Спосіб визначення конверсії епідермальних антигенів

Спосіб визначення конверсії епідермальних антигенів, який включає отримання антитіл шляхом імунізації тварин субстратами, який відрізня 3 Між сукупністю істотних ознак запропонованого способу та очікуваним технічним результатом, який може бути досягнутий, виявляється наступний причинно-слідчий зв'язок: використання для імунізації тварин нерозчинної частини гомогенатів псоріатичних лусочок дозволяє отримати антитіла проти строми відторгненого епідермісу; гомогенізація псоріатичних лусочок і рогових лусочок епідермісу здорових людей та відділення розчинної частини гомогенату від нерозчинної, дозволяє отримати розчинні антигени; розведення розчинної частини гомогенату псоріатичних лусочок ізотонічним розчином натрію хлориду, з наступними інкубацією і центрифугуванням, дозволяє отримати нерозчинний в ізотонічному розчині натрію хлориду осад, тобто псоріатичний субстрат; адсорбція антитіл цим осадом в частині імунних сироваток дозволяє видалити в ній антитіла до антигенів, які зазнали конверсію; за лініями преципітації, що зникли, виявляється при порівнянні преципітуючої активності виснажених антисироваток і не виснажених, визначають антигени, які зазнали конверсію, без використання перелічених вище ознак технічний результат недосяжний. Спосіб полягає в наступному. Сумішшю нерозчинної частини гомогенатів псоріатичних лусочок з повним ад'ювантом Фрейнда імунізують кролів до появи антитіл, преципітуючих антигени рідкої частини гомогенату рогових лусочок здорових людей і псоріатичних лусочок. Антитіла проти білків сироватки крові людини адсорбують із неї шляхом примішування 10мг/мл порошку ліофілізованої сироватки людини. 1000мг псоріатичних лусочок і 500мг лусочок рогового шару епідермісу здорових людей гомогенізують окремо розтиранням в 10 і 5мл ізотонічного розчину натрію хлориду відповідно, центрифугують при 3000об/хв. 20хв., осад відкидають, надосадову рідину псоріатичних лусочок розводять ізотонічним розчином натрію хлориду, причому не менше ніж в п'ять разів, та далі інкубують при кімнатній температурі до утворення видимого осаду - не менше доби, центрифугують при 3000об/хв. 20хв. Осад, який представляє собою псоріатичний субстрат, відмивають центрифугуванням ізотонічним розчином натрію хлориду від розчинних білків, змішують з 1,5мл антипсоріатичної сироватки та інкубують добу. В рідкій частині гомогенату рогових лусочок нормального епідермісу в реакції імунопреципітації в агарі визначають лінії преципітації антигенів 52402 4 за допомогою адсорбованих і неадсорбованих сироваток, при цьому на скельцях із стороною 5,5см виливають 5мл 3% агару, розплавленого на ізотонічному розчині натрію хлориду, вирізають лунки для реагентів і заповнюють лунки антисироватками в об'ємі 0,2мл і рідкою частиною гомогенату рогового шару нормального епідермісу в об'ємі 0,1мл. Після повного утворення ліній преципітації за лініями, що зникли, при використанні адсорбованих сироваток визначають антигени, які зазнали конверсію. Приклад використання способу ілюстровано наступним графічним матеріалом. На Фіг. показана преципітація епідермальних антигенів розчинної частини гомогенатів рогового шару нормального епідермісу неадсорбованої і адсорбованої псоріатичним субстратом антипсоріатичної сироватки. На Фіг. позначено наступне: А - лунка з неадсорбованою антипсоріатичною сироваткою; Аа лунка з адсорбованою псоріатичним субстратом антипсоріатичною сироваткою; 1 - лунка з 0,1мл рідкої частини гомогенату рогового шару епідермісу здорових людей. Були проведені дослідження псоріатичного субстрату, тобто нерозчинного в ізотонічному розчині натрію хлориду субстрату рідкої частини гомогенатів лусочок зібраних із осередків псоріатичного запалення 5-ти хворих на поширений псоріаз, а також рідкої частини гомогенатів лусочок рогового шару епідермісу 5-ти здорових людей. В рідкій частині гомогенату рогового шару нормального епідермісу епідермальні антигени преципітуються неадсорбованими антипсоріатичними сироватками з утворенням трьох ліній між лунками А і 1. В рідкій частині гомогенату рогового шару нормального епідермісу епідермальні антигени преципітуються адсорбованими антипсоріатичними сироватками з утворенням однієї лінії преципітації між лунками Аа і 1. За допомогою запропонованого способу виявлено, що в нерозчинному в ізотонічному розчині натрію хлориду субстраті, тобто в псоріатичному субстраті, містяться два із трьох антигенів рогового шару нормального епідермісу, що вказує на них як на тих, що зазнали конверсію, яка виражалась в зменшенні їх розчинності. Спосіб визначення конверсії епідермальних антигенів дозволяє підвищувати точність визначення епідермальних антигенів. 5 Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська 52402 6 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601