Спосіб підтвердження бактеріальної інфекції у дітей раннього віку з пневмоніями

Спосіб підтвердження баїсгеріальної інфекції у дітей раннього віку з пневмоніями шляхом дослідження проби крові, який відрізняється тим, що після інкубування проби крові з нітросинім тетразолієм при результатах Винахід стосується галузі медицини та, конкретно, дитячої пульмонології, для виявлення бактеріальної інфекції у дітей раннього віку, хворих на пневмонію Своєчасне виявлення бактеріального запалення нижніх дихальних шляхів у дітей раннього вікує вкрай необхідним, зважаючи нате, що раціоналізоване призначення адекватної антибактеріальної терапії у цьому випадку, особливо починаючи з перших днів, призводить до важкого та ускладненого перебігу захворювання (Сміян І С , Недошитко Т М Патогенетичний вплив ендогенної інтоксикації на перебіг гострої пневмонії у дітей раннього віку - Педіатрія, акушерство і гінекологія - 1 9 9 8 - № 4 - С 13-16) Не дивлячись на те, що патогенез вірусних і бактеріальних пневмоній різний, клініка їх в груповому аспекті різна, але в кожному конкретному випадку їх відрізнити важко, оскільки більшість симптомів перекривається проявами дихальної недостатності, запальними змінами, тотожними змінами на рентгенограмі (Richard E Berhman , et al Nelson textbook of Pediatrics, 1997 - P 1046-1048) вірусного антигену в секреті дихальних шляхів за допомогою імунофлюоресцентного методу (Douglas N Fish, et al Новое о госпитальной пневмонии Лечение, профилактика и будущие направления - Infections in Medicine - Vol 9 No 1, Spring 1994, P 11-22] Підвищений рівень лейкоцитів у периферичній крові традиційно є ознакою, на яку орієнтується лікар при постановці діагнозу бактеріальної пневмонії (Каганов С Ю , Вельтищев Ю Е Пневмонии у детей - М Медицина, 1995, С Monton et al The inflammatory response in pneumonia - Intensivmedizm und Notfallmedizm, Band 35, Helf 4 (1998) P 261-269) До більш сучасних імунологічних методик виявлення бактеріальної етіології пневмонії відносяться тест нейтрофільних гранулоцитів крові з нітросинім тетразолієм (Авалишвили Т В Фибронектин сыворотки и показатели НСТ-теста у недоношенных детей первых месяцев жизни при сепсисе - Педиатрия - 1997 - № 3 - С 8-10, Дегтярева Е А , Самуилова Д Ш , Островская Э А и др Значение НСТ-теста в диагностике инфекционных осложнений у больных с врожденными пороками сердца - Педиатрия 1995 - № 6 - С 50-54, Пикуза О И , Петрова Г К , Адо Е Й И др Интерфероновый статус и функциональная активность фагоцитов детей с рецидивирующими бронхитами - Педиатрия1997 - № 5 - С 11-13) та кількісне визначення Среактивного протешу в сироватці крові (А Н Татаркина Клиническое значение исследования С-реактивного белка в детской Існують різні підходи в діагностиці вірусних і бактеріальних пневмоній Для верифікації вірусної інфекції використовують такі методи, як інфікування курячих ембріонів, серологічні методи РГТА, РИГА, імуноферментний аналіз (Arvm А М , 1997, Sarah S Long, et al Principles and practice of Pediatnc Infections Diseases - NY 1997 1821) До експрес методу підтвердження вірусної пневмонії можна віднести виявлення НСТ-тесту >17,0 та КІЛЬКІСНОГО визначення С реактивного протеїну сироватки крові > 10,0 мг/л діагностується бактеріальний характер гострого запалення нижніх дихальних шляхів у дітей раннього віку з пневмоніями О о 49200 инфеїсгологии - Микробиология, эпидемиология и клиника инфекционных болезней - Сб научных трудов Харьков - 1991 - С - 73-76, Стефани Д В , Вельтищев Ю Е Иммунология, иммунопатология детского возраста - М Медицина - 1996 - 382 с, David L, Saye and Ken B Waites Clinical applications of C-reactive protein in pediatrics Pediatr Infect Dis J -1997 -16-735-747) Недоліками цих аналогів є те, що ці методи, взяті окремо, дають багато хибнонегативних та хибнопозитивних результатів, що в решті знижує діагностичну ЦІННІСТЬ вказаних методів верифікації бактеріальної етіології запалення Прототипом способу, що заявляється, є спосіб діагностики бактеріальної інфекції при пневмоніях у дітей за допомогою