Спосіб кількісного визначення кверцетину

Спосіб кількісного визначення кверцетину, що включає відбір проби, розчинення в органічному розчиннику, взаємодію виділеного кверцетину з хімічним реагентом і вимірювання аналітичного сигналу, який відрізняється тим, що кверцетин з проби відокремлюють етанолом і піддають взаємодії з хлоридом ітрію (III) у присутності уротропіну при рН=4-5. (19) (21) u200809417 (22) 18.07.2008 (24) 12.01.2009 (46) 12.01.2009, Бюл.№ 1, 2009 р. (72) БЕЛЬТЮКОВА СВІТЛАН А ВАДИ МІВН А, U A, БИЧКОВА Г АННА ОЛЕКСІЇВН А, U A (73) ОДЕСЬКА НАЦІОН АЛЬНА АКАДЕМІЯ ХАРЧОВИХ ТЕХНОЛОГІЙ, U A 3 38597 для реєстрації аналітичного сигналу застосовується дорогий фотодіодний матричний детектор, що значно ускладнює виконання аналізу. В основу корисної моделі поставлена задача розробити спосіб визначення кверцетину, в якому за рахунок використання спектроскопічних властивостей кверцетину забезпечити спрощене проведення аналізу та скоротити час його проведення. Поставлене задача вирішена в способі визначення кверцетину, що включає відбір проби, розчинення її в органічному розчиннику, взаємодію кверцетина з хімічним реагентом і вимір аналітичного сигналу тим, що кверцетин виділяють з проби в етанол і піддають взаємодії з хлоридом ітрію в присутності уротропіну при рН=4-5. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, і досягненням технічного результату полягає в наступному. Спрощення й скорочення часу виконання аналізу стало можливим завдяки наступним прийомам: 1. Виділенню кверцетину з рослинної сировини в етанол і подальшому використанню етанольного розчину. Застосування такого прийому дозволило виключити багатостадійну пробопідготовку з використанням різних токсичних органічних розчинників. 2. Використанню як посилюючий розчин хлориду ітрію (III), що утворює комплексну сполуку із кверцетином і збільшуючого інтенсивність власної люмінесценції кверцетину. Етанольний розчин кверцетину при опроміненні Уф-світлом ртутної лампи з lмакс=365нм проявляє люмінесцентні властивості (lизл=500нм), але інтенсивність його люмінесценції невелика. При комплексоутворенні з іонами ітрію (III) інтенсивність люмінесценції кверцетина зростає в 90 разів за рахунок того, що зростає твердість молекули й зменшуються внутрішньомолекулярні втрати енергії порушення. Режими проведення аналізу обрані експериментально. Інтенсивність люмінесценції кверцетину залежить від рН розчину. Найбільша інтенсивність люмінесценції виявляється при значеннях рн=4-5 (Фіг.1). Як буфер використовували розчин уротропіну 0,4%-ний. Інтенсивність люмінесценції кверцетину залежить від розчинника, який використовували (Табл.1). Як видно з таблиці найбільша інтенсивність люмінесценції спостерігається в етанолі, ацетонітрилі й пропанолі. Для подальшої роботи нами обраний етанол, як найпоширеніший і нетоксичний розчинник. Вивчення залежності інтенсивності люмінесценції кверцетину від кількості ітрію (III) у розчині показало, що найбільша інтенсивність люмінесценції спостерігається в широкому інтервалі концентрацій (0,1-1)×10-3моль/л (Фіг.2). Нами обрана концентрація ітрію (III) – 1×10-3моль/л. Визначення кверцетину проводили у фармацевтичних препаратах «Кверцетин», «Дарсил», «Гінкго білоба», у лікарських рослинах і в настойках лікарських рослин. 