Штам бактерій bacillus thuringiensis var. thuring. л-4 для одержання бактеріального препарату проти колорадського жука

Штам Bacillus thunngiensis var thunngiensis Л4 для одержання бактеріального препарату проти колорадського жука Винахід відноситься до сільськогосподарської мікробіологи і може бути використаний для виробництва препарату проти колорадського жука Завданням винаходу є отримання нового штаму Bacillus thunngiensis з більш високою інсектицидною активністю щодо личинок колорадського жука Прототип - штам Bacillus thunngiensis subsp thunngiensis 800 (А С 1791973 СССР А 01 N63/00, C 1 2 N 1/20) [3] Штам бактерій Bacillus thunngiensis var thunngiensis Л-4 виділено з личинки колорадського жука Leptmotarsa decemlmeata Say Штам по класу небезпечності відноситься до 4 групи, що дозволяє вважати його практично безпечним Попередня токсикологічна оцінка, що була проведена нами на білих мишах, показала, що даний штам не виявив токсичного впливу Штам бактерій Bacillus thunngiensis Л-4 ідентифікували по визначнику Берп [4], схемі О Lysenko (1985) [1], [2], Barjac, Bonnefoi [7] КУЛЬТУРАЛЬНО - МОРФОЛОГІЧНІ ОЗНАКИ BACILLUS THURINGIENSIS Л-4 Грампозитивні, рухомі палички, перитрихи, трапляються найбільше в коротких і довгих ланцюжках Розміри клітин однодобової культури на МПА 3,12 - 3,5 х 1,2 - 1,5мкм На 3 - 4 добу на МПА в клітинах утворюються овальні спори, розміром 1,5 - 1,8 х 1,2 - 1,5мкм, які клітину-споранпй не збільшують, розміщені субтермінально, а також парас-поральні включення (кристали) розміром 0,5 -1,5 х 1,0мкм ФІЗІОЛОГО - БІОХІМІЧНІ ОЗНАКИ ШТАМУ BACILLUS THURINGIENSIS Л-4 На МПА через 2 доби при 28 - 30°С культура утворює пласкі колонії кремового кольору у формі кола з нерівними краями, діаметром 5 - 6мм Кон систенція в'язка, структура дрібнозерниста, ІНОДІ колонії дисоціюють на S і R - форми На м'ясопептонному бульйоні через 48 годин ріст слабий, утворює тонку плівку (вуаль) і пристіночне кільце, є осад, середовище прозоре Росте при 15 - 45°С Оптимальна температура росту 28 30°С, рН - 7,0 - 7,2, пігменту не утворює Факультативний анаероб Розріджує желатину, пдролізує крохмаль, пептонізує молоко, утворює АМК (ацетилметилкарбінол), лецитиназу, каталазу, ліпазу (ТВ-80), аміак з аргініну, луги на цитратному агарі, розщеплює ескулін, не утворює індол, сірководень, уреази, переводить нітрати в нітрити, розщеплює тирозин, утворює кислоти з маннози, мальтози, сахарози, саліцину, целобіози, гліцерину, глюкози, не утворює з манніту, арабшози, ксилози, інозиту, дульциту Антагоністичні властивості щодо Bacillus thunngiensis subsp thunngiensis 800 серотипу НІ не проявляє Зберігається на косяках з МПА в пробірках при 4 - 5°С з пересівами через 4 - 5 МІСЯЦІВ ПРИКЛАДИ КОНКРЕТНОГО ЗАСТОСУВАННЯ BACILLUS THURIHGIENSIS Л-4 Приклад 1 Для визначення КІЛЬКОСТІ 5-ендотоксину в си рій біомасі і р-екзотоксину в культуральній рідині Bacillus thunngiensis Л-4 і Bacillus thunngiensis 800, кожний штам культивували на рідкому середовищі, до складу якого входить картопляний відвар, сінний відвар по Селіберу, кукурудзяний екстракт, сахароза, ґрунтова витяжка КІЛЬКІСТЬ 5-ендотоксину визначали за методом Яловіцина [5], КІЛЬКІСТЬ р-екзотоксину - на спектрофотометрі СФ-46 [6], титр термостабільних спор - методом розведень Одержані результати наведені втабл 1 1 о> о со Ю 53097 Таблиця 1 Утворення термостабільних спор і токсинів Bacillus