Спосіб визначення функціонального стану нейтрофілів

Спосіб визначення функціонального стану нейтрофілів, які фагоцитують, який відрізняється тим, що у нейтрофілах венозної крові визначають сумарний рівень продукції нітратів і нітритів і згідно із швидкістю їх виділення у надосадкову рідину судимо про порушення функціонального стану нейтрофілів. (19) (21) 99031485 (22) 18.03.1999 (24) 15.02.2001 (33) UA (46) 15.02.2001, Бюл. № 1, 2001 р. (72) Гоженко Анатолій Івановіч, Ніколаєвська Іна Віталіївна, Єфременко Тетяна Олександрівна (73) Український НДІ морської медицини 33628 Для вимірювання рівня нітратів 0,2 мл надосадкової рідини в присутні надлишку металевого цинку з'єднують з 2 мл дистильованої води та 2 мл реактиву Грису, стр ушують і відстоюють 20 хвилин, після чого фотометрують при довжині хвилі 540 нм та ширині кювети 1 см. Таким чином, новим у запропонованому способі є те, що порівняно зі способом-прототипом поряд з підрахуванням фагоцитарного числа та фагоцитарного індексу після інкубації суміші нейтрофілів з культурою стафілококу суміш осаджують центрифугуванням і в надосадковій рідині вимірюють кількість нітратів і нітритів, що не здійснювалося раніше, сум ують показники і за їх загальною кількістю порівняно з контролем судимо про функціональну активність нейтрофілів у процесі фагоцитозу і її залежність від продукції оксиду азоту. Нами було обстежено 24 чол. (див. табл. 1-2). При зіставленні сумарної концентрації нітратів і нітритів з показниками фагоцитарної активності нейтрофілів було виявлено, що: 1. У контрольній групі здорових чоловіків із завершеним фагоцитозом сумарний рівень нітратів і нітритів, які були виділені нейтрофілами протягом інкубаційного часу, був ви щим, ніж у хворих з порушенням фагоцитозу на 5,5%; 2. При активації стафілококом у групі здорових чоловіків продукція нітратів і нітритів зросла на 49,7% порівняно з контролем, а у гр упі хворих з пригніченням фагоцитозу - тільки на 1,6%; 3. Сумарна кількість нітратів і нітритів, які були виділені у процесі завершеного фагоцитозу, була на 55,6% вищою, ніж при пригніченому фа гоцитозі. 4. Фагоцитарне число і фагоцитарний індекс у групі здорових були достовірно вищими, ніж у хворих з порушенням фагоцитозу. Таким чином, виходячи з одержаних даних, можна припустити, що однією з причин зниження фагоцитарної активності нейтрофілів може бути порушення механізмів, які відповідають за утворення оксиду азоту, що перетворюється на нітрати та нітрити, нейтрофілами та їх участі у процесі фагоцитозу. Таким чином, для нормального функціонування фагоцитарної системи організму характерно зростання порівняно з контролем сумарної кількості нітратів та нітритів протягом інкубаційного часу, при порушенні фагоцитарної ланки імунітету таких змін не спостерігається. Наведемо приклад конкретного виконання способу: У хворої А., 27 років, яка хворіє на часті продовжені респіраторні захворювання, що проходять на фоні незначного субфебрілітету, швидкої стомлюваності, слабкості, відсутності апетиту, була досліджена продукція нітратів та нітритів, які утворюються нейтрофілами. Сумарний рівень іонів NО2 і NO3 за 0,5 та 2 години інкубації нейтрофілів із стафілококом становив (у ммоль/л): 0,133 та 0,129 відповідно (у контролі 0,145 та 0,147). При цьому додаткові дослідження виявили зниження фагоцитарної активності нейтрофілів як в стадії захвату, так і в стадії перетравлення: фагоцитарно число (ФЧ) через 30 хвилин інкубації становило 38%, фагоцитарний індекс (ФІ) 1,50. Через 2 години ці показники становили 46% та 2,0 відповідно. Індекс завершеності фагоцитозу дорівнював 1,53 (при нормі 1,0). Ці дані дозволили припустити, що порушення перетравлюючої здатності нейтрофілів пов'язано з недоліками утворення нітратів та нітритів, рівень яких протягом інкубаційного часу порівняно з контролем практично не змінювався. Хворій була призначена імунокоригувальна терапія для підвищення неспецифічної резистентності організму. Таким чином, запропонований спосіб дозволяє визначити стан неспецифічної ланки імунітету ,виходячи з рівня та динаміки утворення нітратів і нітритів нейтрофілами. Література: 1. Иммунология. Практикум. /Пастер Е.У., Овод В.В., Позур В.Н., Вихоть Н.Е.//К.: Ви ща школа, 1989.-С. 279-280. 2. Пигаревский В.Е. Лизосомально-катионный тест: Ме тодические рекомендации. -М., 1979.-18 с. 3. Стефани Д.В., Вельтищев Ю.Е. Клиническая иммунология и иммунопатология детского возраста. Руководство для врачей. -М.: Медицина, 1996. - С.368. Таблиця 1. Показники фагоцитарної активності нейтрофілів та сумарної продукції нітратів та нітритів (в ммоль/л) за 30 хвилин інкубації при завершеному фагоцитозі(контрольна група) № п.п. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 ФЧ 67 61 58 66 65 55 58 63 54 58 68 59 ФІ 2,83 2,01 1,95 2,13 1,96 1,89 2,10 NO(NО2+NО3) 0,257 0,301 0,263 0,285 0,234 0,401 0,311 Контроль 0,156 0,184 0,191 0176 0194 0,235 0,201 1,95 2,19 3.01 1,93 0,267 0,322 0,225 0,248 0,189 0,195 0,164 0,184 2 33628 Таблиця 2. Показники фагоцитарної активності нейтрофілів та сумарної продукції нітратів та нітритів (в ммоль/л) за 30 хвилин інкубації при незавершеному фагоцитозі (хворі з пригніченням фагоцитозу) № п.п. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 ФЧ 33 43 50 51 41 42 48 44 48 46 42 52 ФІ 1,12 1,43 2,08 1,63 1,15 1,23 1,18 1,84 1,63 1,20 1,34 1,38 NO(NО2+NО3) 0,196 0,211 0,166 0,256 0,129 0,132 0,164 0,174 0,140 0,132 0,148 0,153 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3 Контроль 0,194 0,208 0,158 0,251 0,130 0,130 0,162 0,175 0,131 0,130 0,144 0,156