Спосіб впливу на вірус сніду

1. Спосіб впливу на вірус СНІДу, який включає опромінення світлом вірусного матеріалу, який відрізняється тим, що вірусний матеріал опромінюють монохромним світлом у діапазоні 382-385 нм протягом 7-20 хвилин. 2. Спосіб впливу на вірус СНІДу за п. 1, який відрізняється тим, що щільність енергії монохромного світла становить 150-200 мВт/см2. 3. Спосіб впливу на вірус СНІДу за п. 1, який відрізняється тим, що вплив на вірусний матеріал проводять шляхом черезшкірного опромінення світлом вірусного матеріалу. (19) (21) u200714505 (22) 24.12.2007 (24) 25.03.2008 (46) 25.03.2008, Бюл.№ 6, 2008 рік (72) КАНЕВСЬКИЙ ВАЛЕРІЙ ОЛЕКСАНДРОВИЧ, UA, КАПУСТИН ВОЛОДИМИР ОЛЕКСАНДРОВИЧ, UA, СОЛОДОВНИКОВ ВОЛОДИМИР ІЛЛІЧ, UA (73) КАНЕВСЬКИЙ ВАЛЕРІЙ ОЛЕКСАНДРОВИЧ, UA, КАПУСТИН ВОЛОДИМИР ОЛЕКСАНДРОВИЧ, UA, СОЛОДОВНИКОВ ВОЛОДИМИР ІЛЛІЧ, UA (56) 3 збереження крові, при рН середовища 5 9, протягом 5-300 хвилин, при чому оброблюваний розчин або суспензію піддають попередньому замороженню з наступним відтаюванням перед опроміненням, а після опромінення кров або її компоненти пропускають через адсорбент для видалення барвника. Недоліком цього способу є його багатостадійність яка має більше стадій ніж у попередньому аналогу. При цьому можливе травмування організму, та можливість внесення додаткових інфекцій в процесі цих складних маніпуляцій, а також використання достатньо складної та дорогої апаратури. Передбачене способом застосування опромінення променями галогенної лампи невизначено - широкого діапазону супроводжується невизначеними впливами такого опромінення на навколишнє середовище. Відомий спосіб впливу на вірус СНІДу, за допомогою опромінення вірусного матеріалу світлом [див. Патент Росії 2097427, МПК C12N7/04, дата публікації 1997.11.27]. Суть способу складається в тому, що вірусний матеріал опромінюють комбінованим світлом, яке відповідає електронним переходам атомів магнію 516,7; 517,2; 518,2нм. та атомів цинку 632,2нм. протягом 30-60 хвилин. Недоліком зазначеного способу є низька інактивація вірусу СНІДу. Відомий спосіб впливу на вірус СНІДу, за допомогою опромінення вірусного матеріалу світлом [див. Патент Росії №2223124, МПК A61N5/06, дата публікації 2004.02.10]. Суть способу складається в тому, що вірусний матеріал опромінюють модульованим світлом, на довжинах хвиль 516,7; 517,2; 636,2нм., с частотою модуляції 9,4-9,5Гц. Недоліком зазначеного способу є низька інактивація вірусу СНІДу. Відомий лазерний спосіб впливу на вірус СНІДу, за допомогою опромінення вірусного матеріалу світлом [див. Патент Росії №2142828, МПК A61N5/06, дата публікації: 1999.12.20), Суть способу складається в тому, що опромінення вірусного матеріалу здійснюють шляхом черезшкірного впливу променем інфрачервоного лазера з довжиною хвилі 700-1000нм. на вірусний матеріал у крові в ліктьових венах и на наступні ділянки організму: область грудини, області проекції печінки и селезінки и області паравертебральних зон. Недоліком зазначеного способу є низька інактивація вірусу СНІДу. Завданням розробки є створення способу впливу на вірус СНІДу в якому шляхом емпіричного підбору режимів та параметрів дій способу забезпечується підвищення впливу на вірус СНІДу. Поставлене завдання вирішується тим, що спосіб впливу на вірус СНІДу включає опромінення світлом вірусного матеріалу. Новим в способі є те, що вірусний матеріал опромінюють монохромним світлом у діапазоні 382-385нм. протягом 7-20 хвилин. 