Експрес-діагностика стану компенсаторно-захисних сил організму на ендотоксикоз при перитоніті

Експрес-діагностика стану компенсаторнозахисних сил організму при перитоніті шляхом визначення ендотоксикозу та співставлення отриманих показників з лейкограмою, який відрізняється тим, що для визначення рівня ендотоксикозу у хворих на гострий перитоніт застосовується біосенсорний метод (оцінка типу реакції тестсистеми культури Dunaliella viridis на ендотоксикоз), що дозволяє на ранніх етапах розвитку перитоніту діагностувати тяжкість перебігу та призначити коригуючу терапію. (19) (21) u200912992 (22) 14.12.2009 (24) 25.05.2010 (46) 25.05.2010, Бюл.№ 10, 2010 р. (72) ПОЛЬОВИЙ ВІКТОР ПАВЛОВИЧ, СОЛОВЕЙ ЮРІЙ МИКОЛАЙОВИЧ, БОЖКОВ АНАТОЛІЙ ІВАНОВИЧ, КЛІМОВА ОЛЕНА МИХАЙЛІВНА, СОЛОВЕЙ ВАЛЕНТИНА МАНОЛІЇВНА (73) БУКОВИНСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ МОЗ УКРАЇНИ 3 50174 визначення адекватності захисних сил організму на ендотоксикоз при перитоніті №49166 А, МПК G01N 33/48 Бюл.№9/2002]. Згідно якого, для оцінки рівня ендотоксикозу у хворих на гострий гнійний перитоніт визначається питома електропровідність сироватки венозної крові за допомогою запропонованого авторами приладу з електродами, що покриті платиновою черню та реохордного моста Р-38 на змінному струмі з частотою 50Г цвизначають опір сироватки після витримування її в термостаті протягом 10 хвилин при температурі 37 С. Питому електропровідність встановлюють за запропонованою авторами формулою. Отримані показники питомої електропровідності сироватки венозної крові співставляють з показниками лейкограми. Недоліком цього способу є обов'язкова наявність спеціального приладу та технічна складність виконання даного способу, що не завжди є доступним в умовах будь-якого хірургічного стаціонару. В основу корисної моделі поставлено задачу створення удосконаленого способу експрес - діаг 4 ностики функціонального стану компенсаторно захисних сил організму відповідно рівню ендотоксикозу у хворих на гострий перитоніт по типу реакції тест системи культури Dunaliella viridis на ендотоксикоз та співставлення цих даних з показниками лейкограми (лейкоцити, паличкоядерні нейтрофіли), що дозволить оцінити перебіг та прогноз гострого перитоніту, підібрати адекватну терапію та підвищити ефективність лікування хворих на перитоніт. Поставлена задача вирішується шляхом внесення в завись синхронізованої культури одноклітинної водорості Dunaliella viridis фіксованого об'єму сироватки крові хворих на перитоніт та оцінку зміни форми клітин водорості, наявності, кількості і розмірів клітинних агрегатів, а також наявності глікопротеїнової оболонки утвореної з агрегатів, зміну розмірів клітин водорості, форму клітинних мікро- та макроагрегатів,наявності філаментів і включень, спонтанну рухливість клітин водорості за методикою Клімової О.М. та співав. Див. таб. 1. Таблиця 1 Ступінь важкості І II ІII-А ІІІ-Б IV Рівень ендотоксикозу компенсований компенсований субкомпенсований декомпенсований термінальний стан клітин що втратили рухливість 0-10 10-20 30-40 50-70 80 і вище Наступним етапом, є оцінка функціонального стан захисних сил організму за лейкоформулою. Найбільш простим та інформативним є визначення абсолютної кількості лейкоцитів та відсотковий клітин, що утворюють мікро-, макроагрегати 0-10 мікроагрегати 10-20 мікроагрегати 30-40 мікроагрегати 50-70 макроагрегати 90 і вище макоагрегати клітин що змінили форму немає немає немає немає 80 вміст паличко ядерних нейтрофілів. Показники лейкограми у хворих на гострий перитоніт наведені в таблиці 2. Таблиця 2 Ступінь важкості перитоніту І II III-А III-В IV Кількість хворих, n Лейкоцити, Г/л 6 8 10 10 8 8,8 0,2 10,5 0,3 12,6 0,3 17,4 0,5 24,1 0,6 Спільною ознакою прототипу та корисної моделі визначення рівня ендотоксикозу, використання показників лейкограми, для оцінки