Рідке поживне середовище для культивування мікоплазм

Рідке поживне середовище для культивування мікоплазм, що містить мікоплазмений бульйон з пептоном, дріжджовий екстракт, сироватку крові теплокровних тварин та глюкозу, яке відрізняється тим, що як дріжджовий екстракт використовують пивні дріжджі з рН 7,7-7,9, а як пептон - сухий ферментативний пептон виробництва "Синбіаз" та додатково містить 10% розчин аргініну, 5% розчин 3 54867 Недоліком цього поживного середовища залишається невисока культуральна активність. Крім того, на ньому неможливо візуально виявляти ріст видів мікоплазм, що ростуть без опалесценції та помутніння. В основу корисної моделі поставлено завдання удосконалення рідкого поживного середовища з метою забезпечення високого росту мікоплазм та розширення асортименту селективних поживних середовищ для лабораторних випробувань. Поставлене завдання вирішується в заявленому поживному середовищі для культивування мікоплазм, яке містить мікоплазмений бульйон з пептоном, дріжджовий екстракт, сироватку крові теплокровних тварин, глюкозу, 10% розчин аргініну, 5% розчин ацетату талію, розчин бензілпеніциліну натрію 1000000Од 0,1% розчин фенолового червоного. В якості дріжджового екстракту використовують пивні дріжджі з рН 7,7-7,9, а в якості пептону - сухій ферментативний пептон виробництва "Синбіаз". Склад запропонованого рідкого поживного середовища має наступне співвідношення компонентів, в мл/л: мікоплазмений бульйон, в тому числі сухого ферментативного пептону виробництва "Синбіаз" 4г на 100мл м'ясної води 679,00-681,00 пивні дріжджі з рН 7,7-7,9 78,00-79,00 сироватка крові теплокровних тварин 200,00-203,00 10% розчин аргініну 25,00-26,00 40% розчин глюкози 7,25-7,40 5% розчин ацетату талію 4-4,00 розчин бензілпеніциліну натрію 1000000Од 1,23-1,25 0,1% розчин фенолового червоного 1,45-1,50 Заявлене співвідношення компонентів та заявлений рН дріжджів є оптимальним відносно поставленої мети. При зменшенні або збільшенні заявлених інтервалів ріст мікоплазм уповільнюється або стає відсутнім. Крім того, збільшення компонентів в середовищі є економічно недоцільним. Поживне середовище, що пропонується, виготовляється з сертифікованої сировини, містить в 4 своєму складі феноловий індикатор, завдяки якому має рожеве забарвлення, що дає змогу візуально в короткий термін виявляти ріст мікоплазм. Виготовлення поживного середовища для культивування мікоплазм передбачає почергове додавання всіх компонентів. Спочатку готують мікоплазмений бульйон шляхом змішування його з м'ясною водою та додаванням сухого ферментативного пептону виробництва "Синбіаз" в такій пропорції щоб в бульйоні кількість пептонів було в межах 1,5-2,5%, а амінного азоту - 0,2-0,5%. Дріжджовий екстракт готують з пивних дріжджів, які розчиняють в бідистильованої воді до рН 7,7-7,9. Отриманий екстракт стерилізують шляхом автоклавування при 121°С на протязі 30 хвилин і провіряють на стерильність витримкою в термостаті при 37-38°С на протязі 1 доби. Термін використання отриманого екстракту 30-40 днів. В отриману суміш додають решту компонентів. В кінці додають феноловий червоний, та визначають рН отриманого середовища 7,7-7,9. Для перевірки поживне середовище стерилізують в термостаті на протязі доби при 37-38°С. Приклад 1. Музейні культури М. Granularum, M hyorchinis, M.arginini культивували на живильному середовищі, що пропонується. На четверту добу культивування вдалося накопичити бактеріальну масу з концентрацією 25,5млрд.т./см. Приклад 2. Із запропонованого живильного середовища готували щільне, висівали тест культури М. Granularum, M hyorchinis, M.arginini, в якості контролю залишали чашки Петрі з щільним середовищем. Інкубували дослідні пробірки в термостаті при температурі 37°С. Через 24-72 години інкубації спостерігали формування дрібних характерних колоній у вигляді "яишници глазуньи". Контрольні чашки Петрі з поживним середовищем залишались без змін. Заявлене поживне середовище перевіряли за рівнем врожайності мікоплазм М. granularum, М hyorchinis, M.arginini зокрема шляхом визначення кількості колоній утворюючих одиниць (КУО). Отримані дані приведені в таблиці. Таблиця № п/п 1 2 3 4 5 6 Контрольні середовища Himedia Edwarda BBL Заявлене поживне середовище М. granularum 9.6*107 2.1*107 3.1*107 27*108 3.5*108 2.9*108 Як показане з таблиці, заявлене рідке поживне середовище для мікоплазм має якісний характерний ріст мікоплазм свиней штамів М. Granularum, M hyorchinis, M.arginini та накопичування бактеріальної маси з концентрацією 25,5млрд. Мю тис/см. КУО М hyorchinis 1.8*107 1.7*107 3.6*107 3.3*108 3.5*109 5.6*108 M.arginini 3.9*107 2.4*107 3.9*107 4.7*109 2.9*109 2.5*109 Запропоноване рідке поживне середовище для культивування мікоплазм може знайти застосування в лабораторіях ветеринарної так і гуманної медицини при діагностичних дослідженнях та біологічних підприємствах. 5 Комп’ютерна верстка М. Ломалова 54867 6 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601