Спосіб діагностики симптоматичної парціально-генералізованої епілепсії

Спосіб діагностики симптоматичної парціально-генералізованої епілепсії за допомогою імуноферментного методу, який відрізняється тим, що у хворих на епілепсію визначають вміст анти-GM1 аутоантитіл до моносіалових гангліозидів у сироватці крові. (19) (21) u200901571 (22) 23.02.2009 (24) 10.06.2009 (46) 10.06.2009, Бюл.№ 11, 2009 р. (72) ВОЛОШИН ПЕТРО ВЛАСОВИЧ, UA, ВОЛОШИНА НАТАЛІЯ ПЕТРІВНА, UA, ЖУКОВ ВІКТОР ІВАНОВИЧ, UA, ГОРБАЧ ТЕТЯНА ВІКТОРІВНА, UA, ГУБІНА-ВАКУЛІК ГАЛИНА ІВАНІВНА, UA, ЛЕКОМЦЕВА ЄВГЕНІЯ ВОЛОДИМИРІВНА, UA 3 мунну генералізовану епілепсію (McKnight К., Jiang Y., Hart Y., Cavey A., Wroe S., Blank M., Shoenfeld Y., Vincent A., Palace J., Lang B. Serum antibodies in epilepsy and seizure-associated disorders // Neurology. - 2005. - Vol.65. - P.1730-1736.). Серед недоліків прототипу звертає на себе увагу низька специфічність методу (Roubertie A., Boukhaddaoui Н. et all. Antiglial cell autoantibodies and childhood epilepsy: a case report // Epilepsia. - 2005. - Vol.46 (8). P.1308-1312.). В основу корисної моделі покладено задачу вдосконалення способу діагностики симптоматичної парціально-генералізованої епілепсії виникнення якої обумовлено запально-алергічним пошкодженням на тлі інтракраніальної інфекції у вигляді менінгоенцефаліту або енцефаліту чи поствакцинальним запально-алергічним ураженням шляхом вимірювання рівню анти-GM1 аутоантитіл до моносіалових гангліозідів, які мають прямий пошкоджуючий патогенетичний вплив на головний мозок, у сироватці крові імуноферментним методом, що забезпечить покращення специфічності та однозначності способу. Суть корисної моделі полягає в тому, що в сироватці крові хворих на симптоматичну парціально-генералізовану епілепсію вимірюють кількісний вміст анти-GM1 аутоантитіл до моносіалових гангліозідів порівняно з даними хворих на ідіопатичну та криптогенну епілепсію, виникнення якої обумовлено генетичними, клінічно й електроенцефалографічно не встановленими причинами та контрольної групи. Для вирішення поставленої задачі використовують метод імуноферментного аналізу (ІФА) для визначення антитіл до гангліозідів GM1 (Aykutlu E., Baykan В., Gurses С, Gokyigit A., SaruhanDireskeneli G. No association of anti-GM1 and antiGAD antibodies with juvenile myoclonic epilepsy: a pilot study // Seizure. - 2005. - Vol.14. - P.362-366). Метод визначення анти-GM1 аутоантитіл до моносіалових гангліозідів - імуноферментний метод при довжині хвилі 450нм. Метод ІФА дуже поширений й популярний для клінічного визначення більшої кількості антигенів та антитіл у сироватці людини, характеризується швидкістю у виконанні, чутливістю й високою специфічністю (98%), відсутністю у составі наборів небезпечних для здоров'я реактивів. Таким чином, застосування корисної моделі у клініці надасть можливість своєчасної та адекватної діагностики симптоматичної парціальногенералізованої епілепсії, обумовленою перенесеною інтракраніальною інфекцією у вигляді менінгоенцефаліту або енцефаліту. Спосіб діагностики здійснюється таким чином. У пацієнта одержують кров, відстоюють її протягом години при кімнатній температурі, центрифугують при 3тис/об. 15-20хв. і заморожують при – 20°С-28°С. Для визначення кількісного вмісту анти-GM1 аутоантитіл до моносіалових гангліозідів методом ІФА використовують стандартні набори фірми Buhlmann (Швейцарія). Всі процедури виконуються згідно доданим сертифікованим інструкціям. Імуноферментний метод виконується при довжині хвилі 450нм та об'єму дослідного зразка: 20мкл сироватці у розведенні 1:50 та 1:200, час 41917 4 інкубації 4,5 години при 2-8°С. Алгоритм методики полягає в наступному: в лункі додають дослідний антиген і кон'югат, де під час інкубації утримується рівновага між кон'югатом та антигеном у сироватці крові за конкурентне зв'язування з антитілами, що іммобілізовані на внутрішньої поверхні лунок; кількість дослідного антигену у зразку сироватці обернено пропорційно кількості сполучного з антитілами кон'югату. Далі формують базу даних з показників здорових осіб (контрольна група) порівняно з даними показників