Спосіб одержання живої сухої вірус-вакцини проти вірусного гепатиту каченят

1. Спосіб одержання живої сухої вірус-вакцини проти вірусного гепатиту каченят, що включає використання як вірусу штаму "К-УНИИП", який відрізняється тим, що додають трикомпонентне за хисне середовище у наступному співвідношенні компонентів, мас. %: пептон 5-7 сорбіт 4,5-4,9 желатин 0,9-1,1. 2. Спосіб за п.1, який відрізняється тим, що досягають затвердіння матеріалу, попередньо заморожують вакцину та середовище ліофілізації при температурі мінус 38-42°С протягом не менше ніж 24 години, але не більше ніж 72 години. Корисна модель відноситься до ветеринарної бютехнології - до способів виготовлення біологічних препаратів, а саме до способу виготовлення вакцини проти вірусного гепатиту каченят. Специфічна профілактика вірусного гепатиту каченят відбувається за допомогою живої рідкої вакцини зі штаму" К-УНИИП", При введенні штаму "К-УНИИП" в організмі каченят з'являються вірус-нейтралізуючі антитіла. Головними вимогами, що до вірусної вакцини є: Збереження біологічної активності вакцини, збереження імуно-генної активності, збереження безпеки вакцини як найдовше. Існує суха вірус-вакцина проти ентериту гусей [SU №162151, от 24.06.88, кл. C12N7/00]. Це рішення використовується тільки проти ентериту гусей. Є технічні умови для виготовлення живоі рідкої вірус-вакцини проти вірусного гепатиту каченят ГГУ 10-09-42-90, Український науково дослідний Інститут птахівництва]. В цьому рішенні вірусвакцина зберігає свої' біологічні властивості протягом 6 місяців в умовах гіпотермії 4-6°С в вакцині "К-УНИИП". Це рішення може бути прототипом. Недоліком є те, що за цим рішенням виготовляється тільки рідка вакцина, - термін зберігання 6 місяців. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб одержання живої сухої вірусвакцини проти вірусного гепатиту каченят, в якому використовують як вірус штам "К-УНИИП" шляхом додавання трикомпонентного захисного середовища: 5-7% пептону, 4,5-4,9% сорбіту та 0,9-1,1% желатину, шляхом досягнення затвердіння матеріалу попереднім заморожуванням вакцини та середовища, ліофілізації при температурі мінус 3842°С протягом не менш ніж 24 години, але не більш ніж 72 години, щоб забезпечити спосіб одержання живої сухої вірус - вакцини проти вірусного гепатиту каченят. Ця вакцина має термін зберігання 12 місяців. Пептон використовують у складі захисного середовища, концентрація якого становить від 4 до 8%, що забезпечує захист вірус-вакцини. [Патент України №29843, Від 15.11. 2000, кл. А61К39/00, C12N7/00 "Вакцина проти ІБХ та спосіб її виготовлення"]. Пептон має колоїдні та гідрофільні якості. Другий компонент захисного середовища екстрацелюлярний протектор сорбіт має поверхневоактивні якості, захищає віруси від дії кристалів льоду та концентрованих розчинів солей. Тому додається 1% розчин желатину, щоб частково замістити сорбіт. Отримане трикомпонентне захисне середовище є оптимальним за своїм складом. Аналіз відомих технічних рішень у галузі бютехнології специфічних ветеринарних препаратів дозволяє зробити висновки про відсутність у них ознак, подібних до суттєвих ознак у заявленому способі та визначити заявлене рішення відповідним критеріям "суттєві відміни" та "новизна". Спосіб виконується таким чином. Одержують трикомпонентне захисне середо (О о О) 6096 вище. Оптимальний склад захисного середовища містить 6% пептону, 4,8% сорбіту, 1% желатину. Одержане трикомпонентне захисне середовище ретельно перемішують та додають до вірусної суспензії в співвідношенні 1:1. Після чого за допомогою дозатору суміш розфасовують у стерильні флакони. Приклад 1 Визначення біологічної активності вакцини до та після консервування проводили на 8,5-9 добових курячих ембріонах. Готували 10-разові - розведення вірусовмісного матеріалу на фізіологічному розчині до -7. Перед титруванням вірусу у фізіологічний розчин додавали стрептоміцин та пеніцилін із рахунку 1000ЕД/мл кожного антибіотику. При цьому об'єми по 0,2мл десятиразових розведень вірусу вводили в алантоісну порожнину по 4 ембріони на кожне розведення вірусу. Потім ембріони розміщували у термостаті при температурі 37,5°С та інкубували протягом 6 діб, проводячи овоскопію. Ембріони, що загинули розтинали, визначали причину загибелі ембріонів. Приклад 2 Імуногенність вакцини перевіряли на 10 каченят 1-2 добового віку, яким в область стегна внутрішньом'язово вводили по 0,2мл вакцини, яка була, розведена 1:100 фізіологічним розчином. Контролем були 10 невакцинованих каченят саме з тієї партії, що були щеплені. Вакцинованих та контрольних каченят розміщували в ізольованих приміщеннях. За каченятами вели догляд протягом 7-ми діб, після чого їх заражали в стегно внутрішньом'язово контрольним штамом вірусу гепатиту у дозі 10 3 ЕЛД 50/0,2мл. Інфіковані каченята знаходились під наглядом протягом 10-ти діб. У контролі загибель каченята становила від 80 до 100%. Серед вакцинованих загибель була відсутня. Комп'ютерна верстка Н. Лисенко Приклад З Для перевірки нешкідливості вакцини 10-ти каченятам 1-2 добового віку вводили внутрішньом'язово 500 імунізуючих доз вакцини. Вакцину вважали нешкідливою, коли каченята не захворювали та не гинули протягом 10-ти діб. Приклад 4. Вимірювання електричного опору матеріалів, які ліофізували, проводили вимірюючим блоком С3 фірми "Крист" (Німеччина). Ліофільне висушування вакцини проводили на апараті камерного типу "ТГ-50" фірми "Хохвакуум" (Німеччина). Спектри ядерного магнітного резонансу (ЯМР) були отримані з використанням широкодіапозонового спектрометру з Фур'є перетворюванням сигналу моделі "СХР-300" фірми "Брукер" (Німеччина). Результати дослідів біологічної активності, імуногенності та безпечність вакцини показані у таблиці. Вихідний титр біологічної активності вакцини складав 5,5 Ід ЕЛД 50/0,2мл. Режим заморожування-відтаювання, який запропонований, дає можливість зберегти біологічну активність, імуногенні якості та безпечність вакцини без змін, в порівнянні з вихідними, та продовжити термін її зберігання у рідкому азоті або в парах рідкого азоту. Попереднє заморожування вакцини та середовища ліофілізації при температурі мінус 38-42°С протягом не менш ніж 72 години дозволяє досягти повного затвердіння матеріалу на етапі попереднього заморожування. Жива суха вірус-вакцина проти вірусного гепатиту качок та спосіб її виготовлення знайде використання при розробці і виготовленні засобів профілактики гепатиту качок у птахогосподарствах України. Вакцина має високу імуногенність, а технологія виготовлення вакцини є простіша та надійніша. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601