thunngiensis var thunngiensis Л-4 КІЛЬКІСТЬ 5КІЛЬКІСТЬ рТитр терендоток- екзотоксину в мостабільних сину, мг культуральній спор, в 1г си- рідині, мг в 1 млрд/мл рої біолітрі маси Назва Штам стандартний 800 2,5 6,22 381 Штам Л-4 5,7 12,05 681 вати термостабільні спори і токсини штам Л-4 значно перевищує стандартний штам Приклад 2 В польовому ДОСЛІДІ вивчали антифідантну дію бактеріального препарату на основі штаму Л-4 на личинках колорадського жука різного віку в порівнянні з ХІМІЧНИМ препаратом банколом і бітоксибациліном (ТУ 05-974-0062-0, РФ, 1998) на основі стандартного штаму 800 Результати подані в табл 2, з них видно, що бактеріальний препарат на основі штаму Л-4 виявляє високу антифідантну дію щодо личинок колорадського жука Так, маса личинок при обробці рослин препаратом на основі штаму Л-4 зменшилась в 1,4 рази в порівнянні з варіантом, де картоплю обробляли бітоксибациліном Дані табл 1 свідчать, що за здатністю утворюТаблиця 2 Антифідантна дія біопрепаратів на личинки колорадського жука Пошкод- Маса личинок в порівнянні ження з контролем на 7 добу пісрослин, % ля обробки, % Варіант досліду Без застосування ХІМІЧНИХ І мік робних препаратів (контроль) Обробка рослин банколом бітоксибациліном препаратом на основі штаму Л-4 шкоджених рослин, % Загибель личинок через 7 діб, % КІЛЬКІСТЬ по 50-74 100 42,3 0 10-24 25-49 11-24 88 90 65 6,5 20,2 12,8 99,9 79,2 87,6 Приклад З Ефективність біопрепарату на основі штаму Л4 вивчали в умовах польового дрібноділянкового досліду на дерново-підзолистому грунті Для порівняння використовували банкол і бітоксибацилін Дані зведені в табл З Вони свідчать, що створений нами на основі штаму Bacillus thunngiensis varthunngiensis Л-4 препарат, є високоефективним і екологічно безпечним засобом захисту картоплі від колорадського жука При його застосуванні забезпечується надійний захист рослин і значний приріст урожайності (57%) Таблиця З Ефективність мікробних препаратів проти колорадського жука на посадках картоплі Варіант досліду Без застосування ХІМІЧНИХ І мікробних пре паратів (контроль) Обробка рослин банколом бітоксибациліном препаратом на основі штаму Л-4 Втрата листкової поверхні Біологічна ефекти- Урожайність, рослин за 14 діб, бали вність, % ц/га Приріст урожаю ц/га % 4 0 78,7 0 0 1 -2 3 97,2 78,9 91,0 106,9 12,3 28,2 15,6 35,8 2 96,4 123,7 45,0 57,2 ЛІТЕРАТУРА 1 Кандыбин Н В Бактериальные средства борьбы с грызунами и вредными насекомыми - М Агропромиздат, 1989 - 172с 2 Лескова А Я , Рыбина Л М , Строева И А Идентификация культур Bacillus thunngiensis и оценка их патогенных свойств // Методические указания Л 1986 -24с 3 А С 1791973 СССР А01 N 63/00, С 12 N 1/20 Штамм бактерий Bacillus thunngiensis subsp thunngiensis для получения битоксибациллина (Н В Кандыбин, Н И Барбашова, Л Н Кузнецова и др /непубликуемое/) 4 Краткий определитель бактерий Берги / Под ред Дж Хоулта - М Мир, 1980 - 444с 5 Рекомендации к практикуму по бактериозам насекомых / Под ред А П Простякова -Саранск Изд-во Мордовского гос пединститута, 1985 5 53097 6 118с ВНИИСХМ -Л 1985 -55 -С 115-119 6 Данилова Э Б , Барбашова Н М Спеїсгрофото7 De Barjac H , Bonnefoi A Classification des метрическое определение р-зкзотоксина в культуsouches de Bacillus thunngiensis // С r Acad Sci ральной жидкости Bacillus thunngiensis // Труды 1967 D 264 - N 1 0 TOB "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24