Спосіб визначення морина

Спосіб визначення морина, що включає відбір проби, відокремлювання морина, взаємодію виді 3 лізу становить 3,5 години. Межа виявлення різних флавоноїдів становить (5-1)×10-8M. Це рішення обране як найближчий аналог. Найближчий аналог і корисна модель, що заявляється мають такі спільні операції: 1. відбір проби; 2. розчинення в органічному розчиннику; 3. взаємодія проби з реагентом; 4. реєстрація аналітичного сигналу. Однак, спосіб за найближчим аналогом вимагає попередньої пробопідготовки, що передбачає виділення флавоноїдів шляхом розчинення їх в органічному токсичному розчиннику метанолі, а також нагрівання метанольних розчинів зразків при 70°С. Потім флавоноїди екстрагують органічними розчинниками - гексаном, ефіром, етилацетатом, хлороформом, дихлорметаном, багато з яких є токсичними. Екстракцію проводять тричі. Все це ускладнює підготовку проби до аналізу. Крім того, для реєстрації аналітичного сигналу застосовується фотодіодний матричний детектор, яким постачені не всі хроматографи. Усе це значно ускладнює виконання аналізу. В основу корисної моделі поставлена задача розробити спосіб сорбційно-люмінесцентного визначення одного з флавоноїдів - морина, в якому шляхом заміни реагенту та зміни умов виконання аналізу забезпечити спрощене проведення аналізу та скоротити час його проведення. Поставлена задача вирішена в способі сорбційно-люмінесцентного визначення морина, що включає відбір проби, розчинення її в органічному розчиннику (50%-вому етанолі), взаємодію морина з хімічним реагентом і вимір аналітичного сигналу тим, що морин піддають взаємодії з іонами скандію (III), модифікованими на поверхні сорбенту Sephadex G-75, в присутності бичачого сироваткового альбуміну і буферного розчину гексаметилентетраміну при рН=3,8-4,2. Новим в корисній моделі, що заявляється, є використання твердофазної власної люмінесценції морина, посиленої у присутності скандію (III) та бичачого сироваткового альбуміну на сорбенті Sephadex G-75 при рН=3,8-4,2. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, і досягненням технічного результату полягає в наступному. Спрощення й скорочення часу виконання аналізу стало можливим завдяки наступним прийомам: 1. Виділенню морина з рослинної сировини в 50%-й етанол і подальшому використанні 50%-го етанольного розчину. Застосування такого прийому дозволило виключити використання токсичного метанолу та трьохкратну екстракцію з використанням різних токсичних органічних розчинників, та послідовне висушування екстракту в струмі азоту. 2. Використанню в якості посилюючого реагенту іонів скандію (IIІ) та бичачого сироваткового альбуміну, що утворять комплексну сполуку із морином, який адсорбований на поверхні сорбенту Sephadex G-75 і збільшує інтенсивність власної люмінесценції морина. Етанольний розчин морина при опроміненні Уф-світлом ртутної лампи з lмакс.=365нм проявляє 43619 4 люмінесцентні властивості (lизл.=522нм), але інтенсивність його люмінесценції невелика. При комплексоутворенні з іонами скандію (III) інтенсивність люмінесценції (І люм.) морина зростає за рахунок того, що зростає твердість молекули й зменшуються внутрімолекулярні втрати енергії збудження. Інтенсивність люмінесценції комплексу зберігається на сорбентах. Експериментальне були обрані сорбенти, на яких І люм. морина найбільша. Досліджена сорбція комплексу на різних сорбентах: пінополіуретані, цеолітах (СаА, NaA), фосфаті алюмінію, силікагелі, Sephadex. Максимальна інтенсивність люмінесценції комплексу спостерігається на Sephadex G-75, Sephadex G-150, іммобілізованими іонами скандію (IIІ) (Фіг.1). Для подальшого аналізу нами був обраний сорбент Sephadex С-75 на якому І люм. найбільша. Час сорбції морина становить 10-15 хвилин. Інтенсивність люмінесценції морина залежить від рН розчину, з якого проводиться сорбція (Фіг.2). Максимальна І люм. спостерігається при рН 4,1. Як буфер використовували розчин гексаметилентетраміну 4%-вого. Інтенсивність люмінесценції сорбату залежить від температури і часу висушування сорбенту (Фіг.3). Як видно з рисунка максимальна інтенсивність люмінесценції спостерігається при висушуванні сорбату при 100°С на протязі 60 хвилин. Вивчення залежності інтенсивності люмінесценції морина від кількості скандію (ІII) на Sephadex G-75 показало, що інтенсивність люмінесценції максимальна в області концентрацій скандію (ІII) (0,5-1)×10-2моль/л. Нами обрана концентрація скандію (III)-1×10-2моль/л. Лінійна область залежності інтенсивності люмінесценції комплексу від концентрації морина спостерігається у діапазоні концентрацій морина (1-11)×10-3мг/мл. І люм. сорбату комплексу морина зі скандієм (III) збільшується в 2 рази в присутності альбуміну (використовували бичачий сироватковий альбумін). Сорбційно-люмінесцентне визначення морина проводили у рослинній сировині: листях шовковиці, плодах винограду «Ізабелла», квітах липи, чебреці, листів звіробою, квітах ромашки, чистотілу, подорожник, деревій. Визначення проводили по методу добавок. Приклад. Визначення морина в лікарських рослинах (листях звіробою). Наважку 1г сухого подрібненого листя звіробою переносять у колбу, додають 50мл 50%-вого етанолу й перемішують на магнітній мішалці протягом 60 хвилин при 70°С. Отриманий екстракт відфільтровують на фільтрі «синя стрічка» у мірну колбу. Доводять об'єм екстракту до 50мл 50%-вим етанолом. Як сорбент використовували Sephadex G-75. У три пробірки поміщають по 100мг сорбенту Sephadex G-75, попередньо обробляють 1мл водного розчину хлориду скандію (III) (1-10-2моль/л), перемішують протягом 5 хвилин до гелеподібного стану. 5 43619 Потім в пробірки додають по 1 мл екстракту рослинної сировини, у дві з них додають по 0,25мл стандартного розчину морина з вмістом 5×10-5мoль/л. Потім додають у кожну по 0,1мл уротропину 4%-ного, по 0,1мл 1мг/мл бичачого сироваткового альбуміну й перемішують на протязі 5 хвилин. Якщо інтенсивність люмінесценції отриманого екстракту велика, то розчин необхідно розбавити 50%-им етанолом так, щоб не спостерігалося гасіння люмінесценції. Осад відфільтровують і висушують протягом 60 хвилин при 100°С, розтирають у ступці до порошкоподібного стану й реєструють інтенсивність люмінесценції комплексу, іммобілізованого на сорбенті при lизл.=522нм, при збудженні люмінесценції світлом ртутної лампи зі світлофільтром УФС2 (lвозб.=365нм). Комп’ютерна верстка Н. Лиcенко 6 Аналогічно готовлять проби із другою добавкою по змісту у два рази перевищуючої першу. В 50%-вому екстракті листів звіробою знайдено 0,42мг/мл морина, це становить 21мг морина у 1г сухого продукту. Результати визначення морина перевірені методом «введене-знайдено» і показана правильність розробленої методики (Табл.). Таблиця Результати визначення морина в листях звіробою методом «введено-знайдено» Введено, мг/мл 0,10 0,20 Підписне Знайдено, мг/мл 0,52 0,64 Sr 0,037 0,040 Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601