Спосіб одноступінчатого заморожування молочка коропа

Спосіб одноступінчатого заморожування молочка коропа, що передбачає метод пасивного охолодження термоблока у горловині посудини 3 46578 метою виключення впливу початкової різноякісності біооб'єкту, застосовувався перехід від абсолютних одиниць вимірювання - збереженості (S), до відносних - виживання (W) [3]. Для мінімізації згубної дії на біоматеріал прихованого тепла кристалізації був запропонований спосіб ініціації росту позаклітинних кристалів при заморожуванні-відтаюванні, який полягає у включенні в нижню частину пластикової пробірки металевого стержня. Експериментально показано, що при ініціації кристалізації переохолодження статевих клітин коропу зменшується від 3,8 до 0,2 °С. На підставі одержаних результатів була проведена апробація розробленого способу ініціації росту кристалів при двоступінчатому заморожуванні молоки коропу. Контролем слугували загальноприйняті упаковки без елементів, які не ініціюють ріст кристалів. Після відтаювання була проведена оцінка деконсервованого матеріалу, яка показала, що величини збереженості (виживання) статевих клітин коропу в контролі та в досліді склали 40-50±5 % (50-56 %) та 50-60±5 % (6367 %) у різних пробах, відповідно, що є підтвердженням позитивного впливу ініціації кристалоутворення при кріоконсерваціі молоки коропу. Виходячи з одержаних результатів, запропоновано спрощення загальноприйнятої технології двоступінчатого заморожування завдяки виклю 4 ченню першого ступеня охолодження від +5 до -15 °С зі швидкістю 1-2 °С/хв. Можливість такої модифікації полягає у використанні запропонованого контейнера ініціюючого кристалоутворення з допомогою металевого стержня, який в свою чергу виконує функцію першого ступеня охолодження, а саме, мінімізує негативний вплив на статеві клітини величини викиду прихованого тепла кристалізації. Для реалізації спрощеної технології одноступінчатого заморожування термоблок витримується при температурі +5°С на глибині 3 см в горловині сосуду Дьюара Х-5 і 6 см - в Х-34Б. Для заморожування молоки коропа до -70 °С термоблок занурюється на глибину 10,5 см для моделі сосуду Х-5 і 30 см - для Х-34Б. При цьому реалізується швидкість охолодження біооб'єкту об'ємом 0,5 мл в одній дозі близько 20 °С/мин. Після попереднього визначення умов одноступінчатого охолодження проведено заморожування молоки коропа. Оцінка деконсервованого матеріалу показала, що величини збереженості (виживання) коливаються від 50±5 % (63 %) до 60±5 % (67 %), в залежності від вихідної якості біологічного матеріалу. В (табл. 1) представлено показники збереженості та виживання молоки коропа при заморожуванні дво- та одноступінчатим методом. Таблиця 1 Абсолютні (S) та відносні (W) показники якості біоматеріалу при різних способах заморожування Показник якості биоматериалу Початкова рухливість, % Збереженість, % Виживання, % Спосіб заморожування молоки коропа Двоступінчатий Одноступінчатий 80 90 80 90 40 50* 50 60* 50* 60* 50 63* 56 67* 63* 67* ∆ - систематична похибка вимірювання складає 5 %, * - досліди з використанням ініціації кристалоутворення. Переваги запропонованого одноступінчатого способу заморожування молоки коропа, також, в економії матеріальних коштів на проведення процесу кріоконсервації генетичного матеріалу, що дає змогу зменшити витрату хладагента на його охолодження у 8 разів. В запропонованому способі, який дозволяє виключити один технологічний етап, відпадає необхідність у використанні термодатчиків та приладів фіксуючих температуру. Це пов'язано з відносно невеликою різницею температури в горловині сосуду Дьюара який дорівнює ±2,5 °С. Для реалізації одноступінчатого процесу заморожування необхідний лише годинник, що спрощує проведення кріоконсервації в польових умовах безпосередньо на місці забору молоки коропа. Проведено порівняльний економічний розрахунок витратних коштів на заморожування біоматеріалу з використанням фторопластових пластин в двоступінчатий спосіб, та запропонованого одноступінчатого способу охолодження. Показано, що за один цикл заморожування біоматеріалу витрачається приблизно однакова кількість необхід ного матеріалу. Однак при стократному повторі циклу кріоконсервації за допомогою запропонованого одноступінчатого способу охолодження відбувається економія в 50 гривень. Список літератури 1. Горбунов Л.В., Бучацкий Л.П. Криоконсервация половых клеток и эмбрионов животных: Монография - К.: Издательско-полиграфический центр "Киевский университет", 2005. - 325с. 2. Копейка Е.Ф. Инструкция по низкотемпературной консервации спермы карпа: Инструкция рассмотрена и одобрена Ученым Советом ИПКиК АН УССР (протокол №8 от 18.07.86.) и Ученым Советом ВНИИПРХ (протокол №13 от 21.07.86.), инструкция утверждена заместителем министра рыбного хозяйства СССР Б.Д. Монаковым 05.08.86. - Москва, 1986. - 9с. 3. Горбунов Л.В., Бучацький Л.П., Саліна А.С. Можливості розвитку технології кріоконсервації статевих продуктів риби з застосуванням в умовах малих і фермерських господарств //Рибне господарство, №64. - Київ. - 2005. С.95-99. 5 Комп’ютерна верстка Д. Шеверун 46578 6 Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601