Спосіб визначення ефекту гасіння люмінесценції біологічного тест-об’єкта сироваткою крові хворих людей

Спосіб визначення ефеїсгу гасіння люмінесценції біологічного тест-об'єісгу сироваткою крові хворої людини з використанням клаптя консервованої ксеногенної шкіри як біологічного тест-об'єкту, який включає попередню інкубацію клаптя консервованої шкіри в сироватці крові з ймовірно високим вмістом речовин - гасників Винахід стосується біофізики і медицини, і може бути використаним в лабораторній діагностиці, а також при розробці нових медико-бюлопчних технологій, зокрема, в діагностичному процесі в онкології та ш Відомий спосіб визначення ефекту гасіння люмінесценції біологічного тест-об'єкту сироваткою крові хворої людини з використанням клаптя консервованої ксеногенної шкіри як біологічного тест-об'єкту, який включає попередню інкубацію клаптя консервованої шкіри в сироватці крові з імовірно високим вмістом речовин - гасників люмінесценції і наступну реєстрацію люмінесцентного СВІТІННЯ [1] Недоліком відомого способу є недостатня інформативність, оскільки недостатнім є рівень чутливості первинної люмінесценції консервованої ксеногенної шкіри до впливу речовин-гасників З цією обставиною пов'язані й ІНШІ недоліки, а саме недостатній рівень точності діагностичного дослідження В основу винаходу поставлено завдання вдосконалити відомий спосіб, в якому шляхом застосування принципу вторинної люмінесценції біологічного тест-об'єкту досягають підвищення чутливості люмінесценції консервованої ксеногенної шкіри до люмінесценції і наступну реєстрацію люмінесцентного СВІТІННЯ, який відрізняється тим, що клапоть консервованої ксеногенної шкіри попередньо зволожують розчином флюорохрома акридина оранжевого на ізотонічному розчині натрію хлориду у розведенні 1 60000 при 20-22°С впродовж 10-15хвилин, після чого на поверхню клаптя шкіри на предметному склі наносять 0,05 мл дослідної проби свіжої сироватки крові і витримують при 20-22°С ще протягом 15хвилин, після чого досліджують у полі зору люмінесцентного мікроскопу, а висновок про наявність ефекту гасіння люмінесценції роблять за характером зниження інтенсивності люмінесценції у порівнянні з контрольним мікропрепаратом впливу речовин-гасників, а отже підвищення інформативності і точності діагностичного дослідження Поставлене завдання вирішують тим, що у відомому способі визначення ефекту гасіння люмінесценції біологічного тест-об'єкту сироваткою крові хворої людини з використанням клаптя консервованої ксеногенної шкіри як біологічного тестоб'єкту, який включає попередню інкубацію клаптя консервованої шкіри в сироватці крові з імовірно високим вмістом речовин - гасників люмінесценції і наступну реєстрацію люмінесцентного СВІТІННЯ, ВІДПОВІДНО до винаходу клапоть консервованої ксеногенної шкіри попередньо зволожують розчином флюорохрома акридина оранжевого на ізотонічному розчині натрію хлориду у розведенні 1 60000 при 20-22°С впродовж 10-15хвилин, після чого на поверхню клаптя шкіри на предметному склі наносять 0,05мл дослідної проби свіжої сироватки крові, після чого мікропрепарат шкубують ще протягом 15 хвилин при 20-22°С і досліджують у полі зору люмінесцентного мікроскопу, а висновок про наявність ефекту гасіння люмінесценції роблять по рівню зниження інтенсивності люмінесценції у порівнянні з контрольним мікропрепаратом Перелік фігур Фіг 1(ФОТО) ЗОВНІШНІЙ ВИГЛЯД взірця тест (О 00 об'єкту люмінесцентного дослідження у вигляді кружечка сухої консервованої шкіри свині Фіг 2 Люмінесценція дослідного мікропрепарату клаптя шкіри, шкубованого в сироватці крові хворого із злоякісним процесом діаграма інтенсивності люмінесценції Я, "Чорно-білий фотопозитив Фіг 3 Люмінесценція контрольного мікропрепарату - інтактного клаптя шкіри діаграма інтенсивності люмінесценції чорнобілий фотопозитив Спосіб здійснюють таким чином Два стандартизованих