Спосіб діагностики когнітивних порушень

Спосіб діагностики когнітивних порушень, що включає визначення стану головного мозку шляхом тестування та за допомогою магнітнорезонансного томографа, який відрізняється тим, що додатково одночасно проводять визначення вмісту в крові нейроамінокислот (глутамату, аспартату, гліцину, проліну, таурину, гістидину, цистину), білка S100 та нейроспецифічної енолази. (19) (21) u201007848 (22) 23.06.2010 (24) 10.08.2010 (46) 10.08.2010, Бюл.№ 15, 2010 р. (72) ЗОЗУЛЯ ІВАН САВОВИЧ, БОБРОВА ВАЛЕНТИНА ІВАНІВНА, СИЧ НАТАЛІЯ СЕРГІЇВНА (73) НАЦІОНАЛЬНА МЕДИЧНА АКАДЕМІЯ ПІСЛЯДИПЛОМНОЇ ОСВІТИ ІМЕНІ П.Л.ШУПИКА 3 пробірки невеликою скляною паличкою та перемішували зі всією пробою. Потім центрифугують при 3500 обертів в хвилину 15 хвилин. Відбирають 1 мл плазми і добавляють 1 мл 3 % водного розчину сульфосаліцилової кислоти та ретельно перемішують. Після цього білок, що випадав, відокремлюють центрифугуванням при 3500 обертів в хвилину протягом 30 хвилин. Отриманий таким чином надосад (супернатант) наносять на іонообмінну колонку амінокислотного аналізатора. Кількість кожної амінокислоти в досліджуваному зразку розраховують за формулою: X1=С1/С0*0,25*А*В, де : С1 - висота піка амінокислоти в досліджуваному зразку; С0 - висота піка амінокислоти в розчині стандартної суміші амінокислот; 0,25 мкмоль/мл - концентрація стандартної суміші амінокислот; А (мл)- кількість буферу рН 2,2, в якому розвели зразок; В (мг)- молекулярна вага 1 моля амінокислоти; Висоти піків на хроматограмі підраховують і порівнюють з площею піків суміші амінокислот (стандартний розчин) з відомою концентрацією. Із порівняння цих площ обчислюють абсолютну кількість амінокислот в аналізованому зразку. Кількість мікромолей (XI) у досліджуваному розчині обчислюють за формулою: X1=S1/S0, де S1 - висота піку амінокислоти в досліджуваному зразку; S0 висота піку цієї ж амінокислоти в розчині стандартної суміші амінокислот, що відповідає 1 мікромолю кількості кожної амінокислоти. Кількість у міліграмах одержують при множенні кількості мікромолей амінокислоти на відповідну їй молекулярну масу. Якісний склад суміші амінокислот визначають, порівнюючи хроматограми стандартної і досліджуваної суміші амінокислот. Кров для визначення білка S100 та нейроспецифічної енолази забирали з кубітальної вени. Для серологічного визначення рівня нейроспецифічних антигенів зразки цільної крові центрифугують при 3000 g протягом 15 хв., сироватку заморожують та зберігають до аналізу при -30°С. В основу визначення вмісту нейронспецифічної енолази (НСЕ) та білка S100 в сироватці крові імуноферментним методом покладено твердофазний імуноферментний метод за принципом "сендвіча". Вносять по 25 мл в пробірку для аналізу калібровочних (стандартних) проб (0,10,25,50,100,200 нг/мл), контрольних сироваток та досліджуваних проб, при цьому в кожну пробірку додають по 250 мл розчину антитіл до НСЕ і кульки. Інкубують 15 хв при 37°С при постійному струшуванні у темряві. Потім видаляють із пробірок та промивають кульки тричі об'ємом 3-5 мл деіонізованої води. В усі пробірки додають по 250 мл кон'югату антитіл з пероксидазою хріну, окрім фонової проби. Перемішують та інкубують при 37°С в темряві 15 хвилин. Також перемивають та додають по 250 мкл робочого розчину субстрату в усі пробірки, включають і фонову пробу; робочий розчин субстрату готують за 10 хвилин до закінчення імунологічної реакції змішуванням 1 об'єму робочого розчину субстрату тетра 52205 4 метилбензидину з 4 об'ємами субстратного буферу пероксиду водню. Інкубують при 37°С в темряві при постійному змішуванні протягом 15 хвилин. В усі пробірки додають по 1 мл сірчаної кислоти та перемішують, тим самим зупиняють реакцію. Після зупинки ферментативної