Спосіб оцінки локального імунітету в порожнині рота

Спосіб оцінки локального імунітету в порожнині рота, який передбачає визначення функціональної активності клітин з поверхні слизової оболонки порожнини рота, який відрізняється тим, що як клітини використовують лімфоцити, які виділяють зі змивів з поверхні слизової оболонки порожнини рота на градієнті фіколверографіну та шкубують з сенсибілізованими кролячими протиеритроцитарними антитілами еритроцитами барана, потім обробляють перекисом водню і метолом, після чого на спектрофотометрі з довжиною хвилі 468 нм визначають екстинцію в пробах з еритроцитами (Ее) та досліджуваному зразку (Ео), визначають показник антитілозалежної клітинної опосередкованої цитотоксичності за формулою Ее-Ео/Ее та діагностують пригнічення локального імунітету при зниженні цього показника більш ніж на 33 % порівняно зі здоровими пацієнтами Винахід, який заявляється, стосується галузі медицини, а саме імунологи і стоматологи, та призначений для оцінки стану локального імунітету в порожнині рота Визначення стану антиінфекційної резистентності верхніх ВІДДІЛІВ травного каналу, в т ч локального імунітету порожнини рота, є важливим і актуальним завданням експериментальної і клінічної медицини [1] Наявність ефективного КІЛЬКІСНОГО методу оцінки функціональної активності клітинної ланки імунітету дозволить підвищити інформативність лабораторної оцінки стану порожнини рота у пацієнтів з хронічними ураженнями слизової оболонки порожнини рота (СОПР) і інших ділянок верхніх ВІДДІЛІВ травного каналу Відомий спосіб визначення стану імунітету порожнини рота шляхом визначення вмісту секреторного імуноглобуліну А у змішаній слині Однак, вказаний спосіб дозволяє охарактеризувати стан лише гуморальної ланки імунітету і не може використовуватись для прогнозування перебігу захворювань, які спричиняються внутрішньоклітинними ураженнями, в першу чергу вірусними і пухлинними Патогенетичні механізми, притаманні цим захворюванням, визначаються активністю клітинної ланки імунної ВІДПОВІДІ [2] Найбільш близьким до запропонованого технічного рішення аналогом ( прототипом ) є спосіб оцінки локального імунітету порожнини рота шляхом визначення структури хроматину та функціонального стану клітин з поверхні слизової оболонки порожнини рота [3] Структура хроматину клітин з поверхні епітелію порожнини рота є непрямою ознакою активізації чи супресп їх метаболізму, але не відображає участі цих клітин у формуванні імунних реакцій Таким чином, технічне рішення, запропоноване у прототипі, не дозволяє судити про ступінь порушень локального імунітету порожнини рота 7 Завдання, яке вирішується у даному винаході, полягає у створенні способу визначення стану локального імунітету порожнини рота, який би дозволяв КІЛЬКІСНО оцінювати функціональну активність клітин з поверхні слизової оболонки порожнини рота Технічний результат, який досягається, полягає у можливості визначення нормального стану, пригнічення чи активації показників клітинної ланки локального імунітету порожнини рота у пацієнтів з різними формами ураження СОПР та оцінки імуномодулюючої ефективності різних методів лікування Поставлена задача вирішується завдяки тому, що у відомому способі визначення стану локального імунітету порожнини рота, який передбачає визначення функціональної активності клітин з 00 ю 51148 поверхні слизової оболонки порожнини рота, згідно винаходу, у якості клітин використовують лімфоцити, які виділяють зі змивів з поверхні слизової оболонки порожнини рота на градієнті фіколверографіну та шкубують з сенсибілізованими кролячими протиеритроцитарними антитілами еритроцитами барана, потім обробляють перекисом водню і метолом, після чого на спектрофотометрі з довжиною хвилі 468нм визначають екстинцію в пробах з еритроцитами (Ее) та досліджуваному зразку (Ео), визначають показник антитілозалежної клітинної опосередкованої цитотоксичності за формулою Ее-Ео/Ее та діагностують пригнічення локального імунітету при зниженні показника більш ніж на 33% порівняно зі здоровими пацієнтами ВІДМІННОЮ особливістю способу оцінки локального імунітету порожнини рота, що заявляється, є те, що у якості клітин використовують лімфоцити, які виділяють зі змивів з поверхні слизової оболонки порожнини рота на градієнті фікол-верографіну та шкубують з сенсибілізованими кролячими протиеритроцитарними антитілами еритроцитами барана, потім оброблять перекисом водню і метолом, після чого на спектрофотометрі з довжиною хвилі 468нмвизначають екстинцію в пробах з еритроцитами (Ее) та досліджуваному зразку (Ео), визначають показник антитілозалежної клітинної опосередкованої цитотоксичності за формулою Ее-Ео/Ее та діагностують пригнічення локального імунітету при зниженні показника більш ніж на 33% порівняно зі здоровими пацієнтами Спосіб оцінки локального імунітету порожнини рота здійснюється наступним чином Порожнину рота пацієнта ополіскують фізіологічним розчином з рН 7,4 протягом п'яти хвилин Через 7-10 хвилин пацієнту пропонують утримувати у роті 20мл фізіологічного розчину протягом п'яти хвилин і сплюнути ротову рідину у стерильну пробірку Отриманий таким чином змив клітин центрифугують, осад ресуспензують в 2 мл середовища 199, потім виділяють