за площею клаптів сухої консервованої ксеногенної шкіри (контроль і дослід), наприклад, у вигляді плоских кружечків діаметром 0,5 - 1,0см (Фіг1), зволожують розчином флюорохрома акридина оранжевого на ізотонічному розчині натрію хлориду у розведенні 1 60000 Зволоження ведуть у посудині, наприклад, бюксі або чашці Петрі, при 20-22°С впродовж 10-15хвилин, після чого кружечки шкіри поміщають на предметному склі, звільняють від надлишку рідини На поверхню клаптя дослідного мікропрепарату наносять 0,05мл свіжої сироватки крові хворої людини, а контрольний препарат залишають інтактним Після цього мікропрепарати витримують ще протягом 15 хвилин при 20-22°С і досліджують у полі зору люмінесцентного мікроскопу, звертаючи увагу на яскравість люмінесцентного СВІТІННЯ Інтенсивність люмінесценції реєструють або безпосередньо з допомогою фотометричного пристрою, або шляхом попереднього фотографування на фотоплівку в стандартних умовах з наступною фотометрією оброблених фотоемульсійних шарів Висновок про наявність ефекту гасіння люмінесценції в дослідному препараті роблять по рівню зниження яскравості (якісна оцінка) або інтенсивності (КІЛЬКІСНИЙ аналіз) люмінесценції у порівнянні з контрольним мікропрепаратом При зниженні інтенсивності люмінесценції в дослідному препараті на 20-25% і більше, ніж у контролі, роблять висновок про позитивний ефект гасіння люмінесценції сироваткою крові хворої людини, а також про наявність в останній речовин - гасників люмінесценції, що може бути свідченням наявності в організмі надлишку сполук з властивостями вільних радикалів 48426 0,05мл сироватки крові пацієнта, а контрольний препарат залишили без змін Обидва мікропрепарати витримали 15 хвилин при 20°С, після чого досліджували у полі зору люмінесцентного мікроскопу При візуальному дослідженні порівнювали яскравість люмінесцентного СВІТІННЯ в мікропрепаратах Як видно на мікрофотографії (Фіг 2), люмінесцентне СВІТІННЯ тест-об'єкту при інкубації його з сироваткою крові хворого з онкопатолопєю менш яскраве, ніж у контрольному мікропрепарат (Фіг 3) Фотометричний аналіз виявив значно нижчий рівень інтенсивності люмінесценції при інкубації клаптя шкіри у сироватці хворого (40,9у о ), ніж у контролі (64,8у о ), тобто ефект гасіння проявився зниженням інтенсивності люмінесценції дослідного мікропрепарату на 23,6у о , що склало 36,9% і є свідченням значного вмісту у сироватці крові хворого з онкологічною патологією речовин -гасників люмінесценції Приклад 1 Кров для дослідження отримали від хворого Н , 52 років, з діагнозом Меланома шкіри Два клаптя сухої консервованої ксеногенної шкіри - контроль і дослід, виготовленої за технологією проф Бігуняка В В [3], у вигляді плоских кружечків діаметром 8мм зволожили розчином флюорохрома акридина оранжевого на ізотонічному розчині натрію хлориду у розведенні 1 60000 Для цього 0,05мл розчину акридину в розведенні 1 1000 розбавили 2,95мл ІЗОТОНІЧНОГО розчину натрію хлорида Зволожували клапті шкіри у чашці Петрі при 20°С впродовж 15 хвилин, після чого їх помістили на предметне скло і при допомозі фільтрувального паперу звільнили від надлишку вологи На клапоть дослідного препарату нанесли Приклад 2 Запропонованим способом досліджували сироватку крові хворих з різними за походженням доброякісними і злоякісними пухлинними процесами, які перебували на обстеженні і лікуванні в обласному онкологічному диспансері Обстежено матеріал (сироватка крові) від 41 людини, у тому числі 14 здорових, 12-3 доброякісними і 15 злоякісними пухлинами В результаті діагностичного дослідження за запронованим способом у здорових людей і пацієнтів з доброякісними пухлинами рівень гасіння люмінесценції був незначним і практично однаковим У хворих із злоякісними пухлинами шкіри, шлунка і легень феномен гасіння вторинної люмінесценції був вираженим у значно більшій мірі в середньому на 32-45% (Р