Спосіб одержання аулергіну для прижиттєвого виявлення свиней-вірусоносіїв при хворобі ауєскі

Спосіб одержання аулергіну, що включає репродукування на культурі клітин вірулентного вірусу, відділення клітинного детриту, консервацію, концентрацію і інактивацію вірусу, який відрізняється тим, що суміш вірусу та хімічно чистого гліцерину інактивують стерилізацією текучим паром, з температурою 120°С протягом 30хв. (19) (21) 2004031939 (22) 16.03.2004 (24) 15.12.2004 (46) 15.12.2004, Бюл. № 12, 2004 р. (72) Стегній Борис Тимофійович, Сербіненко Тетяна Миколаївна, Цимбал Олександр Михайлович, Соловйов Сергій Тихонович, Самойлюк В'ячеслав Володимирович 3 3793 4 його при 2500-3000об/хв протягом 30хв., концентПісля закінчення інактивації ємність з остуженим рували осадженням ПЕГ-6000 шляхом додавання вірусом (аулергіном) ретельно збовтували і із неї, його у вір усовміщуючу рідину до кінцевого вмісту з метою перевірки стерильності, зробили висіви в 10% і витримували при температурі 4+6°С протя3 пробірки з МПА, МПБ і МПБ під вазеліновим магом 18-24 годин з послідуючим центрифугуванням слом і агар Сабуро в дозі по 0,3см 3. Висіви витрипри 2500-3000об/хв. протягом 30-40хв., і розчимували протягом 14 діб в термостаті при темпераненням осаду в забуферному фізіологічному розтурі 37°С, а висіви на агар Сабуро - при чині (pH7,2) в об'ємі меншому в 10 разів за початтемпературі 22+24°С. Всі висіви були стерильні. ковий об'єм вірусутримуючої рідини, після чого до Крім того, відібрали пробу аулергіну в кількості концентрованого вірусу добавляли рівну кількість 3см 3, яку для перевірки шкідливості ввели двом хімічно чистого гліцерину і ця суміш прогрівалась кролям масою 1,8-2кг, підшкірно на боковій поверпри температурі 120°С протягом 30-40хв. хні тулубу в дозі 1см 3. При спостереженні протяПриклад 1 гом 10 діб кролі залишались живими та здоровиКультуру перещеплюваних клітин лінії СНЕВ, ми, тобто аулергін був нешкідливим. Після цього що вирощена у вигляді моношару в 3-х матрасах аулергін розфасували стерильною піпеткою в добоб'ємом на 1500см 3 кожний на ростовому живильре промиті стерильні флакони по 10см 3, герметичному середовищі (середовище 199, яке утримувано закрили гумовими пробками і закатали алюмініло 10% сироватки крові великої рогатої худоби і євими ковпачками. антибіотики - пеніцилін по 100од/см 3 та стрептоміПриклад 2 цин по 100мкг/см), після зміни ростового середоАулергін являє собою прозору та безбарвну вища на підтримуюче (середовище 199 з антибіорідину. Відсутність дермотоксичних, антигенних та тиками) заражали вірусом хвороби Ауєскі штам сенсибілізуючих власти востей у виготовленого "УНИИЭВ18в" 16 пасажу на клітинах лінії СНЕВ з аулергіну перевірили в одночасному досліді на 2-х множиностю зараження 0,5 ТЦД 50/ клітин. Зараінтактних підсвинках вагою по 50кг і ввели аулергін жені клітини в матрасі інкубували в стаціонарному внутрішньошкірно в основі вуха в дозі 0,2см 3. Чеположенні в термостаті при температурі 37°С до рез 3 тижні після цього у тварин взяли кров, сироповної дегенерації і сповзання клітинного моношаватку якої дослідили в РН ВХА. Після цього твариру внаслідок цитопатичної дії вірусу, що відбулась нам повторно ввели аулергін внутрішньошкірно в за 36 годин після зараження (титр вірусу при пооснову вуха в дозі 0,2см 3. Результати досліджень 3 слідуючій титрації на кролях-10 ЛД50/см ). свідчили про відсутність у аулергіну дермотоксичОдержаний вірус центрифугували при них, антигенних та сенсибілізуючих властивостей, 3000об/хв. протягом 30хв. Надосадову рідину зіоскільки змін в шкірі на місці введення аулергіну брали в один флакон ємністю 500см 3, а осад знене було, ВН-антитіла не виявлялись, шкірна реакшкодили шляхом автоклавування при 2атм. ція на повторне введення аулергіну була негатив(+132°С) протягом 2-х годин. Для концентрації віною. Специфічну активність аулергіну визначали русу використовували ПЕГ-6000. 3 цією метою на 4-х підсвинках масою 50кг, яких на 3 тижні до виготовили 50% розчин ПЕГ на стерильній дистицього сенсибілізували до вірусу хвороби Ауєскі льованій воді. Для кращого розчинення підігріли введенням її в м’язи стегна в дозі 2cм з.Чepeз 24 до 40°С, потім фільтрували через ватно-марлевий години у всіх тварин на шкірі в місці введення ауфільтр та стерилізували при 120°С протягом 30хв. лергіну виявлено рожеву пухлинність до 20мм в Суміш вірусу з ПЕГ-6000 виготували з розрахунку: діаметрі, болючість, некроз епідермісу, тобто подо 400см 3 центрофугованого вірусу добавили зитивну реакцію, що свідчило про виражену спе100см 3 стерильного 50% розчину ПЕГ. Цю суміш цифічну активність препарату. ретельно збовтали і витримали 4+6°С протягом 24 Приклад 3 годин. Після цього суміш вірусу і ПЕГ центрифугуСпосіб одержання аулергіну здійснювався, як вали при 3000об/хв протягом 30хв. Надосадову описано вище, однак, для виготовлення препарату рідину злили і знешкодили автоклавуванням при застосовувався вірус з титром 10-8,5 ТЦД 50/см 3 до 2атм. (132°С) протягом 2-х годин. До осаду додайого концентрації і прогрівання його при темперавали фізіологічний розчин аСІ з pH7,2 в кількості турі 100°С протягом 40 хвилин. Одержаний аулер40см 3, тобто в 10 разів менше, ніж було взято погін (всього 470мл) при перевірці, як описано вище, чаткового вірусу. Для розчинення осаду його вибув стерильним, нешкідливим, у нього були відсутримували при кімнатній температурі 2 години, тні дермотоксичність, антигенність та сенсибілізупотім центрифугували при 3000об/хв протягом ючі властивості і він мав високу специфічну актив30хв., осад відкинули і знешкодили, а до надосаність. Сукупність перечислених ознак дає дової рідини, яку зливали в одну ємність (40см 3 можливість використовувати а улергін в практичній титром вірусу, що визначався при послідуючій тиветеринарній медицині при оздоровленні неблаготрації 10-9 ЛД50/см 3 для кролів), додавали таку ж получних на хворобу Ауєскі господарств. кількість стерильного хімічно чистого гліцерину Використання способу одержання аулергіну в (стерилізація його проводилась напередодні при практичній ветеринарній медицині є необхідним 120°С протягом 40хв.) Суміш концентрованого для прижиттєвого виявлення свиней вірусоносіїв вірусу з гліцерином (80см 3) інактивували стереліпри хворобі Ауєскі. зацією текучим паром при температурі 120°С 30хв. 5 Комп’ютерна в ерстка Л.Литв иненко 3793 6 Підписне Тираж 37 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601