Спосіб отримання інактивованої вакцини проти лейкозу великої рогатої худоби

Спосіб отримання інактивованої вакцини проти лейкозу великої рогатої худоби, що включає культивування вірусвмісних лейкоцитів периферійної крові великої рогатої худоби, хворої на лейкоз, їх виділення з культуральної речовини з наступною гомогенізацією, обробку отриманого лізату 10 % 3М розчином хлористого калію та тритоном х - 100, його інкубування при 4±1 °С, розве 3 33513 дення 1:8, знову інкубують, осаджують центрифугуванням, а в якості імунізуючого агента використовують білкові фракції р24 та р51 ВЛВРХ, з вмістом білка 5мг/мл. в освітленому лізаті [див. патент України №6795, MKИ 5 A61K 39/12, С12 № 5/00, бюл. №8-1, 29.12.94] Основним недоліком вакцини, отриманої цим способом, є те, що він не дозволяє контролювати її антигенну активність та диференціювати поствакцинальні антитіла від постінфекційних в РІД. В основу корисної моделі покладене завдання оптимізації процесу приготування вакцини проти лейкозу ВРХ та одночасного приготування антигену р24 на одній із стадій процесу, що дає можливість контролю антигенної активності вакцинного препарату і ди ференціації поствакцинальних від постінфекційних антитіл в РІД, а також проведення контролю напруги імунітету вакцинованих тварин. Технічний результат корисної моделі - можливість контролю гуморального статусу вакцинованих тварин на наявність антитіл в сироватці крові через 30 днів після останнього введення вакцини та спрощення контролю антигенних властивостей вакцини постановкою в РІД в гелі з тест - системою р24 в лабораторних умовах. Крім того, це дозволить спростити спосіб контролю антигенних властивостей вакцини постановкою РІД в гелі з тест - системою р24 в лабораторних умовах. Рішення цієї задачі досягається тим, що спосіб отримання інактивованої вакцини включає культивування вірусутримуючи х лейкоцитів периферійної крові великої рогатої худоби хворої лейкозом, їх виділення з культуральної рідини з наступною гомогенізацією, обробкою отриманого лізату 10% 3М розчином хлористого калію та тритоном х - 100, його інкубування при 4±1°С, розведення обробленого лізату забуференним фізіологічним розчином до кінцевого розведення 1:8, повторне інкубування та виділення білкової фракції, яка використовується як імунізуючий агент. Згідно заявленої корисної моделі, культивування вірусутримуючих лейкоцитів здійснюють при 37°С, первинне інкубування лізату проводять на протязі 24 годин з концентрацією не нижче 10мг/мл., з одночасним відбором лізату на отримання антигена р24 для тестування напруги імунітету після введення вакцини. Антиген р24 готують згідно [патенту України №273375, HKИ 7 A61K 39/12, від 25.10.2007 р]. Спосіб отримання вакцини проводять наступним чином. 4 Із периферійної крові донора під дією гемоліза еритроцитів 0,83%-ним розчином хлориду амонію у співвідношенні 1:4 виділяють лейкоцитарну масу. Культивують отримані вірусутримуючі клітини в культуральному середовищі наступного складу: 10% бичачої інактивованої сироватки, 90% середовище Ігла та 100 од. пеніциліну на 1мл. середовища. Культивування проводять при 37°С на протязі 48год. на ройлерній установці. Потім клітини осаджують центрифугуванням, відмивають фізіологічним розчином і заморожують. Отриману клітинну масу гомогенізують з попереднім розмороженням і наступним трьохразовим замороженням та розмороженням з наступним механічним руйнуванням в гомогенізаторі. Отриманий лізат розбавляють 1:4, добавляють 10% 3М розчин хлористого калію і тритон х 100 із розрахунку 1:10. Інкубують при 4±1°С на протязі 24год. при періодичному рівномірному перемішуванні. Оброблений лізат розбавляють забуференим фізіологічним розчином до кінцевого розведення 1:8, повторно інкубують при 4±1°С на протязі 1-2год. та виділяють білкову фракцію центрифугуванням при 2000об/хв. на протязі 25хв. Визначають рівень наявності білка в лізаті рефрактометрично. На даній стадії виготовлення вакцини, до посадки на ад’ювант (гідроокис алюмінію), проводять забір лізату на концентрацію ПЕГ 20тис. для визначення наявності антигена р24 та його приготування для тестування тривалості імунітету після вакцинації тварин. Освітлений лізат з добавками лізуючого буфера та вмісту білка не менше ніж 10мг/мл. заливають в діалізний мішок, щільно зав'язують та концентрують ПЕГом 20тис. Тест - системою для контролю антигенних властивостей вакцини являється сироватка великої рогатої худоби з антитілами до антигену р24 і отриманий таким способом антиген р24 ВЛВРХ (вірус лейкозу великої рогатої худоби). Для вивчення можливості диференціації постінфекційних антитіл від поствакцинальних в РІД відбирались сироватки крові 3-х груп тварин: І - вакциновані, II - ін фіковані вірусом лейкозу, III - здорові, інтактні по відношенню до віруса лейкозу. Всі сироватки досліджували в РІД з Ag gp51 і р24. 5 33513 6 Таблиця1 РІД з сироватками крові від вакцинованих, інфікованих, інтактних тварин. Статус тварин РІД з антигенами № п/п сироваток Вакциновані (вакцина заявленим методом) Інфіковані Інтактні 1 2 3 4 5 6 7 8 9 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Дані проведених досліджень свідчать, що сироватки від вакцинованих тварин реагували позитивно тільки з Ag p24, тоді, як інфіковані - тільки з Ag gp51. Комп’ютерна в ерстка І.Скворцов а gp51 + + + + + + p24 + + + + + + + + + Не відмічено реакції з жодним антигеном у інтактних тварин. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601