лімфоцити за стандартною методикою на градієнті фікол-вірографіну [3] Виділені лімфоцити шкубують з еритроцитами, попередньо сенсибілізованими антитілами, у співвідношенні 1 20 при температурі 37°С протягом 18 годин та обробляють перекисом водню і метолом Суміш спектрофотометрують при довжині хвилі 486нм і визначають екстинцію дослідного взірця (Ео) У якості контролю використовують показники екстшцм сенсибілізованих еритроцитів (Ее) Антитілозалежну клітинно-опосередковану цитотоксичність (АЗКОЦ) визначають з урахуванням екстинцм обох проб за формулою АЗКОЦ = Ее - Ео / Ее ( % ) Аналогічну процедуру дослідження здійсню ють у групі здорових пацієнтів Оцінку стану локального імунітету здійснюють шляхом порівняння показників АЗКОЦ у пацієнта і групі здорових Для оцінки ступеня пригнічення чи стимуляції АЗКОЦ використовують традиційний для імунологічних досліджень метод визначення ступеня імунної недостатності/стимуляції (СІН/СІС) [4] Пригнічення чи стимуляцію локального імунітету оцінюють як СІН/СІС 1-го ступеня при ЗМІНІ показника у межах 20-33%, ІІ-го ступеня - 33-66%, ІІІ-го - понад 66% Конкретний приклад здійснення Визначення АЗКОЦ здійснювали у 25 дітей з хронічним рецидивуючим афтозним стоматитом та 25 здорових дітей віком 5-15 років Для цього порожнину рота у всіх обстежених дітей попередньо ополіскували фізіологічним розчином з рН 7,4 протягом п'яти хвилин Через 7-10 хвилин діти утримували у роті по 20мл фізіологічного розчину протягом п'яти хвилин і спльовували ротову рідину у стерильні пробірки Отриманий таким чином змив клітин центрифугували, осад ресуспензували у 2мл середовища 199, потім виділяли лімфоцити за стандартною методикою на градієнті фікол-вірографіну [3] Виділені лімфоцити шкубували з еритроцитами, попередньо сенсибілізованими антитілам, у співвідношенні 1 20 при температурі 37°С протягом 18 годин та обробляли перекисом водню і метолом Вказану суміш спектрофотометрували при довжині хвилі 486нм і визначали показники екстинцм у дітей з хронічним рецидивуючим афтозним стоматитом (Ео) У якості контролю використовували показники екстинцм сенсибілізованих еритроцитів (Ее) Антитілозалежну клітинноопосередковану цитотоксичність взірців у дітей зі стоматитом (АЗКОЦ-с) визначали за формулою АЗКОЦ-с = Ее - Ео / Ее ( % ) Аналогічну процедуру дослідження здійснювали у групі здорових пацієнтів і визначали антитілозалежну клітинно-опосередковану цитотоксичність здорових (АЗКОЦ-з) Оцінку стану локального імунітету у дітей з хронічним рецидивуючим афтозним стоматитом здійснювали шляхом порівняння показників АЗКОЦ-с і АЗКОЦ-з Для оцінки ступеня пригнічення чи стимуляції АЗКОЦ використовували традиційний для імунологічних досліджень метод ступеня імунної недостатності/стимуляції (СІН/СІС) [4] Пригнічення чи стимуляцію локального імунітету оцінювали як СІН/СІС 1-го ступеня при ЗМІНІ показника у межах 20-33%, ІІ-го ступеня - 33-66%, ІІІ-го - понад 66% Результати дослідження порівнювали з показниками дітей з хронічним рецидивуючим афтозним стоматитом ( 25 осіб ) та здорових ( 25 осіб ), обстежених за методом прототипу [3] (таблиця 1) Таблиця 1 Результати порівняльного аналізу визначення стану локального імунітету за запропонованим методом і прототипом Способи визначення стану локального імунітету Прототип КІЛЬКІСТЬ змінених клітин (%) Запропонований АЗКОЦ (%) Здорові (п=25) 11,1+0,8 25,3±1,5 Хворі зі стоматитом (п=25) 18,4±2,4 12,6±1,1 51148 Результати дослідження за методом прототипу свідчать про підвищення у 1,65 рази вмісту клітин з порушенням структури хроматину у порожнині рота дітей з ХРАС, що опосередковано свідчить про пригнічення показників локального імунітету порожнини рота Однак, отримані результати не дозволяють визначити характер і ступінь місцевого імунодефіциту Аналіз результатів визначення стану локального імунітету порожнини рота доводить зменшення у 2 рази показників АЗКОЦ у дітей з хронічним рецидивуючим афтозним стоматитом, тобто вказує на 50% дефіцит клітин-кілерів Вказані зміни можна оцінити як пригнічення імунітету 11-го ступеня Перевагами запропонованого способу перед прототипом є те, що він дозволяє охарактеризувати стан локальної імунної ВІДПОВІДІ СТОСОВНО бак теріальних, вірусних та пухлинних антигенів, оцінити ступінь вираженості імунних порушень, передбачає застосування автоматизованих вимірів та спрощеної математичної формули Список літератури, яка використовувалась 1 Савицкая К И , Воробьева А А , Русанова Е В Роль неспорообразующих анаэробов в формировании микробного пейзажа, содержимого толстой кишки у больных с воспалительными процессами процессами различной локализации // Вестник Российской Академии медицинских наук-1996№ 2 - С 15-23 2 Лебедев К А , Понякина И Д Иммунограмма в клинической практике - М Наука,-1990-С 224 3 Маянский А Н , Воробьева О Н , Малишева О Ф и соавт Взаимоотношения между естественной колонизацией и адгезией бактерій к буккальному єпителию у человека // Журнал микробиологии, микробиологии, эпидемиологии и иммунологии 1 9 8 7 - № 2 - С 18-20 4 Земсков А М , Земсков В М Дополнительные методы оценки иммунного статуса // Клиническая лабораторная диагностика-1994 - № 3 - С 3 4 35 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71