показників С-реактивного протеїну, сироваткового прокальцитоніну та штерлейкіну-6 Використання окремо взятого Среактивного протеїну у виявленні бактеріального характеру пневмонії має специфічність £80%, а чутливість сягала 3 1 % (Ріа Toikka et al Serum procalcitonm, C-reactive protein and interleukm-6 for distinguishing bacterial and viral pneumonia in children// Pediatr Infect Dis J - 2000 - 19, 598602) Недоліками прототипу слід вважати низьку чутливість цього методу при окремому використанні рівня С-реактивного протеїну в сироватці крові В основі способу, що заявляється, лежить підтвердження бактеріальної інфекції у дітей раннього віку з інфекцією нижніх дихальних шляхів за допомогою комплексу показників рівню Среактивного білка та НСТ-тесту нейтрофільних гранулоцитів крові в його спонтанному варіанті для забезпечення раціональної стартової антибютикотерапм в перші дні захворювання Даний спосіб відрізняється від прототипу тим, що враховуються не тільки результати визначення КІЛЬКОСТІ С-реактивного протеїну сироватки крові, але й показники клітинного імунітету, а саме реакція нейтрофільних гранулоцитів периферичної крові з нітросинім тетразолієм, в комплексі обстежень, спрямованих на верифікацію бактеріального характеру запального процесу нижніх дихальних шляхів Ця ВІДМІННІСТЬ ДОЗВОЛЯЄ зробити висновок про ВІДПОВІДНІСТЬ технічного вирішення, що заявляється, критерію "новизна" Суттєва ознака, яка відрізняє від прототипу технічне вирішення, що заявляється, не виявлена у інших технічних вирішеннях при вивченні даної та суміжних галузей науки та, таким чином, забезпечує ВІДПОВІДНІСТЬ способу, який заявляється, критерію "суттєва ВІДМІННІСТЬ" Спосіб здійснюють наступним чином оцінку кисневозалежної метаболічної активності нейтрофільних лейкоцитів крові з врахуванням їх стимуляції пірогеналом проводять за НСТ-тестом, який виконується за методом Park В Н та співавт (Park В Н , Firkmg S М , Smithwick В М , Infection and mtroblue tetrazohum reduction by neutrophilsra diagnostic aid // Lancet - 1968, vol 11 - p 534-536) у модифікації Маянського А Н та співавт (Маянский А Н , Виксман М Е , Котельников П Н , Молчанов И В Характеристика функциональной активности нейтрофилов крови человека с помощью реакции восстановления нитросинего тетразолия // Журн микробиологии, эпидемиологии и иммунологии - 1 9 7 7 - № 6 - с 108-111) Хід визначення 1 Забір крові на гепарині проводиться шляхом додавання 0,5мл крові до 0 5мл розчину (гепарин 0 9%NaCI=1 20) 2 До крові додається фосфатний буфер, інкубація триває 5 хвилин при кімнатній температурі 3 краплини крові +2 краплини буферу 3 Додається 3 краплини НСТ-реактиву 4 Суміш шкубується 10 хвилин у термостаті при температурі 37 град С 10 хвилин при кімнатній температурі 5 Повторне центрифугування складає 5 хвилин, після чого знімається надосад 6 Готується з осаду мазок, який фіксується сумішшю Никифорова 7 Фарбування нейтральним червоним - 15-20 хвилин, промивання ' дистильованою водою, висушування 8 Підрахунок в мазках нейтрофілів "порожніх" і таких, що профагоцитували НСТ підрахунок здійснюється на 100 клітин під мікроскопом за допомогою імерсійного масла Кількісне визначення С-реактивного білку проводять методом простої радіальної імунодифузм в агарі (Mancim G , Garbonaro А О , Heremnus G F Immunichemical quantitation of antigens by single radial immunodiffiision// lmmunochemistry-1965 - Vol 2 - 239-254) Хід визначення 1 Розчинити агар в 20мл дист, води на водяній бані і охолодити до 48 град С - 1,5-2% (або фосфатний буфер чи 5% NaCL) 2 Зразу ж змішати з підігрітою до 40 град С антисироваткою до СРВ в співвідношенні 1 20 3 Нанести піпеткою по 2мл суміші на 10 предметних скелець, встановлених горизонтально, у застиглому гелі готуються лунки В кожну лунку внести 5мкл досліджуванного зразка і стандартну сироватку з визначеним вмістом С-реактивного білку (для побудування калібровочного графіку, зробити ряд розведень стандарту) 4 Замір діаметру кілець преципітації через 4 години, остаточний через 24 Діагностичні критерії способу, що