функціонального стану захисних сил та співставлення з рівнем ендотоксикозу при перитоніті. Відмінність винаходу від прототипу полягає у використанні для визначення рівня ендотоксикозу при перитоніті біосенсора, а саме типу реакції тест системи культури одноклітинної водорості Dunaliella viridis на ендотоксикоз, як способу його експрес- діагностики . Теоретичні передумови здійснення винаходу полягають в наступному: Стандартні діагностичні лабораторні методи основані на кількісній оцінці сигнальних маркерних показників ендотоксикозу в сироватці крові хворого Паличкоядерні нейтрофіли, 8,5 0,1 12,1 0,5 17,3 0,2 23,3 2,8 28,2 3,3 на перитоніт, тобто речовин, зміна вмісту яких в сироватці крові корелює з розвитком тієї чи іншої форми перитоніту. Сукупність патогенетичних сироваткових факторів, викликає мембранотропний цитотоксичний ефект. Діагностична задача для виявлення сигнальних маркерів зводиться до визначення інтегральної біологічної дії цитотоксичних факторів. Інтегральне тестування цитотоксичних компонентів сироватки крові, на різних етапах їх утворення, ефективно вирішується за допомогою різних біодатчиків, так як в біологічній системі відбувається посилення сигналу, який достатньо просто і ефективно реєструється. Біосенсорні методи визначення сироваткових цитотоксичних компонентів основані на формуванні специфічного сигналу відповіді біодатчика, тобто біологічно чут 5 50174 ливої системи, посиленні цього сигналу і простої системної реєстрації. Оскільки біодатчик дає різноманітні реакції відповіді, біосенсори можуть розглядатись як універсальні реєстратори цитотоксичних сироваткових факторів. В даній корисній моделі ми використовуємо в якості біодатчика культуру одноклітинної водорості Dunaliella viridis . Суть корисної моделі ілюструється прикладом її конкретного виконання. Спосіб полягає в наступному. Перший етап - забір крові шляхом венпункції у хворих набирають 2мл крові,центрифугують протягом 10 хвилин при 1600об/хв.. Сироватку переносять в імунологічний планшет. Додають готову синхронізовану тест систему Dunaliella viridis. Наступний етап полягає в спільній інкубації в імунологічному планшеті заданих об'ємів клітинної суспензії Dunaliella viridis з певною кінцевою концентрацією клітин і досліджуваної сироватки крові хворого на перитоніт. Потім проводять візуальну оцінку (за допомогою мікроскопії) реакції відповіді на цитотоксичні фактори біодатчика: оцінку зміни форми і розмірів клітин водорості, наявності, кількості, розмірів і форми клітинних мікро-та макроагрегатів, а також наявності глікопротеїнової Комп’ютерна верстка А. Крижанівський 6 оболонки, утвореної у агрегатів, філаментів і включень, спонтанну рухливість клітин водорості. Діагностику здійснюють віднесенням до однієї з форм гострого перитоніту -I,II,III-A,III-B,IV ступенів важкості. При втраті рухливості 75-80% клітин біосенсора, зміні форми у 80% клітин біосенсора і залучення до утворення макроагрегатів більше 90% клітин біосенсора діагностують гострий перитоніт IV-ступіня важкості перитоніт. Наступний етап полягає в оцінці функціонального стан захисних сил організму за лейко формулою: зменшення загальної кількості лейкоцитів, зростанням відсотку паличко ядерних нейтрофілів вказує на невідповідність стану захисних сил організму рівню ендотоксикозу та незворотній термінальний стан, декомпенсацію органів та систем організму, що забезпечують захисні реакції організму на ендотоксикоз при гострому перитоніті. Таким чином, запропонований спосіб дозволяє на ранніх етапах розвитку діагностувати стан компенсаторно - захисних сил організму на ендотоксикоз, оцінити важкість перебігу перитоніту та вчасно призначити відповідну коригуючу терапію, що забезпечить зменшенню кількості ускладнень та скороченню терміну перебування хворого в стаціонарі. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601