Спосіб культивування патогенних грибків

Спосіб культивування патогенних грибків, що включає вміщення матеріалу із контамінованих проб на щільне живильне середовище, збагачене біологічно активною субстанцією, який відрізняється тим, що як щільне живильне середовище 3 зокрема, бактерії [3]. Аналогічним виявилося ставлення грибка до подрібнених мікрочастинок кріоліофілізованої шкіри, наприклад, свині, оскільки до складу останніх входить значна кількість широкого спектру амінокислот, макро- та мікроелементів [4]. Нарешті, важливою фізичною особливістю силікону є його діелектричні хвилепровідні властивості [5], що може мати вирішальне значення у забезпеченні соціально опосередкованих комунікативних (біоінформаційних) зв'язків між окремими особинами, особливо з врахуванням фотоннокристалічної природи волоконних структур грибка [6, 7]. Беручи до уваги наведені міркування, у відомому способі культивування патогенних грибків, що включає вміщення матеріалу із контамінованих проб на щільне живильне середовище, збагачене біологічно активною субстанцією, відповідно до корисної моделі як щільне живильне середовище використовують силіконовий компаунд, який наносять тонким шаром, зокрема в межах 1-2мм, на предметне скло, причому за біологічно активну субстанцію беруть водний екстракт подрібненої на порошок кріоліофілізованої шкіри свині у співвідношенні 1:100, який вводять всередину шару силіконового компаунда у вигляді делокалізованих точкових мікрооб'ємних ін'єкцій, принаймні в межах від 5мкл до 10мкл включно, а про наявність збудника роблять висновок за виявленням його особин на поверхні середовища у вигляді оптично активних мікроволокон або/і багатоклітинних плодових тіл і спор. Перелік фігур. Фіг.1. Мікроволоконні утворення грибка на поверхні силіконового компаунду на предметному склі. Поляризаційна флуоресценція: МС-200 з аналізатором SEO Image Lab і цифровою системою SEO Scan Color. Об.х4, Ок.х20. Фіг.2. Мікроволоконні утворення грибка на поверхні силіконового компаунду на предметному склі. Поляризаційна флуоресценція: МС-200 з аналізатором SEO Image Lab і цифровою системою SEO Scan Color. Об.х10; Ок.х20. Фіг.3. Поляризована флуоресценція амебоїда грибка на поверхні силіконового компаунду. Поляризаційна флуоресценція: МС-200 з аналізатором SEO Image Lab і цифровою системою SEO Scan Color. Об.х4; Ок.х20. Фіг.4. Поляризована флуоресценція грибних спор на поверхні силіконового компаунду. Поляризаційна флуоресценція: МС-200 з аналізатором SEO Image Lab і цифровою системою SEO Scan Color. Об.х100 імерс; Ок.х20. Спосіб здійснюють наступним чином. На предметне скло наносять оптично прозорий силіконовий компаунд товщиною 1-2мм, витримують принаймні 1год., після чого за допомогою інсулінового шприца у товщу компаунда на предметному склі вводять біологічну активну субстанцію у вигляді делокалізованих точкових мікрооб'ємних ін'єкцій водного екстракту подрібненої на порошок кріоліофілізованої шкіри свині у співвідношенні 1:100, причому водний екстракт вводять принаймні в межах від 5мкл до 10мкл включно, далі на живильне середовище вміщують імовірно контамінований матеріал, а про наявність збудни 52408 4 ка роблять висновок за виявленням його особин на поверхні середовища у вигляді оптично активних мікроволокон і спор. Приклад 1 На предметне скло нанесли оптично прозорий силіконовий компаунд товщиною 1-2мм, витримали принаймні 1год. Після цього інсуліновим шприцом у товщу силіконового шару на предметному склі у різні місця ввели попередньо приготований водний екстракт подрібненої на порошок кріоліофілізованої шкіри свині у співвідношенні 1:100. Водний екстракт шкіри вводили в силіконовий компаунд на предметному склі ін'єкціями по 510мкл. Далі на живильне середовище вмістили