальним виходом у 75% експериментальних тварин. Визначення ED50 класичних антиепілентичних препаратів за умов каїнат-індукованих генералізованих судом свідчить про збільшення їх дози порівняно з такою, яка є ефективною по відношенню до каїнат-індукованих (20 мкг, внутрішньошлуночково) генералізованих судом у інтактних тварин в 2,5-8,3 рази. Наприклад, за умов відтворення запропонованої моделі резистивної епілепсії ED50 фенобарбіталу збільшувалась в 8,3 рази, ED50 дифеніну - в 5,7, ED50 вальпроата натрію - в 2,5 рази, ED50 карбамазепіну в 7 разів, ED50 діазепаму - в 3,5 рази. Таким чином, йдеться про відтворення універсальної моделі, резистивної до фармакотерапії форми експериментальної епілепсії. Приклад конкретного виконання способу У щура-самця лінії Вістар масою 270 г відтворюють хронічну епілептичну активність шляхом повторного щоденного внутрішньочеревного введення пікротоксину (Sigma, CШA) в підпороговій дозі (1,1 мг/кг). Введення здійснюють протягом 21 доби - спостерігають виникнення перших клонічних судом після 5-ї ін'єкції епілептогену, посилення проявів судом з охопленням всіх м'язів тулуба, генералізованими проявами після 15-ї ін’єкції, які набувають повторного характеру після 20-ї, 21-ї ін'єкцій. На 3-у добу після завершення введень епілептогену виконують стереотаксичну операцію під нембуталовим наркозом (35 мг/кг, в/чер) по вживленню канюлей в бокові шлуночки мозку. Після тритижневої перерви у введеннях епілептогену за умов довільної поведінки щура здійснюють введення розчину каїнової кислоти дозою 5,0 мкг об'ємом 5,0 мкл фосфатного буферного розчину. За 5,3 хв спостерігають виникнення клонічних проявів, які ще за 4,5 хв охоплюють м'язи передніх кінцівок, а за 4,0 хв набувають генералізованого характеру, що сприяє порушенню рівноваги щура, його падінню на бік. За цих умов спостерігають флексії задніх кінцівок, вегетативні розлади. Внутрішньочеревне застосування діазепаму дозою 1,0 мг/кг не викликає змін судомних проявів, що є підтвердженням їх резистивності до фармакотерапії. Розроблений спосіб був використаний при вивченні ефектів фармакологічних антиепілептичних препаратів та визначенні оптимальної їх комбінації з метою пригнічення проявів резистивної епілепсії. Отримані результати свідчать про високу ефективність розробленої моделі, її простоту, інформативність та адекватність щодо клінічних форм захворювання. Джерела інформації: 1. Loscher W., Rundfeld C., Honack D. Pharmacological characterization of phenytoin-resistant amygdala-kindled rats, a new model of drug-resistant partial epilepsy // Epilepsy Res. - 1993. - Vol. 15. P. 207-219. 2. Shandra A.A., Ma zarati A.M., Godlevsky L.S., Vastyanov R.S. Chemical kindling: implications for antiepileptic drugs-sensitive and resistant epilepsy models // Epilepsia. - 1996. - Vol. 37, N 3. - P. 269274. 3. The WAG/Rij rat model of absence epilepsy: ten years of research (Editors: Gilles van Luijtelaar, Anton Coenen). - NICI. - 1997. - 433 pp. 2 30942 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 35 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3