Спосіб мікроскопічної діагностики фібрину, колагенових волокон та відкладань кальцію в одному гістологічному зрізі плаценти

Спосіб мікроскопічної діагностики фібрину, колагенових волокон та відкладань кальцію в плаценті шляхом світлової мікроскопи пофарбованого Винахід відноситься до медицини, а саме до патологічної анатоми, судової медицини та акушерства і може бути використаний для морфологічної діагностики патології плаценти - органа, який має провідне значення для нормального перебігу вагітності Мікроскопічна діагностика різних елементів тканин плаценти з використанням різних методів забарвлення ГІСТОЛОГІЧНИХ зрізів дозволяє достовірно встановлювати патологію цього органу, яка може спричинити невиношування вагітності або народження неповноцінної дитини Виявлення фібрину, колагенових волокон та відкладень кальцію, оцінка розповсюдженості даних елементів у тканині плаценти є принципово важливим для встановлення і диференціювання різних видів недостатності цього органу Аналогом способу мікроскопічної діагностики фібрину є методика Вейгерта з барвником генціановим фіолетовим (Кисели Д Практическая микротехника и гистохимия - Будапешт Издательство АН Венгрии - 1962 - с 143 ), колагенових волокон - класична пікрофуксинова методика ван Пзона (Кисели Д Практическая микротехника и гистохимия - Будапешт Издательство АН Венгрии - 1962 -с 122), відкладень солей кальцію - фарбування барвником алізарином червоним (Кисели Д Практическая микротехника и гистохимия Будапешт Издательство АН Венгрии - 1962 с 327) Недоліком всіх аналогів є те, що в зрізі достовірно можна діагностувати тільки один із зазначених елементів хромотропом та світлим зеленим ГІСТОЛОГІЧНОГО зрізу плаценти в прохідному СВІТЛІ, ЯКИЙ відрізняється тим, що після мікроскопи фібрину та колагенових волокон у прохідному СВІТЛІ додатково встановлюють інфрачервоний світлофільтр до окуляра мікроскопа та проводять мікроскопію через видошукач відеокамери, яка реєструє інфрачервоне світло, і при наявності темних ділянок у зображенні діагностують відкладання кальцію Прототипом винаходу є спосіб мікроскопічної діагностики фібрину та колагенових волокон в плаценті шляхом звичайної світлової мікроскопи пофарбованого хромотропом та світлим зеленим ГІСТОЛОГІЧНОГО зрізу в минаючому СВІТЛІ, ЯКИЙ опи саний в статті Давиденко І С Модифікація ГІСТОХІМІЧНОЇ методики фарбування фібрину та колагенових волокон у плаценті// Буковинський медичний вісник -2001 -Т 5, №1 -С 147 -150 Необхідно ВІДМІТИТИ, що спосіб-прототип адаптований спеціально для тканини плаценти, оскільки врахований особливий склад колагенів цього органу Для інших органів дана методика може бути не адекватною Спосіб-прототип полягає у наступних послідовних операціях Спочатку ГІСТОЛОГІЧНІ зрізи фарбують хромотропом та світлим зеленим Потім у минаючому СВІТЛІ за допомогою світлового мікроскопа вивчають характер забарвлення елементів тканини і по червоному забарвленню діагностують фібрин, а по зеленому - колагенові волокна Недоліком прототипу є те, що застосування даного способу не дозволяє в тому ж зрізі виявити відкладання кальцію, які є важливим діагностичним критерієм патології плаценти Не відомий жодний спосіб, який дозволяв би в одному зрізові достовірно візуалізувати всі три різних за властивостями об'єкта як фібрин, плацентарні колагенові волокна та відкладання кальцію Нами пропонується спосіб, який усуває вказані недоліки, тобто дозволяє в одному гістологічному со ю ю 51153 зрізові одночасно діагностувати фібрин, колагенові волокна та відкладання кальцію В основу винаходу поставлена задача удосконалити спосіб діагностики мікроскопічної патології плаценти шляхом введення додаткової операції інфрачервоної мікроскопи ГІСТОЛОГІЧНОГО зрізу Поставлена задача вирішується тим, що в способі мікроскопічної діагностики фібрину, колагенових волокон та відкладань кальцію в плаценті шляхом світлової мікроскопи пофарбованого хромотропом та світлим зеленим ГІСТОЛОГІЧНОГО зрізу плаценти в минаючому СВІТЛІ, ЗГІДНО винаходу після мікроскопи фібрину та колагенових волокон у минаючому СВІТЛІ додатково встановлюють інфрачервоний світлофільтр до окуляру мікроскопа та проводять мікроскопію через видошукач відеокамери, яка реєструє інфрачервоне світло, і при наявності темних ділянок у зображенні діагностують відкладання кальцію Спільними ознаками прототипу та рішення, що заявляється, є те, що ГІСТОЛОГІЧНІ препарати до мікроскопи фарбують хромотропом та світлим зеленим, а мікроскопію спочатку проводять при використанні минаючого світла