контамінований матеріал. Про наявність збудника робили висновок за результатами щоденного спостереження росту грибка на середовищі у вигляді оптично активних мікроволокон або/і спор. Предметне скло із силіконовим живильним середовищем вміщували у поле зоре люмінесцентного мікроскопу і досліджували за методом поляризованої флуоресценції. При цьому волокнисті структури патогенного грибка висвічували кольорами практично у всіх діапазонах оптичного спектру: синьофіолетового до оранжево-червоного. Так само висвічували округлої форми спори. Приклад 2 За запропонованим способом провели дослідження зараженості на грибки повітря приміщення наукової лабораторії, а також шкіри пацієнтів, що скаржилися на свербіж і відчуття повзання істот безпосередньо під шкірою на стегнах, плечах, у підреберних ділянках. У взятих пробах були виявлені різні за формою і життєвим циклом особини грибка: від волокон до спор включно (Фіг.3-5). Наявність слизового сліду від активного переміщення грибка в мікропрепараті засвідчує незалежність грибка до міксоміцетів, причому з високою ймовірністю - до слизньовика родини Dictyostelium discoideum. На це вказує виявлені в мікропрепараті не тільки окремі особини у вигляді різної за формою утворення, головним чином оптично активних мікроволокон, але й у формі багатоклітинних плодових тіл, здатних утворювати амебоїди, що продукують численні спори. До методичних переваг запропонованого способу слід віднести можливість безпосереднього дослідження культури грибка на середовищі на предметному склі під мікроскопом (на відміну від способу-прототипу), що суттєво покращує рівень безпеки дослідника під час роботи. Отже, запропонований спосіб забезпечує підвищення рівня технологічності культивування патогенних грибків, а відтак точності та інформативності мікологічного дослідження, і може бути використаний в клініко-лабораторній і санітарногігієнічній практиці, а також при проведенні наукових мікологічних досліджень. Джерела інформації, які слід взяти до уваги: 1. Питательная среда №2 ПД для микробной загрязненности сухая (для выращивания грибов Сабуро) ФСП 42-0010-3631-02. Per. №002982/01. Инструкция по применению. Сабуро, декстрозный агар с хлорамфениколом. Каталог №ВА-115. 5 52408 2. Кашкин П.Н., Лисин В.В. Практическое руководство по микологической микологии. Л., 1983; 326с. 3. Stege J, Laub M and Loomis W, Sorting of the initial cell types in Dictyostelium is dependent on the tipA gene. Dev Genet. 1999, 25 64-77. 4. Бігуняк В.В., Дем'яненко В.В., Кліщ І.М., П'ятницький Ю.С. Подрібнений субстрат кріоконсервованої ксеношкіри: новий технологічний етап системної тканинної терапії / Здобутки клінічної та експериментальної медицини. Збірник матеріалів конф. 4 червня 2009 року. Тернопіль, ТДМУ, Укрмедкнига, 2009. - С.52-53. 5. Дем'яненко В.В., Покришко О.В., Бігуняк Т.В. Методологічні і методичні підходи до розвитку "силіконових" технологій в медицині / "Відновлювальні та профілактичні технології в клінічній медицині" Комп’ютерна верстка О. Рябко 6 (Тези доповідей симпозіуму). Полтава, 2009. С.24. 6. Андрейчин М.А., Бігуняк В.В., Дем'яненко В.В. Методологічні проблеми етіології хвороби Моргелонів / Поєднані інфекційні та паразитарні хвороби. Матеріали Конгресу до 122 річчя від народження Л.В. Громашевського (8-9 жовтня 2009 року, м.Чернівці). - Тернопіль: ТДМУ "Укрмедкнига", 2009. - С.10-11. 7. Дем'яненко В.В., Бігуняк В.В., Андрейчин М.А. До аналізу феномену "волокнистості" імовірного збудника хвороби Моргелонів / Поєднані інфекційні та паразитарні хвороби. Матеріали Конгресу до 122 річчя від народження Л.В. Громашевського (8-9 жовтня 2009 року, м.Чернівці). - Тернопіль: ТДМУ "Укрмедкнига", 2009. - С.62-63. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601