Спосіб виявлення атопічної форми бронхіальної астми у дітей раннього віку

Спосіб виявлення атопічної форми бронхіаль ної астми у дітей раннього віку, що включає забір венозної крові, приготування мазків та мікроскопію по них еозинофілів, який відрізняється тим, що шляхом мікроскопи визначають показники стимульованого пірогеналом і спонтанного тестів з нітросинім тетразолієм, знаходять їх різницю і при від'ємних значеннях цієї різниці діагностують наявність атопічної форми бронхіальної астми Винахід стосується галузі медицини та, конкретно, дитячої алергологи, для виявлення атонічної реактивності у дітей раннього віку, хворих на бронхіальну астму Своєчасне визначення належної діагностованої бронхіальної астми у дитини до атонічної форми вкрай необхідно, зважаючи на те, що раціоналізоване призначення адекватної базисної терапії у цьому випадку, особливо починаючи з раннього віку, призводить до встановлення невидимого контролю над астмою та попереджує більш важкий м перебіг [Asthma a follow-up statement from an international paediatnc asthma consensus group Arch Dis Child 1992-Vol67-P 240-248] Однак встановлення наявності атонічної реактивності у хворих на бронхіальну астму дітей особливо проблемне в ранньому ВІЦІ у зв'язку із труднощами проведення інгаляційних тестів виявлення пперреактивності дихальних шляхів та необхідності залучення широкої низки комплексних клінікоанамнестичних, генеалогічних, алергологічних та імунологічних досліджень атопічної реактивності, (див Клиническая лабораторная диагностика -1995 - №2 -с 29-32) Як і у способі, що заявляється, як найбільш інформативний об'єкт обрані як маркери алергічного запалення еозинофіли крові, в тому числі при бронхіальній астмі, однак прототипу притаманні такі суттєві недоліки 1 - відсутність показників діагностичної ЦІННОСТІ тесту (специфічність, чутливість тощо) у порівнянні зі стандартом визначення специфічних імуноглобулінів класу Е 2 - використання в якості маркера атонічної реактивності менш специфічних цитоморфолопчних, а не залучених до алергічного запалення метаболічних особливостей еозинофільних гранулоцитів В основу винаходу покладене завдання створити такий спосіб виявлення атонічної форми бронхіальної астми у дітей раннього віку, у якому шляхом заміни параметрів, що вивчаються під мікроскопом, досягається підвищення інформативності діагностики для забезпечення своєчасності та високої специфічності діагностичного процесу Для вирішення завдання запропоновано спосіб виявлення атонічної форми бронхіальної астми у дітей раннього віку, що включає забір венозної крові, приготування мазків та мікроскопію по них еозинофілів, у якому, згідно з винаходом, шляхом мікроскопи визначають показники стимульованого пірогеналом і спонтанного тестів з нітросинім тетразолієм (НСТ-тестів), знаходять їх різницю і при від'ємних значеннях цієї різниці діагностують наявність атонічної форми бронхіальної астми Даний спосіб відрізняється від прототипу тим, що вираховується резерв респіраторного вибуху Існують різні підходи в діагностиці атонічної реактивності у дітей, найпоширенішим з яких є констеляція анамнестичних, генеалогічних, імунологічних та алергологічних досліджень у різних поєднаннях Прототипом способу, що заявляється, є спосіб виявлення атопічної форми бронхіальної астми у дітей раннього віку, що включає забір венозної крові, приготування мазків та мікроскопію по них еозинофілів з розрахунком показника їх пошкодження, який при досягненні ним діагностичного порога 0,45 вважається значущим для верифікацій 00 (О еозинофілів крові як показник їх киснезалежного метаболізму у вигляді різниці результатів тесту цих гранулоцитів з нітросинім тетразолієм (НСТтест) в його стимульованому пірогеналом та спонтанному варіантах Спосіб здійснюють наступним чином оцінку кисневозалежної метаболічної активності еозинофілів крові з врахуванням їх стимуляції пірогеналом проводять за НСТ-тестом, який виконується за методом Park В Н та співавт (Park В Н , Firkmg S М , Smithwick В М , Infection and mtroblue tetrazohum reduction by neutrophils a diagnostic aid // Lancet - 1968, vol 11 - p 534 - 536) у модифікації Маянського А Н та співавт (Маянский А Н , Виксман М Е , Котельников П Н , Молчанов И В Характеристика функциональной активности нейтрофилов крови человека с помощью реакции восстановления нитросинего тетразолия // Журн микробиологии, эпидемиологии и иммунологии 1977 - №6 -с 108-111) Дві проби крові по 0,5мл вміщують у силіконізовані пробірки зі ЮООд гепарину в кожній У першу пробірку додають 0,2мл пірогеналу (бактеріальний ліпосахарид) у фосфатному буфері при рН 7,2 Через 5 хв у обидві пробірки додають по 0,5мл 0,1% розчину нітросинього тетразолія у фосфатному буфері при рН 7,2 та шкубують у термостаті при температурі 37°С протягом ЗО хв Після ТОГО проводять центрифугування Готують по 3 мазки, які висушують на повітрі, потім фіксують метанолом протягом Юхв Для ідентифікації еозинофільних гранулоцитів мазки профарбовують реактивом Піралішвілі протягом 40 - 50с У залежності