від лампи розжарювання і без використання світлофільтрів Винахід від прототипу відрізняється тим, що після цього вводиться додаткова дія - мікроскопія в інфрачервоному СВІТЛІ Це проводиться для того, щоби в цих же зрізах можна було би достовірно діагностувати ще і відкладання кальцію Обов'язковими умовами успішного виконання способу, що заявляється, є використання джерела світла типу лампи розжарювання, яка випромінює інфрачервоне світло, відеокамери, яка здатна реєструвати інфрачервоне світло, оскільки в деяких відеокамерах фабрично встановлюють світлофільтри для затримання інфрачервоних променів, кольорового видошукача відеокамери для здійснення диференціювання червоного та зеленого забарвлення у гістологічному препараті Спосіб, що заявляється, здійснюється наступним чином Пофарбований хромотропом та світлим зеленим ГІСТОЛОГІЧНИЙ зріз плаценти вивчають в минаючому СВІТЛІ спочатку без застосування будь-яких світлофільтрів і по червоному характеру забарвлення діагностують фібрин, а по зеленому характеру забарвлення - колагенові волокна Потім між окуляром мікроскопа та об'єктивом відеокамери вводять світлофільтр, наприклад, стандартний світлофільтр КС-18 або КС-19, що пропускає тільки інфрачервоне світло Оскільки при забарвленні хромотропом та світлим зеленим в плаценті серед всіх и елементів тільки відкладання кальцію завдяки своїй високій ЩІЛЬНОСТІ здатні затримувати інфрачервоне світло, то відкладання кальцію будуть виглядати як темні ділянки різної форми на загальному білому фоні Все це спостерігають через видошукач відеокамери, яка здатна реєструвати інфрачервоне світло Таким чином, наведений спосіб дозволяє в одному і тому ж зрізі плаценти діагностувати од ночасно фібрин, колагенові волокна та відкладання кальцію Використання способу пояснюється конкретними прикладами Приклад використання способу №1 Жінка 22 років народила хлопчика у 34 тижні вагітності (передчасні пологи) Плацента була взята на гістологічне дослідження ГІСТОЛОГІЧНИЙ зріз тканини плаценти був пофарбований хромотропом та світлим зеленим Потім зріз був поміщений у мікроскоп і вивчався без світлофільтрів у минаючому СВІТЛІ від лампи розжарювання через видошукач відеокамери Panasonic NV-RX7 У ворсинах плаценти спостерігалося посилене зелене забарвлення волокнистого характеру, по якому зробили висновок про надмірне розростання колагенових волокон, що дало підставу діагностувати склероз ворсин В міжворсинкових просторах плаценти спостерігалася надмірна КІЛЬКІСТЬ червоних об'єктів різних розмірів неправильної, або округлої, або тяжистої форми, які на підставі їх кольору були діагностовані як фібрин Між окуляром мікроскопа та об'єктивом відеокамери був поміщений світлофільтр КС-18 Через видошукач відеокамери можна було спостерігати, що на загальному білому фоні знаходилися великі чорні плями різної форми, які діагностовані як відкладання кальцію Оскільки ДЛЯ терміну вагітності 34 тижні склероз ворсин, посилене відкладання фібрину та кальцію не є характерним, але дані явища в сукупності зустрічаються при переношеній вагітності, був зроблений загальний висновок про те, що причиною передчасних пологів у жінки було передчасне дозрівання плаценти, яке і викликало недостатність даного органу Приклад використання способу №2 Жінка 34 років народила в 37 тижнів вагітності хлопчика з ознаками гіпотрофії Плацента була взята на гістологічне дослідження ГІСТОЛОГІЧНИЙ зріз тканини плаценти був пофарбований спочатку гематоксиліном-еозином (рутинна методика) При забарвленні гематоксиліном-еозином крім іншої патологи, яка вказувала на недостатність плаценти, були виявлені темно-фіолетові дрібнозерністі ділянки без певної форми Оскільки такі об'єкти при даній методиці забарвлення можуть бути як скупченнями залишків ядер клітин при їх некрозі так і солями кальцію, то була застосований спосіб діагностики, що заявляється Умови мікроскопи описані в попередньому прикладі використання способу В результаті було встановлено, що ділянки плаценти, які виглядали як темно-фіолетові дрібнозерністі скупчення, в інфрачервоному СВІТЛІ були білими (пропускали інфрачервоне світло), тобто діагностика відкладень кальцію була негативною Таким чином, було встановлено, що у вагітної була недостатність плаценти важкого ступеня з розвитком поширених некротичних змін Розвиток колагенових волокон, ступінь відкладання фібрину був характерним для вказаного терміну вагітності 51153 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'їХохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71