Спосіб діагностики коней з наявністю патоморфологічних змін при інфекційній анемії

Спосіб діагностики коней з наявністю патоморфологічних змін при інфекційній анемії, який включає виявлення в сироватці крові рівня титрів специфічних антитіл в реакції дифузної преципітації (РДП) і співвідношення альбумінів до гамаглобулінів, відрізняється тим, що виявляють високі титри (1:64) і низьке співвідношення альбумінів до гамаглобулінів (0,31 і 0,12 умов. од.). (19) (21) 99105818 (22) 26.10.1999 (24) 16.04.2001 (33) UA (46) 16.04.2001, Бюл. № 3, 2001 р. (72) Галатюк Олександр Євстафійович, Горальський Леонід Петрович (73) Інститут епізоотології УААН 36031 ту зберігають в замороженому стані. Для приготування агарового гелю використовують агар "Дифко" і боратний буфер (рН-8,6). В чашку Петрі вносять гарячий 2%-ний агар і дають йому загусн ути. Потім вносять 15 мл (охолодженого до 60 °С) 1%-ного агару (1%-ний та 2%ний агар приготовляють шляхом кип'ятіння або автоклавування без тиску протягом 5 хвилин). Після затвердіння середовища вирізають лунки діаметром 7 мм (вирізають лунки тільки в шарі 1%ного агару). Одна лунка повинна міститися в центрі і шість - по периферії на відстані 3 мм від центральної і одна від одної. В центральну лунку вносять мікропіпеткою 0,05-0,06 мл антигену. В дві протилежні лунки закапують 0,05-0,06 мл позитивної сироватки. Чотири вільні лунки, що залишилися, заповнюють за допомогою тонкої пастерівської піпетки досліджуваними сироватками, в розведенні 1:2 - 1:64. Після заповнення лунок чашки Петрі закривають кришками і поміщають у вологу камеру при температурі 24-25°С. Реакцію читають через 48-72 години. Чашки продивляються на темному фоні в косонаправленому пучку світла. Результати реакції вираховують по контрольній лінії преципітації. Контрольні лінії преципітації повинні бути чіткими і міститися посередині між лунками з антигеном і контрольними позитивними сироватками. Від'ємною реакція вважається лише тоді, коли контрольні лінії преципітації продовжуються в сторону лунки з досліджуваною сироваткою, не загинаючись, або з невеличкими загинаннями в сторону контрольної позитивної сироватки. Позитивною реакція вважається тоді, коли: - між лунками в досліджуваній сироватці утворюється лінія преципітації, яка з'єднується з контрольною лінією; - лінія преципітації відсутня, але контрольні лінії поблизу з досліджуваною сироваткою утворюють загинання, направлене в сторону антигену слабопозитивна сироватка; - контрольні лінії скорочуються із сторони лунки з досліджуваною сироваткою, в окремих випадках контрольні лінії повністю розчиняються, що свідчить про високий титр антитіл. Визначення співвідношення альбумінів до гама-глобулінів визначається за турбидиметричним (нефелометричним) методом (Определение естественной резистентности и обмена веществ у сельскохозяйственных животных / В.Е.Чумаченко., А.М.Высоцкий, Н.А.Сердюк. В.В.Чумаченко. - К.: Урожай, 1990. - С. 69-70. Серологічне, гематологічно і при проведенні морфологічних досліджень було досліджено 8 клінічно-здорових коней та 25 при латентному і хронічному перебігу ІА (таблиця). При аналізі морфофункціональних показників і результатів серологічної діагностики встановлено закономірність прихованого перебігу хвороби. Встановлено, що у коней з рівнями титрів специфічних антитіл у РДП (нативна 1:2) у сироватці крові гістологічних змін в органах і тканинах не виявлено. Незначні гістологічні зміни виникають лише при наявності титрів специфічних антитіл у РДП 1:8 - 1:16, а при зростанні рівня антитіл до 1:32 - 1:64 спостерігаються чітко виражені гістологічні та проявляються патологоанатомічні і гематологічні зміни, характерні для ІАК. Таким чином, для виявлення коней з підвищеним ризиком розвитку патологічного процесу при ІАК необхідно виявляти рівень титрів специфічних антитіл в сироватці крові та визначати співвідношення альбумінів до гамаглобулінів, що має певне діагностичне значення. Для підтвердження діагнозу у забитих з діагностичною ціллю тварин необхідно проводити гістологічні дослідження та постановку реакції по Перлсу на виявлення в клітинах печінки специфічного для ІАК пігменту - гемосидерину. Отже, даний спосіб може бути використаний для прижиттєвої діагностики патологічного процесу в організмі коней при латентному і хронічному перебігу хвороби. Таблиця Результати виявлення коней з патоморфологічними змінами в організмі при інфекційній анемії Групи тварин здорові хворі хворі хворі Кількість Титр в РДП Співвідношення альбумінів до гамаглобулінів 8 15 7 3 0 натив – 1:2 1:8 – 1:16 1:32 – 1:64 1,31 ± 0,4 1,16 ± 0,42 0,68 ± 0,15 0,31 ± 0,12 2 Наявність пат.змін в організмі незначні виражені Реакція по Перлсу ++ 36031 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3