31202 4 Застосування в способі підібраних емпіричним шляхом режимів та параметрів дій способу забезпечує підвищення впливу на вірус СНІДу. В конкретних варіантах реалізації способу застосовують щільність енергії монохромного світла в межах 150-200мВт/см2. Застосування в способі підібраної емпіричним шляхом щільності енергії монохромного світла забезпечує суттєвий рівень впливу на вірус СНІДу без суттєвого впливу на навколишнє середовище. В конкретних варіантах реалізації способу вплив на вірусний матеріал, проводять шляхом черезшкірного опромінення світлом вірусного матеріалу. Застосування в способі такого методу впливу суттєво спрощує операції із вірусним матеріалом, що за рахунок зменшення маніпуляцій із вірусним матеріалом, а також вилучає операції по використанню достатньо складної та дорогої апаратури. Крім того зменшення маніпуляцій із вірусним матеріалом суттєво зменшує можливість внесення додаткових інфекцій в процесі цих складних операцій що підвищує достовірність досліджень впливу на вірус СНІДу. Спосіб ілюструється прикладами опромінення. В Таблиці 1 наведено характеристику вірусу імунодефіциту людини, а в Таблиці 2 результати досліджень активності впливу опромінення за способом на досліджуваний вірус. Ступінь впливу на вірус досліджено на моделі клітинних лімфобластоідних клітинних ліній СЕМ та МТ-4, інфікованих вірусом імунодефіциту людини (ВІЛ) - штам ВІЛ-1/В RU (гостра інфекція). Для проведення досліджень впливу опромінення на клітини вірусу імунодефіциту людини (референс-штам ВІЛ-I RF) - у вигляді культури МТ4/ВІІІ ЛБК -Т-лейкоцити людини продуцента вірусу імунодефіциту І типу, отриманий з музею вірусів Інституту вірусології ім. Д.І. Івановського. Вірус зберігався при –70°С. Джерелом ВІЛ було культуральне середовище клітин МТ4/ВІІІ ЛБК. Попередньо було визначено, що інфікованість цих клітин досягала практично 100%, заданими непрямої імунофлюоресценції з моноклональними антитілами до антигену р24 ВІЛ1. Тотожність вірусу, що продукується клітинами МТ4/ВІІІ ЛБК, з ВІЛ-1 було підтверджено в реакції нейтралізації. Вірус імунодефіциту людини культивували в суспензійній культурі МТ-4. Характеристика вірусу ВІЛ-1 наведена в таблиці 1 Характеристика вірусу імунодефіциту Культура клітин МТ-4 Експресія p24 (ОП 492) 3.069 Верифікацію наявності антигену р24 в досліджуваних зразках підтверджували за допомогою реакції нейтралізації з використанням діагностичного набору Genetic Systems™ HIV-1 Confirmatory Assay, який складався з двох компонентів: нейтралізуючого реагенту 5 31202 6 сироватки крові людини, яка містить антитіла до р24 ВІЛ-1 (HIV-1 Antigen Confirmatory Reagent, HP) та ненейтралізуючого реагенту - нормальної сироватки людини, яка не містить антигену ВІЛ, HBsAg вірусу гепатиту В та антитіл до ВІЛ 1/2, вірусу гепатиту С, HTLV-1 (Negatine Control, HK). Відсоток нейтралізації розраховували за формулою: % нейтраліза ції = ОГсер.( зразок + НК ) - ОГсер.( зразок + НР ) ОГсер.( зразок + НК ) - ОГсер.НК де: ОГсер. - оптична густина за результатами спектрофотометричного обліку результатів. Розрахунок індекса нейтралізації ВІЛ в клітинах МТ-4 К+сер = 0,962; K+cep+N = 0,031; K~cep = 0,025 Для клітин МТ-4 ОГКВсер = 1,215; OГ KB+N = 0,044 % нейтраліза ції = 1215 - 0,044 , 1171 , х100 = х100 = 98,4% 1215 - 0,025 , 1190 , Дослідження впливу монохромного світла у діапазоні 382-385нм. проводили за наступною схемою: в кожну пробу культури клітин МТ-4 вносили вірус імунодефіциту людини, потім 3 зразки культури клітин МТ-4, інфіковані ВІЛ опромінювали у відповідному діапазоні за способом, що заявляється. Інфіковані опромінені та не опромінені клітини культивували протягом 5 діб, потім в кожній пробі визначали інфекційний титр вірусу. Режим опромінення був наступним: монохромне світло у діапазоні 382-385нм. протягом 7-20 хвилин. Результати досліджень наведені в табл. 2. (cut off 0.191). Таблиця 2 Анти-ВІЛ активність опромінення № дослідження Зразок 1 Зразок 2 Зразок 3 Комбівір Контр. ВІЛ Показники ОГ для розведень ВІЛ при lg ID50 1 2,722 2,764 2,764 3,055 3,028 2 1,976 1,732 1,717 0,205 2,779 3 0,729 0,630 0,768 0,148 1,150 4 0,412 0,320 0,375 5 0,150 0,125 0,130 6 0,110 0,090 0,090 0,915 0,599 0,350 На підставі цих результатів визначено, що опромінення в зоні монохромного світла у діапазоні 382-385нм. інфікованих клітин МТ-4 призводить до достовірного зниження інфекційного титру ВІЛ на 2,5 lg ID50. Інф. титр, lgID50 7 4,0 4,0 4,0 2,8 6,5 Інгібіція, lg ID50 8 2,5 2,5 2,5 3,7