Спосіб визначення антитіл проти грамнегативних бактерій

Спосіб визначення антитіл проти грамнегативних бактерій, що включає виділення антигену, нанесення його на носій, дослідження сироваток в імунологічній реакції, який відрізняється тим, що як діагностикум використовують комплекси поверхневих антигенів бактерій Eschenchia, Proteus, Salmonella, Pseudomonas з вмістом полісахаридів 85 - 92 % Винахід відноситься до області медицини, переважно імунологи інфекційних хвороб, і може використовуватись для етіологічної діагностики захворювань і в біотехнологм при виробництві імунобюпрепаратів з високим вмістом антитіл, діагностикум на основі "О" і "Н" антигенів грамнегативних бактерій Існує відомий спосіб (1), в якому для визначення антитіл використовують діагностикум на основі "О" і "Н" антигенів грамнегативних бактерій виділених загальновідомими методами Відомий спосіб (2) визначення антитіл з допомогою діагностикума -носія загального антигену синєгнійних бактерій Але широкий спектр (173) сероварів "О" і "Н" антигенів у Eschenchia, 68-у бактерій роду Proteus, 29-у бактерій Pseudomonas aerugmosa та більш ніж 1000 - варіантів у Salmonella не дозволяє створити спосіб визначення антитіл до переважаючої частини цих родів Відомий спосіб (3) здійснення якого полягає у використанні в якості антигена R-e гліколіпіду глибоких мутантів грамнегативних бактерій, але в зв'язку з глибоким розташуванням R-e і R-c грамнегативними бактеріями Інформаційні джерела (4,5) свідчать про те, що причиною невисокої імунної дії цих антитіл являється їх значна неоднорідність (гетерогенність) В основу винаходу покладене завдання створення способу виявлення антитіл проти грамнегативних бактерій з високою протективною дією та специфічністю і на основі цього підвищити ефективність та точність діагностики Поставлене завдання вирішується тим, що для виявлення антитіл використовують діагностикум на основі комплексу поверхневих антигенів бактерій Eschenchia, Proteus, Pseudomonas, Salmonella з вмістом полісахаридів 85-92% Приклад 1 Здійснення способу Для здійснення способу одержують загальновідомим методом (6) комплекси поверхневих антигенів (КАП) бактерій Eschenchia, Proteus, Pseudomonas, Salmonella з концентрацією полісахаридів 85 - 95% Потім 4 групи кролів імунізують Першу групу кролів імунізують тричі КАП бактерій Eschenchia, другу - КАП бактерій роду Proteus, третю - КАП бактерій Salmonella, четверту - КАП бактерій Pseudomonas Через 2 тижні після останньої імунізації в сироватці крові кролів визначають антитіла в реакції непрямої гемаглютинації (РИГА) Результати визначення приведені в таблиці 1 ГЛІКОЛІПІДІВ В КЛІТИНІ І IX ТІСНИЙ ЗВ'ЯЗОК З ІНШИМИ структурними елементами бактерій, в тому числі поверхневими полісахаридами, визначені до них антитіла не володіють протективною дією при сепсисі та інших тяжких інфекціях, обумовлених ю 52994 Таблиця 1 Титри антитіл у кролів, імунізованих КАП грамнегативних бактерій Специфічність сироватки Eschenchia Proteus Salmonella Pseudomon as № сиро ватки 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Титри протитіл у РИГА з ВІДПОВІДНИМ специфічним діагности кумом 1 160 1 320 1 640 1 320 1 640 1 160 1 640 1 160 1 160 1 320 1 640 1 320 1 320 1 640 1 160 1 160 З наведених даних можна зробити висновок, що еритроцитарний діагностикум на основі комплексів (КАП) антигенів бактерій Eschenchia, Proteus, Salmonella, Pseudomonas дозволяє ефективно визначати рівень антитіл проти цих антигенів у сироватці крові Приклад 2 Визначення ефективності способу П'ять груп кролів тричі імунізують (КАП) з бактерій Eschenchia, Proteus, Salmonella, Pseudomonas та R-e гліколіпіда Salmonella mmnesota R595 Через 2 тижні після останньої імунізації у тварин беруть кров і одержують імунні сироватки Далі заражають мишей бактеріями Е соїі КІ, Р mirabihs 708, S typhimunum 144, Р aeruginosa 02 і визначають дози, які викликають загибель 50% заражених мишей (LDso) Далі для кожного виду мікробів беруть 3 групи мишей Всіх їх заражають 3-5 дозами LD50 цих бактерій Першій групі після зараження тричі вводять імунну сироватку проти ВІДПОВІДНОГО мікроба, мишам другої групи тричі вводять імунну сироватку проти R-e гліколіпіда, мишам третьої групи тричі вводять фізіологічний розчин Сироватка проти поверхневих (К) антигенів Eschenchia захищала 100% мишей, які були заражені 4 LD50 Ecoh КІ Всі заражені такою ж дозою мікробів миші, яким вводили після зараження сироватку проти R-e гліколіпіду чи фізіологічний розчин загинули Сироватка проти поверхневих (К) антигенів Proteus захищала 100% мишей, які були заражені 4 LD50 P mirabihs 708 Всі заражені такою ж дозою мікробів миші, яким вводили після зараження сироватку проти R-e гліколіпіду чи фізіологічний розчин загинули Сироватка проти поверхневих (М) антигенів Salmonella захищала 100% мишей, які були заражені 5 LD50 S typhimunum 144 Всі заражені такою ж дозою мікробів миші, яким вводили після Середній геометри чний титр Lg середнього геометричного титру ± середньої помилки Р Рівень значущості 1 320 -2,5051+0,1229