Спосіб визначення фунгіцидної дії дезінфектантів на тест-культурах aspergillus fumigatus, aspergillus flavus, aspergillus niger

Спосіб визначення фунгіцидної дії дезінфектантів на тест-культурах Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, що 3 Порівняльний аналіз із прототипом дозволяє зробити висновок, що запропоноване рішення відповідає критерію «новизна». Спосіб виконують таким чином. Вирощування тест-культур мікроміцетів роду Aspergillus проводили на універсальних щільних поживних середовищах , що застосовуються для виділення і культивування грибів - агарі сусло і Чапека. Для приготування агару сусло не хмільне пивне сусло, яке містить за звичай 12-14% цукру, фільтрують через тонкий шар вати і розводять дистильованою водою (у співвідношенні 1:2 або 1:3) до 3-7°С за ареометром Баллінга та додають 2% агар-агар. Готовий агар розливають у пробірки і стерилізують в автоклаві за температури 110 112°С, тиском - 0,5кгс/см2, впродовж 20 хвилин. Штами тест-культур вирощують на щільному поживному середовищі і зберігають у холодильнику за температури 4-8°С. Перед висівом пробірки з культурами витримують за кімнатної температури не менше години, висівають на скошений агар сусло, по 4 пробірки на кожний штам і витримують в термостаті впродовж 7 діб. Спори кожної 7-добової тест-культури музейного штаму (Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus або Aspergillus niger) змивають 5см3 0,5% розчином Твіну-80 і об'єднують в окремому стерильному флаконі. Суспензію тест-культури, яка використовувалася у досліді стандартизують за кількістю спор в 1см3. Підрахунок кількості спор тест-культури проводять в камері Горяєва. З кожного розведення зависі спор, окремими пастерівськими піпетками відбирають по 1 краплі кожного розведення і під мікроскопом (при збільшенні об'єктиву 90´ та окуляру 10´) підраховують кількість спор. Враховують усі спори в 10 великих квадратах кожної краплі зависі з п'ятикратною повторюваністю, тобто в 50 великих квадратах. За робоче розведення суспензії спор вважають те, яке містить 120 спор у 1/5мм3, тобто 600000 у 1см3. У дослідах, за різних умов часу і температури з тест-культур, що досліджувалися, готують позитивний і негативний контролі. За позитивний контроль приймають робоче розведення зависі спор тестових культур музейних штамів (120 спор у 1/5мм3) не оброблених дезінфектантом. Негативний контроль готують з внесенням в живильне середовище відомого фунгіциду, наприклад ністатину (на 100см3 живильного середовища - 30мг ністатину) та робочого розведення зависі спор тестових культур не оброблених дезінфектантом. Визначають концентрації дослідного дезінфектанту, які рекомендовані в умовах застосування. Якщо рекомендовані розведення не виявляли фунгіцидних (фунгістатичних) властивостей, то з матричного розчину готують водні розчини з більшими концентраціями і експериментально встановлюють оптимальні 47469 4 концентрації, які сприяють повній або частковій затримці росту тест-культур мікроміцетів. Інкубування висівів проводять за температури 25-27°С і у терміни 3, 5, 7; 10, 14 і 21 добу проводять підрахунок кількості колоній, що виросли. Обробка результатів аналізу. Для визначення середнього результату кількості росту колоній грибів дослід з використанням ефективних параметрів дезінфектанту (концентрацією, температурою і експозицією) повторюють не менше п'яти разів з підрахуванням колоній, що виросли. За результатами, що отримали в різні терміни, розраховують показник середньої кількості колоній, виписують варіаційний ряд і визначають медіану. Середній результат числа колоній грибів, що виросли для кожного терміну за використання оптимальних параметрів дезінфектанту, визначають шляхом поділу суми всіх колоній на кількість чашок Петрі всіх повторюваностей: C + C 2 + C 3 + Cn C= 1 , N де X - середня кількість колоній, що виросли в чашках Петрі; Х1; Х2, Х3, Xn - число колоній в першій, другій, третій чашках і т. д. N - кількість дослідів (повторюваностей). Якщо досліджували декілька концентрацій, то до застосування пропонується та мінімальна концентрація, яка при оптимальній температурі і експозиції максимально вплинула на затримку росту тест-культури. Приклад 1 Проводили визначення фунгіцидної дії дезінфектанту на тест-культурі Asp. fumigatus. Було встановлено, що за умов кімнатної температури (18-20°С) та експозиції упродовж 60 хвилин фунгіцидні властивості септаміну відносно Asp. fumigatus виявилися у концентрації 0,22%; при підігріванні розчинів дезінфектанту до 50°С протягом 60 хвилин на повну затримку росту тесткультури вплинув 0,07% розчин. Приклад 2 Проводили визначення фунгіцидної дії дезінфектанту на тест-культурі Asp. flavus. Було встановлено, що за умов кімнатної температури (18-20°С) та експозиції упродовж 60 хвилин фунгіцидні властивості септаміну відносно Asp.flavus виявилися у концентрації 0,1%; при підігріванні розчинів дезінфектанту до 50°С протягом 60 хвилин на повну затримку росту тесткультури вплинув 0,05% розчин. Спосіб визначення фунгіцидних властивостей дезінфектантів на тест-культурах Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus та Aspergillus niger є ефективним. Його використання є швидким, економічно вигідним, недорогим та визначає фактичні фунгіцидні концентрації дезінфікуючих засобів. Спосіб модна використовувати в лабораторіях усіх форм власності. 5 Комп’ютерна верстка М. Ломалова 47469 6 Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601