Спосіб визначення енрофлоксацину в біологічних об’єктах

Спосіб визначення енрофлоксацину в біологічних об'єктах, що включає етапи екстракції, фільтрації, індикації за допомогою тонкошарової хроматографії, який відрізняється тим, що визначають 3 нювачем - натрієм сірчанокислим безводним, використання системи розчинників в хроматографічній камері: етанол - 10% розчин аміак - бензолу в співвідношенні 10:5:3 та індикації проявляючим реагентом (реактив Драгендорфа), щоб забезпечити ефективність способу. Порівняльний аналіз з прототипом дає змогу зробити висновок, що рішення яке пропонується, відповідає критерію «новизна». Спосіб виконується таким чином: Вилучають антибіотик з проби, що аналізується, осаджують коекстрактивні речовини з кислотно-етанольного розчину на холоді, реекстрагують хлороформом і доочищають реекстракт за допомогою набивного фільтру з наповнювачем (натрій сірчанокислий безводний), застосовуючи ідентифікацію препарату тонкошаровою хроматографією. Для цього використовують хроматографування пластинок в суміші етанол - 10% розчин аміакбензолу в співвідношенні 10:5:3 відповідно й індикації за допомогою проявляючого реагенту (реактив Драгендорфа). Метрологічна характеристика способу вказана в таблиці. Приклад 1 Виділення енрофлоксацину з біологічних об'єктів. Відбирали наважку м'яса та печінки 5г, жиру 1г, молока - 5см3. Досліджуваний препарат екстрагували сумішшю 1 N розчину хлористоводневої кислоти та етанолу в співвідношенні 2:1 впродовж 8-12 годин. Потім проводили фільтрацію отриманого екстракту через ватний тампон. Очищення від жирових фракцій проводили за допомогою виморожування за температури - (18-20)°С впродовж однієї години. Після цього знову проводили фільтрацію через ватний тампон. З отриманого екстракту проводили реекстракцію досліджуваного препарату в хлороформ: у ділильну лійку з екстрактом додавали по 15см3 хлороформу, двічі, екстрагували протягом трьох хвилин. Отриманий хлороформний реекстракт зливали у випарювальні чашки додаючи натрій сірчанокислий безводний та випарювали до сухого залишку. З випарювальних чашок залишки досліджуваного препарату змивали хлороформом, спочатку 3см3, а потім 2см3. Зібраний хлороформ фільтрували через набивний фільтр. Для цього викорис 47470 4 товували скляні трубки діаметром 8мм зі звуженим кінцем, які заповнювали в такому порядку: у нижній кінець фільтру вводили тампон з білої вати до 50мг, потім насипали натрій сірчанокислий безводний - 2,0см і знову вводили тампон з білої вати до 50мг. Після цього фільтр додатково промивали 5см3 хлороформу. Зібраний фільтрат концентрували до об'єму 0,2-0,3см3, додаючи натрій сірчанокислий безводний, та наносили на хроматографічні пластинки із закріпленим шаром силікагелю. Перед використанням на пластинках проводили розмітку за загальними правилами хроматографічних досліджень: лінія старту на 1,2-1,5см від нижнього краю пластинки, відстань між точками нанесення - 2см. У першу точку наносили 10мкг енрофлоксацину, у другу - 5мкг, у третю - 3мкг антибіотика зі стандартного розчину з концентрацією 10мкг/см3. Хроматографування проводили в системі рухливого розчинника - етанол - 10% розчин аміаку-бензол у співвідношенні 10:5:3. Після чого пластинку висушували на повітрі і далі обробляли реактивом Драгендорфа. Енрофлоксацин проявлявся у вигляді плям жовтогарячого кольору. Rf складало 0,65. Межа детектування за цим методом складала 3мкг. Приклад 2 Кількість препарату в досліджуваних об'єктах визначали за формулою.: V ´ A ´ S2 , X= 1 V2 ´ S 1 ´ m де: X - кількість препарату в досліджуваному об'єкті, мг/кг (мг/л); V1 - загальний об'єм кінцевого реекстракту, л; А - кількість препарату, нанесеного на пластинку зі стандартного розчину, мг; S2 - площа плями досліджуваної проби, мм ; V2 - об'єм реекстракту, нанесеного на пластинку, л; S1 - площа плями стандарту, мм2; m - маса досліджуваної проби, кг (л). Спосіб виявлення енрофлоксацину на тонкошарових хроматограммах, який пропонується, є ефективним. Його використання спрощує процедуру аналізу, підвищує точність визначення, є досить безпечним для виконавця і економічно вигідним. Слід застосовувати в хіміко-токсикологічних відділах ветеринарних і медичних установ. 5 47470 6 Таблиця Спосіб визначення енрофлоксацину в біологічних об'єктах Статистичні показники Межа визначення, мг/кг (л) К-сть паралельних проб Розмах варіювання, % М±m, % Стандартне відхилення, % Медіана, % Комп’ютерна верстка А. Крулевський м'ясо 0,6 5 65,0-95,0 77,9±4,6 11,2 75,0 Об'єкти, що аналізуються внутрішні органи (пемолоко чінка) 0,6 1,0 5 5 65,0-95,0 60,0-80,0 78,0±6,0 71,0±4,0 13,5 8,94 70,0 70,0 Підписне жир 3,0 5 55,0-80,0 68,0±5,111,5 65,0 Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601