Спосіб одержання інактивованої вакцини проти лейкозу великої рогатої худоби

Спосіб одержання ІнактивовзноТ вакцини проти лейкозу великої рогатої худоби, що включає одержання імунізуючого агента з купьтурапьної рідини перещеплюваної культури клітин нирки ембріона вівці, хронічно Інфікованої вірусом лейкозу великої рогатої худоби, який відрізняється тим. що вірусний матеріал сконцентровують в 25 разів, гцодають інактивації формаліном з кінцевою концентрацією 0,1 % та з'єднують з носієм - імуномодупятором. виготовленим з клітинних елементів крові організму, вільною від лейкозу, рогатої худоби Запропонований винахід відноситься до ветеринарної вірусології та біотехнології і може бути застосований на підприємствах біологічної промисловості при виготовленні вакцинних препаратів, які використовуються для профілактики лейкозу великої рогатої худоби Інактивована вакцина проти лейкозу ееличої рогатої худоби вміщує інактивований вірус лейкозу великої рогатої худоби, який вирощується в перещеплюваній культурі клітин нирки ембріона вівці, та додатково вміщує сорбент - імуномодулятор f ад'ювант Вакцина призначена для профілактичної імунізації молодняка велико) рогатої худоби віком 6-8 місяців Позитивний ефект настає при 3разовій імунізації великої рогатої худоби в дозі 2 мл підшкірно з інтервалом 14 діб Лейкоз великої рогатої худоби - хронічне інфекційне лімфопроліферативне злоякісне захворювання великої рогатої худоби, яке викликається вірусом, належащим до род Retroviridae Лейкоз набув широкого розповсюдження, спричиняє значні економічні збитки тваринництву та є небезпечним для здоров'я людей Найважливішим засобом профілактики лейкозу великої рогатої худоби та зменшення збитків від захворювання є вакцинопрофілактика Відомі біопрепарати для профілактики лейкозу великої рогатої худоби. Зокрема, аналогічною по вирішенню є інактивована вакцина BL-VACCRO (Specific protection against bovine leukemia virus Infection conferred on cattle by the Romanian inactivated vaccine BL - VACC - RO * J.V. Patrascu, S. Coman, J. Sandu et at. // VirHogy. -1980 • V.31, N 2. - P. 95 - 10?) Препарат одержують (з вірусмицуючо( культуральної рідини лерсистентно Інфікованих клітин шляхом інактивації 2% етипеніміном, застосовуюсь 2 разово в ад юванті Фрейнда в дозі 0,40 мг вірусного глікопротеща Вакцина викликає у бичків активний синтез антитіл проти вірусу лейкозу великої рогатої худоби та формування резистентності при ін'єкуванні патогенного вірусу. Але недоліком даного препарату є застосування ад'юеанту Фрейнда. який може викликати місцеве запалення у вакцинованих тварин Іншим аналогом пропонусмого препарату є вакцина проти лейкозу великої рогатої худоби (АС 820015. А 61 к/39/12 Способ получения вакцины против лейкоза крупного рогатого скота / Р А Кукайн, Л И Нагаева В П Шишков и др.) Згідно запропонованого авторами способу вакцину виготовляють з культивованих лейкоцитів периферичної крові хворої на лейкоз великої рогатої худоби, при цьому окремі клітини вірусний матеріал та одночасно нуклеїнові кислоти, які він вміщує, піддають інактивації з нас тупним виділенням білкових фракцій р 25 та gp 7Q Ці фракції використовують як імунізуючий агені Але даний препарат викликає довготривалу специфічну гуморальну імунну відповідь у вакцичованих тварин і не має Імуномодулюючої ДІТ Найбільш близькою по суті є ISCOM - вакцина, до складу якої входить гпікопротеїн др51 вірусу лейкозу великої рогатої худоби (Characterization of purified gp51 from bovine leukemia virus integrated into ISCOM Physicochemtcal properties and serum antibody response to the integrated gp51 / M Merza, J Sober. В Sundqutst et al. // Arch. Virol. - 1991. 0» CO in CO < 35439 120 - P. 219 - 231). В прототипі §р51 введений в імуностимулюючий комплекс - ISCOM, який являє собою клітиноиодібні структури 19S, та вміщує білки вагою ЗО і 50 кДа. ISCOM виготовпяється із віруса, інактивованого Твін-20 та Таін-80 або октипгпікозидом. До складу препарату входить др51 вірусу лейкозу великої рогатої худоби, який мас високоімуногенну форму, непошкоджену фізико-хімічну структуру та антигенні епітопи F, G та Н Після дворазового введення вакцина викликає у мишей синтез анти-пп пр^ти qp51 вірусу лейкозу великої рогатої худоби, титр яких в ELISA складає 100 000 - 500 000 (в залежності від дози препарату). Тривалість імунної відповіді у мишей становить 24 місяці У телят даний препарат призводить до появи антитіл проти др51 в титрах ЗО 000 150 000, а також синтезу віруснейтрапізуючих антил'л За даними літератури, ISCOM-вакцини викликають також активну цитотоксичну відповідь Тлімфоцитів, що може обумовлювати захист тварин від збудника захворювання. Основними недоліками прототипу є те, що даний препарат викликає довготривалу гуморальну відповідь у вакцинованих тварин, синтез антитіл проти др51 віруса лейкозу великої рогатої худоби в високих титрах Це не дас змоги серологічним методом (реакція імунодифузіі в агаровому гелі, РІД), який передбачений "Інструкцією по профілактиці та оздоровленню велико) рогатої худоби від лейкозу" / В О. Бусол. В. І Цимбал, В В Кіприч та інш , Затвердж. Голов упр. еет. медицини України 28 09 1992 р ; Реєстр № 15-15/220. - К., 1992. 5 с ) , відрізняти вакцинованих тварин від природиьо інфікованих. Окрім того, вірус лейкозу великої рогатої худоби в прототипі інактивується хімічними реагентами, які дорого коштують, а також використовується синтетичний клітиноподібний імуностимулюючий комплекс, який не має видових антигенів. Відсутність таких антигенів суттєво зменшує імуногенну активність вакцини та ефективність її профілактичної дії В основу винаходу, що передбачається, поставлене завдання; одержання високоімумогенної, ефективної, нешкідливої вакцини для профілактики лейкозу великої рогатої худоби, яка викликає активний імунітет проти віруса лейкозу і підтримується за рахунок імунокомпетентних клітин Вакцину виготовляють на основі віруса лейкозу великої рогатої худоби, який вирощується в перещеплюваній культурі клітин нирки ембріона вівці, хронічно інфікованої вірусом лейкозу великої рогатої худоби, їнактивованого формаліном, з кінцевою концентрацією 0,1%. До складу препарату додатково введено сорбент-імуномодулятор, який одержують із клітин крові організму рогатої худоби, вільного від лейкозу, та ад'ювант. Інактивовака вакцина проти лейкозу великої рогатої худоби вміщує комплекс глікопротеїдних та проте (дних антигенів інактивованого вірусу лейкозу великої рогатої худоби, тому викликає імунну відповідь, яка направлена проти вірусу в цілому. У вакцинованих тварин в РІД титр антитіл проти глікопротеїдного