реакції протягом години вимірюють поглинання калібровочних проб спектрофотометричним методом АІФ-Ц-01С при довжині хвилі 450 нм. В сироватці крові хворих концентрацію S-100 визначають так: вносять по 50 мкл в лунки мікропланшету калібровочних (стандартних) проб (0, 10, 25, 50, 100, 200 нг/мл), контрольних сироваток та досліджуваних проб, при цьому в кожну лунку додають по 100 мкл розчину антитіл до S-100B. Інкубували 2 год. при кімнатній температурі та постійному струшуванні. Тричі відмивали промивним Трис-НСl буфером, рН 7,4. Потім додають по 100 мкл розчину кон'югату пероксидази хрону в усі лунки, перемішують та інкубують 1 год. при кімнатній температурі (23-23°), зливають, промивають 6 разів та додають по 100 мкл розчину субстрату в усі лунки, інкубують при кімнатній температурі при постійному струшуванні протягом 30 хвилин. В усі пробірки додають по 100 мкл 0,12 М соляної кислоти та перемішують, зупиняють при цьому реакцію. Далі протягом 15 хвилин після зупинки ферментативної реакції заміряють поглинання калібровочних проб спектрофотометричним методом АІФ-Ц-01С при довжині хвилі 450 нм. Будують калібрувальні криві залежності значень оптичної щільності від концентрації нейроспецифічних білків у калібровочних пробах для визначення значень НСБ. Діапазон концентрацій даних білків, який можна визначати за допомогою набору, складає 0-200 нг/мл, для S-100B: від 0,01 до 3,5 нг/мл. Технічний результат, що досягається запропонованим рішенням, є більш раннє виявлення хворих з когнітивними порушеннями з подальшим їх лікуванням. Приклад конкретного втілення корисної моделі. Хвора К., віком 61 рік з 30.01.2009 р. по 4.02.2009 р. знаходилась на лікуванні в ККЛШМД з діагнозом: Гостре порушення мозкового кровообігу за типом ішемії в басейні лівої середньої мозкової артерії з правобічним помірним геміпарезом. Освіта середня. В свідомості, AT 190/110 мм рт. ст., ЧСС 80 в хв. В неврологічному статусі: менінгеальних знаків не виявлено. Зіниці D=S, ністагму немає, язик - легка девіація вправо, легка недостатність VII ч.н. справа. Сухожилкові рефлекси D>S з правобічним легким геміпарезом та зниженим м'язевим тонусом. Правобічна гемігіпостезія. Неврологічний дефіцит по NIHSS 7 балів, ступінь інвалідізації по Бартеля - 75 б. Нейропсихологічне дослідження: 16 балів по шкалі MMSE, 13 бала по БТЛД, 4 бала - тест малювання годинника, відмічено некритичність до свого стану, наявність персеверацій, пам'ять знижена, імпульсивність в поведінці. При проведенні МРТ: серединні структури не зміщені, шлуночки звичайної форми та розмірів. В лівій перевентрикулярній області виявлене вогнище ішемії - 38*32*23 мм, передній лейкоареозис, 5 52205 площина гіпокампу - 74 мм, атрофія скроневих долей головного мозку. Вміст нейроамінокислот глутамату - 0,805 мг, аспартату - 0,164 мг, гліцину 1,427 мг, проліну - 1,556 мг, таурину - 1,093 мг, гістидину - 1,197 мг, цистину - 1,386 мг, білку S100 - 59,42±15,56 нг/мл, нейроспецифічної енолази 9,69±2,30 мг/мл. В наведеному прикладі у хворої має місце виражені порушення когнітивних функцій в вигляді зниження пам'яті, концентрації уваги, гнозису та праксису. Звертає на себе увагу атрофічний процес скроневих долей, зменшення площини гіппо Комп’ютерна верстка І.Скворцова 6 кампу, підвищений рівень глутамату, аспартату та нейроспецифічних білків. Література: 1. Міщенко Т.С. Когнитивные расстройства в практике врача-невролога / Т.С. Мищенко, В.А. Яворская, И.В. Дамулин, Антон Альварес // Новости медицины и фармации. - 2008. - № 243. - с. 3741. 2. Климов Л.В. Когнитивные нарушения в остром периоде ишемического инсульта / Л.В. Климов, В.А. Парфенов // Неврол. журн. - 2006. - Т. 11. - с. 53-57. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601