хворих на симптоматичну парціально-генералізовану епілепсію (основана клінічна група) та порівняно з даними показників хворих на криптогенну та ідіопатичну парціальногенералізовану епілепсію (група порівняння). Приклад В ході дослідження було обстежено 3 клінічні групи: 1 клінічна група складалася з 19 хворих на ідіопатичну та криптогенну парціальногенералізовану епілепсію у віці від 18 до 38 років, середній вік хворих 1 групи складав 28,85±10,32 років. Етіологічний фактор хворих цієї групи не було виявлено ні клінічними даними, ні нейровізуалізаційними методами та багато численними елекроенцефалографічними дослідженнями; 2 клінічну групу було складено з 5 хворих на симптоматичну парціально-генералізовану епілепсію, виникнення якої було обумовлено перенесеною інтракраніальною інфекцією у вигляді менінгоенцефаліту та енцефаліту, середній вік хворих 2 групи складав 23,7±6,44 років, та 3 групу, було складено з 20 здорових осіб (з них 16 жінок, 80% та 4 чоловіка, 20% у віці від 27 до 33 років); середній вік контрольної групи - 29,11±7,14 років. 2 група складалася з 3 хворих жінок (19, 23 та 27p., відповідно), що у віці 2 р. та 4р. зазнали інфекційного бактеріального менінгоенцефаліту та 2 хворих жінок (24 та 32p.), які у віці 3 та 4р. зазнали вірусний грипозний енцефаліт. Інфекційний бактеріальний менінгоенцефаліт та вірусний грипозний енцефаліт супроводжувалися розвитком високої температури тілу, сильним головним болем, блюванням, менінгіальними знаками та на фоні значущої гіпертермічної реакції (tT+39-40°С) діти мали перші генералізовані судороги. У неврологічному статусі на момент обстеження вогнищевої симптоматики не відмічалося. Після інтенсивної антибактеріальної, дезінтоксикаціонної терапії діти були виписані під диспансерний нагляд неврологів по місту мешкання. Парціально-генералізовані напади з'явилися через рік після початку захворювання. Згідно з міжнародною класифікацією епілепсій та епілептичних синдромів (Нью-Делі, 1989р.) у хворих II гр. пароксизмальний синдром був представлений вторинно-генералізованими нападами: простими та комплексними парціальними нападами з вторинною генералізацією та їх сполученням; хворі І групи мали комплексні вторинно-генералізовані напади. Клінічне неврологічне сучасне обстеження хворих виявило наявність розсіяної неврологічної симптоматики, що вказує на ураження мезенцефальних та стовбурових структур головного мозку, яка була більш виражена у хворих II групи. З об'єктивних органічних неврологічних симптомів часті 5 41917 ше за інші зустрічалися порушення черепномозкової іннервації та рефлекторно-рухової сфери у вигляді горизонтального ністагму (12 хворих І гр., 5 хворих II гр.), порушеннях іннервації зіниці (9 хворих І гр., 2 хворих II гр.), асиметрії обличчя (5 хворих І гр., 3 хворих II гр.), порушення статики та координації (3 хворих І гр., 1 хворий II гр.), збільшення сухожилкових рефлексів (3 хворих І гр., 3 хворих II гр.). У структурі неврологічних синдромів майже у всіх обстежених хворих зустрічався синдром вегетативної дистонії. Перебіг симптоматичної набутої парціально-генералізованої епілепсії після 6 інфекційного менінгоенцефаліту та енцефаліту у хворих II групи - фармакорезистентний. В дослідженні було з'ясовано, що хворі 1 клінічної групи - групи порівняння - мають рівень аутоантитіл до моносіалових гангліозідів GM1 такий самий, як і здоровий контроль (показники наведені у таблиці), а хворі на симптоматичну парціальногенералізовану епілепсію мають дуже високий позитивний рівень анти-GM1 аутоантитіл до моносіалових гангліозідів у сироватці крові, які можна розцінити як маркер перенесеної нейроінфекції (табл.1). Таблиця 1 Показники рівню анти-GM1 аутоантитіл до моносіалових гангліозідів сироватки крові хворих 1 групи (група порівняння), 2 групи (основна група) та 3 групи (контроль), Log IgM/IgG GM1 антитіл – титр Показник 1 клінічна група, (n=19) анти-GM1 ауто антитіла до 28±0,64 моносіалових гангліозідів 2 клінічна група, (n=5) контрольна група, (n=20) 126±9,21* 20±0,42 Примітка * - зміни статично значимі порівняно до контрольної групи та при зіставленні з групою порівняння (р