Спосіб тест-визначення кверцетину

Спосіб тест-визначення кверцетину, що включає відбір проби, взаємодію кверцетину з хімічним реагентом і вимірювання аналітичного сигналу, який відрізняється тим, що кверцетин піддають взаємодії з іонами ітрію (III), модифікованими на поверхні фосфату алюмінію у присутності уротропіну при рН=4-5. (19) (21) u200809428 (22) 18.07.2008 (24) 12.01.2009 (46) 12.01.2009, Бюл.№ 1, 2009 р. (72) БЕЛЬТЮКОВА СВІТЛАН А ВАДИ МІВН А, U A, БИЧКОВА Г АННА ОЛЕКСІЇВН А, U A (73) ОДЕСЬКА НАЦІОН АЛЬНА АКАДЕМІЯ ХАРЧОВИХ ТЕХНОЛОГІЙ, U A 3 38595 Поставлена задача вирішена в способі визначення кверцетину, що включає відбір проби, розчинення її в органічному розчиннику, взаємодію кверцетину з хімічним реагентом і вимір аналітичного сигналу, згідно корисної моделі, кверцетин піддають взаємодії з іонами іттрію (III), модифікованими на поверхні фосфату алюмінію, у присутності уротропіну при р№=4-5. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, і досягненням технічного результату полягає в наступному. Спрощення й скорочення часу виконання аналізу стало можливим завдяки наступним прийомам: 1. Виділенню кверцетину з рослинної сировини в етанол і подальшому використанні етанольного розчину. Застосування такого прийому дозволило виключити багатостадійну пробопідготовку з використанням різних токсичних органічних розчинників. 2. Використанню в якості посилюючого реагенту іонів іттрію (III), адсорбованих на поверхні фосфату алюмінію, що утворять комплексну сполуку із кверцетином і збільшуючи х інтенсивність власної люмінесценції кверцетину. Етанольний розчин кверцетину при опроміненні Уф-світлом ртутної лампи з lмaкc.=365нм проявляє люмінесцентні властивості (l изл.=500нм), але інтенсивність його люмінесценції невелика. При комплексоутворенні з іонами іттрію (III) інтенсивність люмінесценції кверцетину зростає в 90 разів за рахунок того, що зростає твердість молекули й зменшуються внутрішньомолекулярні втрати енергії порушення. Інтенсивність люмінесценції комплексу зберігається на сорбентах. Експериментально були обрані сорбенти, на яких І люм. кверцетину найбільша. Для цього досліджена сорбція комплексу на різних сорбентах: пінополіуретані, цеолітах (СаА, NaA), фосфа ті алюмінію, силікагелі, Sephadex. Максимальна інтенсивність люмінесценції комплексу спостерігається на фосфаті алюмінію, іммобілізованим іонами іттрію (III). Час сорбції кверцетину становить 10-15 хвилин (Фіг.1). Інтенсивність люмінесценції кверцетину залежить від рН розчину, з якого проводиться сорбція. Ця величина становить рН=4,5 (Фіг.2). Як буфер використовували розчин уротропіну 0,4%ний. Вивчення залежності інтенсивності люмінесценції кверцетину від кількості іттрію (III) на фосфаті алюмінію показало, що найбільша інтенсивність люмінесценції спостерігається в інтервалі концентрацій (0,5-1) 10-2моль/л (Фіг.3). Нами обрана концентрація іттрію (III) - 5×10-3моль/л. Лінійна область залежності інтенсивності люмінесценції комплексу від концентрації кверцетину спостерігається у діапазоні концентрацій кверцетину (1,5-30) 10-3мг/мл. Тест-визначення кверцетину проводили у фармпрепаратах і в лікарських рослинах. Приклад 1. Визначення кверцетину в лікарських рослинах (у плодах розторопші плямистої). Наважку 1г здрібнених на млині плодів розторопші переносять у колбу, додають 50мл 50%-ного 4 етанолу (етанол-вода 1:1) і перемішують на магнітній мішалці протягом 60 хвилин при 70°С. Отриманий екстракт фільтрують на фільтрі «синя стрічка» у мірну колбу. Доводять об'єм екстракту до 50 мол 50%-ним етанолом. Як сорбент використовували медичний препарат «Фосфалюгель», що попередньо відмивають дистильованою водою, фільтрують і висушують. Осад обробляють спиртовим розчином хлориду іттрію (III) (1×10-2моль/л), перемішують на магнітній мішалці протягом 15 хвилин, фільтрують і висушують сорбент протягом 30 хвилин при температурі 60°С. 100мг модифікованого сорбенту поміщають у тигель, додають 1мл екстракту розторопші, потім обробляють 0,1мл 0,4%-ного уротропіну і перемішують на магнітній мішалці протягом 15 хвилин. Осадок фільтрують й реєструють інтенсивність люмінесценції комплексу, іммобілізованого на фосфаті алюмінію при lизл.=515нм, при збудженні люмінесценції світлом ртутної лампи з світлофільтром УФС-2 с (lвoзб.=365нм. Інтенсивність люмінесценції проби порівнюють із інтенсивністю люмінесценції стандартних зразків, що містять різні кількості кверцетину (3-15)×103 мг/мол і підготовлених у такий же спосіб, як описано вище. На підставі порівняльної оцінки роблять висновок про вміст кверцетину в зразку. У плодах розторопші знайдено 1,4мг кверцетину на 1г сухої речовини. Результати визначення кверцетину перевірені методом «введенознайдено» і показана правильність розробленої методики (Табл.1) Приклад 2. Визначення кверцетину у фармацевтичному препараті «Дарсил». Таблетки (2шт.) препарату «Дарсил» попередньо розтирають у ступці до порошкоподібного стану. Наважку 0,5г препарату переносять у колбу, додають 50мл етанолу, перемішують на магнітній мішалці протягом 30хв., потім фільтрують і доводять об'єм до 50мл. Далі визначення проводять таким чином, як у прикладі 1. 100мг модифікованого сорбенту поміщають у тигель, додають 1мл розчину, що аналізується, потім обробляють 0,1мл 0,4%-ного уротропіну й перемішують на магнітній мішалці протягом 15 хвилин. Осад фільтрують і реєструють інтенсивність люмінесценції комплексу, іммобілізованого на фосфаті алюмінію. Інтенсивність люмінесценції проби порівнюють із інтенсивністю люмінесценції стандартних зразків, що містять різні кількості кверцетину (3-15)×10-3мг/мл і підготовлених таким способом, як описано вище. На підставі порівняльної оцінки роблять висновок про зміст кверцетину в зразку. У препараті «Дарсил» знайдено 0,033±0,002г кверцетину на 1 таблетку препарату. Результати визначення кверцетину перевірені методом «введено-знайдено» і показана правильність розробленої методики (Табл.2). 5 38595 6 Таблиця 1 Результати визначення кверцетину в плодах розторопші методом «введено-знайдено» Добавка, мг 0,010 0,020 Знайдено в пробі з добавкою, мг 0,0239 0,0342 Знайдено в пробі, мг 0,0139±0,0024 0,0142±0,0019 Sr 0,041 0,039 Таблиця 2 Результати визначення кверцетину в препараті «Дарсил» методом «введено-знайдено» Добавка, мг 0,010 0,020 Знайдено в пробі з добавкою, мг 0,046 0,052 Комп’ютерна в ерстка Л.Литв иненко Знайдено в пробі, мг Sr 0,036±0,0023 0,032±0,0010 0,051 0,048 Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601