Штам гриба aspergillus tlavus link h-252 продукцент мікотоксину коєвої кислоти

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения нового штамма микромицета, который может быть использован для получения микотоксина коевой кислоты, необходимой как стандарт-свидетель при микотоксикологических исследованиях кормов, пищевых продуктов, культур микроми-цетов с целью диагностики и профилактики коетоксикоза сельскохозяйственных животных и птицы. Известны следующие виды микромицетов способные продуцировать коевую кислоту: Asperglllus clavatus, A. effusus, A. flavus, A. flavus - cryzae, A. funrigatus, A. nidulaus, A. oryzae, A. parasiticus, A. tamaril, A. ustus, Penicillium citrinum, P. purporogenum, P. rubrum. Однако эти культуры не имеют практического значения для получения микотоксина, так как продуктивность известных штаммов низка. Известно использование штамма Aspergillus flavus путем культивирования на зерновых злаках 12/, Однако этот штамм обладает невысокой токсинообразующей активностью, при этом количество образуемой коевой кислоты составляет 0,75-3,20 мг/кг в зависимости от вида субстрата. Цель изобретения - получение нового штамма микромицета, обладающего повышенной продуктивностью микотоксина коевой кислоты. Для достижения этой цели предлагается штамм гриба A.flavus Link H-252, депонирован в коллекции грибов ВНИИ антибиотиков Минмедпрома СССР под номером 335 А. Штамм выделен из корма для животных. Видовая принадлежность определена по классификации Билай В. И. Полученный штамм Aspergillus flavus Link H-252 имеет следующие морфологическую и физиологическую характеристики. На агаре Чапека колонии быстро растущие, на 10 сутки достигают 6-7 см. в диаметре, не превышающие 3-4 см., состоят из довольно бесцветного тонкого мицелия, погруженного в окраинной зоне колонии до 1 см., радиально-бороздчатые, обильно спо-роносящие. Конидиальные головки желтых оттенков, желтого цвета, быстро изменяющие окраску от ярких до желто-зеленых оттенков: оливково-желтовато-зеленых до желтовато-тускло-зеленых при старении. Конидиальные головки радиальные, расцепляются на несколько плохо выраженных колонок не превышают 400-500 мкм. в диам. Конидиеносцы бесцветные, до 1 мм длиной, в терминальной части 10-20 мм шир. и чуть шире к основанию, с утолщенной, грубошероховатой оболочкой. Апикальное расширение при формировании продолговатое, позже более или менее шаровидное, 25-45 мкм в диам. Стеригмы двухъярусные постоянно образуются на конидиеносцах из более мелких головок, 6,5-14 х 35,5 мкм. с утолщенной верхушкой. Конидии почти шаровидные, шиповатые, варьируют от 3-6 мкм в диам. Штамм образует склероции темно-красно-коричневые. Реверзум бесцветный при отсутствии склероции. Оптимальная температура роста штамма 30°С, растет и при более низких температурах - до 2°С. Не растет при 52°С. Оптимальная температура токсинообразования 26-30°С. На жидких питательных средах Чапека, Чапека-Докса, Ролана-Тома, Уилкинсона коетоксигенный штамм гриба хорошо растет и продуцирует микотоксин, также происходит накопление коевой кислоты и на естественных зерновых субстратах- пшенице, ржи, овсе, кукурузе, ячмене и рисе. Полученный штамм хорошо усваивает глюкозу, сахарозу, мальтозу и рафинозу, плохо - сорбит, манит и дульцит. Пример. Гриб-продуцент коевой кислоты штамм Н-252 выращивают на скошенном агаре Чапека в бактериологических пробирках при 30°С в течение 5-6 суток. Затем за сутки до планируемой даты заражения грибом-продуцентом среды Чапека-Докса с повышенным содержанием глюкозы и стерилизуют 40 мин. текучим паром. После стерилизации проводят заражение питательной среды конидиями гриба-продуцента (из расчета 1 пробирка культуры на 6-8 матрацев с питательной средой. Матрацы с культурой гриба на жидкой питательной среде инкубируют в термостате при 30°С в течение 10-12 суток. После инкубирования грибапродуцента культуральную жидкость отделяют от мицелия путем фильтрации через бумажный фильтр. Один литр культуральной жидкости выпаривают на ротационном испарителе под вакуумом при температуре не выше 50°С до получения объема 200-300 см3 и помещают в холодильник на 2-3 дня при температуре 0°С. По мере охлаждения культуральной жидкости происходит осаждение микотоксина. Полученный' осадок отфильтровывают и высушивают под частым вакуумом и проводят перекристаллизацию полученного препарата. Полученные кристаллы высушивают в начале под вакуумом, а затем в эксикаторе над безводным хлористым кальцием. Из одного литра культуральной жидкости получается свыше 3 г кислоты коевой.