4 Приклад 1. Визначення кверцетину у фармацевтичному препараті «Кверцетин». Гранули препарату «Кверцетин» попередньо розтирають у ступці до порошкоподібного стану. Наважку 0,5г препарату переносять у колбу, додають 50мл етанолу, перемішують на магнітній мішалці протягом 30хв., потім фільтрують і доводять об'єм до 50мл. У три пробірки поміщають по 0,5мл аналізованого розчину, у дві з них додають по 0,25мл стандартного розчину кверцетину з вмістом 1,5×10-5г/мл, потім у всі три пробірки додають по 0,5мл розчину хлориду і трію (III) з вмістом 1×10-3моль/л й по 0,2мл уротропіну 0,4%-ного. Розчини доводять до 3мл етанолом, перемішують і реєструють інтенсивність люмінесценції при lзбудж.=500нм. Люмінесценцію збуджували світлом ртутної лампи з lзбудж.=365нМ. Аналогічно готують проби з другою добавкою з вмістом вдвічі більшою за першу. Зміст кверцетину в пробі розраховують по методу добавок по формулі: Сх=Сдоб..І х/І х+доб.-Іх, де Сх - вміст кверцетину в пробі, Сдоб. - концентрація добавки, Іх - інтенсивність люмінесценції проби без добавки, Іх+доб. - інтенсивність люмінесценції проби з добавкою. У препараті «Кверцетин» знайдено 0,038±0,0015г на 1г препарату. Результати визначення кверцетину перевірені методом «введенезнайдено» і показана правильність розробленої методики (Табл.2). Приклад 2.Визначення кверцетину в лікарських рослинах (у шишках хмелю). Наважку 1г здрібнених на млині шишок хмелю переносять у колбу, додають 50мл 50%-ного етанолу (етанол:вода 1:1) і перемішують на магнітній мішалці протягом 60 хвилин при 70°С. Отриманий екстракт фільтрують на фільтрі «синя стрічка» у мірну колбу. Доводять об'єм екстракту до 50мл 50%-ним етанолом. Якщо інтенсивність люмінесценції отриманого екстракту велика, то розчин необхідно розбавити так, щоб не спостерігалося гасіння люмінесценції. Далі визначення проводять таким чином, як і в прикладі 1. У три пробірки поміщають по 0,5мл аналізованого розчину, у дві з них додають по 0,25мл стандартного розчину кверцетину з вмістом 1,5×10-5г/мл, потім у всі три пробірки додають по 0,5мл розчину хлориду ітрію (III) з вмістом 1×10-3моль/л и по 0,2мл уротропіну 0,4%-ного. Розчини доводять до 3мл етанолом, перемішують і реєструють інтенсивність люмінесценції. Аналогічно готують проби з другою добавкою з вмістом вдвічі більшою за першу. Вміст кверцетину розраховують по методу добавок (див. приклад 1). У шишках хмелю знайдено 1мг кверцетина на 1г сухого продукту. Результати визначення кверцетину перевірені методом «введене-знайдено» і показана правильність розробленої методики (Табл.3). 5 38597 6 Таблиця 1 Вплив розчинників на інтенсивність люмінесценції комплексу Розчинник І люм., % Етанол 100 Ацетонітрил 94 Метанол Пропанол Ацетон ДMSО ДМФО 74 92 70 41 4 Таблиця 2 Результати визначення кверцетину в препараті «Кверцетин» методом «введене-знайдено» Добавка мг 0,010 0,020 Знайдено в пробі з добавкою, мг 0,051 0,059 Знайдено в пробі, мг Sr 0,041±0,0027 0,039±0,0017 0,051 0,048 Таблиця 3 Результати визначення кверцетину в шишках хмелю методом «введене-знайдено» Добавка, мг/мл 0,010 0,020 Знайдено в пробі з добав- Знайдено в пробі, мг/мл кою, мг/мл 0,048 0,038±0,0024 0,060 0,040±0,0018 Комп’ютерна в ерстка С.Литв иненко Підписне Sr 0,041 0,039 Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601