заявляється, щодо підтвердження бактеріальної інфекції у дітей ранньою віку, хворих на пневмонію, наступні при рівні вмісту С-реактивного протеїну сироватки £Ю,0мг/л та даних спонтанного НСТ-тесту нейтрофілів крові £17,0% діагностується бактеріальний характер гострого запалення нижніх дихальних шляхів у дітей раннього віку з пневмоніями Показники діагностичної ЦІННОСТІ способу підтвердження бактеріальної інфекції у дітей раннього віку з пневмоніями, що заявляється, наступні специфічність його складає - 70%, чутливість - 93%, позитивна передбачувальна ЦІННІСТЬ - 90% , негативна передбачувальна ЦІННІСТЬ - 77,7% Показник валідності способу, що 49200 заявляється, який обчислюється як різниця між сумою чутливості і специфічності та 100%, складає 63% Таким чином, запропонований спосіб з використанням комплексу показників вмісту Среактивного протеїну сироватки £Ю,0мг/л та даних спонтанного НСТ-тесту нейтрофілів крові £17,0% із високою чутливістю і позитивною передбачуваною ЦІННІСТЮ при достатній специфічності (на відміну від прототипу) дозволяє підтвердити наявність бактеріального характеру гострого запального процесу нижніх дихальних шляхів у дітей раннього віку з пневмоніями Суть винаходу пояснюється конкретними прикладами застосування способу Приклад 1 Хворий Флексій Ілля Ігорович 4,5 міс, № історії хвороби 3815, лікувався в ОДКЛ з 19 12 1999 р по 6 01 2000 року КЛІНІЧНИЙ діагноз Гостра правобічна пневмонія, дихальна недостатність І ст Гіпотрофія II ступеню Дані параклінічного обстеження С-реактивний протеїн сироватки (21 121999 р) 38мг/л НСТ нейтрофілів спонтанний варіант (21 12 1999 р) 68% Враховуючи вищенаведені результати, а також гіпертермію впродовж 3-х днів на рівні фебрильних цифр та лейкоцитоз крові 10,8Г/л із паличкоядерним зсувом формули вліво, була підтверджена бактеріальна етіологія правобічної пневмонії Призначені гентаміцин + цефотаксим Виписаний з видужанням на 18 добу Приклад 2 Хворий Вайпан Даніель Дорелович, вік 11 міс, № історії хвороби 1617/157, лікувався в ОДКЛ з 1 06 2000 року по 22 06 2000 року КЛІНІЧНИЙ діагноз Гостра правобічна верхньодолькова крупозна пневмонія, ДН І-ІІ ступеню Нейротоксикоз Ексикоз II ступеню Дані параклінінічного обстеження С-реактивний протеїн сироватки крові (6 06 2000 р) - 100мг/л, НСТ-тест нейтрофілів спонтанний (6 06 2000 р ) 27% Враховуючи вищенаведені результати в комплексі, а також беручи до уваги лейкоцитоз периферичної крові 25,6Г/л з нейтрофільним зсувом вліво, виражені явища інтоксикації, ппертермічний синдром, була підтверджена бактеріальна природа пневмонічного процесу і призначена антибактеріальна терапія оксацилін + гентаміцин Хворий виписаний із видужанням на 21 добу Приклад З Хворий Злотарь Степан Володимирович, З МІСЯЦІ, № історії хвороби 1017, лікувався у ОДКЛ з 3 04 2000 року по 12 04 2000 року КЛІНІЧНИЙ діагноз Гострий обструктивний бронхіт Анемія І ступеню змішаного генезу Дані пара КЛІНІЧНОГО обстеження (6 04 2000 р ) С-реактивний протеїн негативний, НСТ-тест нейтрофілів крові - 16% Враховуючи вищенаведені результати, а також відсутність лейкоцитозу в асоціації з токсикозом, бактеріальний характер ураження не був підтверджений, тому антибактеріальні засоби не призначались Хворий отримував симптоматичну терапію, виписаний із видужанням на 9 добу Таким чином, використання способу, що заявляється, дозволяє з високою чутливістю підтверджувати бактеріальний характер гострого запалення нижніх дихальних шляхів у дітей раннього віку з пневмоніями Це, за умови простоти і доступності способу, дає можливість його використання в якості метода первинного скринінга у дітей раннього віку із гострими запальними процесами нижніх дихальних шляхів, що забезпечить своєчасне вирішення питання про раціональне призначення антибактеріальних засобів та отримання позитивного економічного ефекту Цим забезпечується позитивний вплив на стан здоров'я дітей раннього віку, а також отримання позитивного економічного ефекту в процесі їх медичного обслуговування ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71