від вмісту гранул нерозчинного формазану виділяють три ступені вираженості НСТ-тесту 0 ступінь - цитоплазма еозинофілів без гранул, 1 ступінь - мікрогранули займають 1/41/3 цитоплазми, 2 ступінь - гранули займають більше, ніж половину цитоплазми, 3 ступінь - гранули заповнюють всю цитоплазму 44628 дітей раннього віку, хворих на бронхіальну астму Таким чином, запропонований спосіб з використанням показника негативного резерву киснезалежного метаболізму еозинофільних лейкоцитів крові дозволяє з достатньою чутливістю та помірною специфічністю визначати наявність атонічної форми бронхіальної астми у дітей раннього віку Суть винаходу пояснюється конкретними прикладами застосування способу Приклад 1 Хвора Шолода Оксана Василівна, вік 3 роки, № історії хвороби 560/443 КЛІНІЧНИЙ діагноз Бронхіальна астма середнього ступеня важкості, ДН 0-І Дані параклінічного обстеження ЦХК НСТ - тесту еозинофілів спонтанного - 0,60 ЦХК НСТ тесту стимульованого - 0,54 Рівень ІдЕ 240МО Різниця ЦХК НСТ стимульований - ЦХК НСТ спонтанний = (-)0,6 При детальному збиранні анамнезу з'ясовано наявність атонічного дерматиту до року, у бабусі по лінії матері - алергічний дерматит Враховуючи позитивний спадковий та особистий алергологічний анамнез, високий вміст сироваткового імуноглобуліну Е, негативний показник резерву киснезалежного метаболізму еозинофілів крові, можна зробити висновок про наявність у дитини атопічної форми бронхіальної астми Реакцію оцінюють при мікроскопуванні (збільшення 900, об'єктив 90, окуляр 10) у 50 еозинофілах методом середніх ЦИТОХІМІЧНИХ коефіцієнтів (ЦХК) за формулою ІДХК= За + 26 + їв +0г 50 де а, б, в ,г - процент еозинофілів з різним ступенем реакцій Резерв киснезалежного метаболізму еозинофільних гранулоцитів крові обчислюють за формулою ЦХК НСТ стимульований - ЦХК НСТ спонтанний Відсутність позитивної величини різниці підтверджує атопічну реактивність Діагностичні критерії способу, що заявляється, щодо виявлення атонічної реактивності у дітей ранньою віку, хворих на бронхіальну астму, наступні специфічність його складає - 64%, чутливість 80%, позитивна передбачувальна ЦІННІСТЬ - 6 1 % , негативна передбачувальна ЦІННІСТЬ - 82% Показник валідності способу, що заявляється, який обчислюється як різниця між сумою чутливості і специфічності та 100%, складає 44% Зокрема, у таблиці відображено чутливість запропонованого тесту щодо клініко-анамнестичних та імунологічних ознак атопічної реактивності у Приклад 2 Хворий Чонитул Ілля Миколайович, 11 МІСЯЦІВ, історія хвороби № 2686 КЛІНІЧНИЙ діагноз Бронхіальна астма, легка форма, післяприступний період, ДН 0 Дані параклінічного обстеження - ЦХК НСТ - тесту еозинофілів спонтанного - 0,4, ЦХК НСТ тесту стимульованого - 0,1 Різниця ЦХК НСТ стимульований - ЦХК НСТ = (-)0,3, рівень сироваткового IgE 125MO У дитини прояви себорейного дерматиту, у матері - бронхіальна астма, у діда по лінії батька - хронічний бронхіт Дані позитивного алергологічного анамнезу, величину вмісту сироваткового імуноглобул та негативного значення резерву киснезалежного метаболізму еозинофільних гранулоцитів крові крові підтверджують атопічну реактивність у дитини Приклад 3 Хвора Шевчук Алла Іванівна, вік 4,5 роки, історія хвороби № 375/473 КЛІНІЧНИЙ діагноз Бронхіальна, астма Змішана форма, середній ступінь важкості, міжприступний період, ДН І Дані параклінічного обстеження ЦХК НСТ - тесту еозинофілів спонтанного - 0,08, ЦХК НСТ тесту стимульованого - 0,20 Різниця ЦХК НСТ стимульований - ЦХК НСТ = (+)0,12 Рівень сироваткового імуноглобуліну - 60МО Спадковий та особистий алергологічний анамнез не обтяжені Відсутність обтяженості спадкового та конституційного алергологічного анамнезу, позитивний резерв кисневого вибуху еозинофілів крові підтверджує відсутність атонічної реактивності у даної хворої Таким чином, використання способу, що заявляється, дозволяє з високою чутливістю виявляти атопічну форму бронхіальної астми у дітей раннього віку Це, за умови простоти і доступності способу, дає можливість його використання в якості метода первинного скринінга для підтвердження наявності атонічної реактивності у хворих на бронхіальну астму дітей раннього віку, що забезпечить своєчасну раціоналізацію ступеневої базисної терапії бронхіальної астми у дітей згідно ICR 92 та досягнення контролю над нею, тобто в решті - отримання позитивного економічного ефекту Цим забезпечується позитивний вплив на 44628 стан здоров я дітей, а також отримання позитивного економічного ефекту в процесі їх медичного обслуговування Таблиця Показники діагностичної ЦІННОСТІ негативного резерву киснезалежного метаболізму еозинофільних лейкоцитів крові у виявленні атопічної реактивності у дітей раннього віку Ознаки атонічної реактивності Рівень сироваткового ІдЕ> 100 MO (n = 20) Позитивний спадковий алергологічний анамнез (п = 18) Позитивний конституційний алергологічний анамнез (п = 15) Чутливість Специфічність 80% 64% Передабчувана ЦІННІСТЬ позитивна негативна 61% 82% ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90