Рідке поживне середовище для культивування мікоплазм

Рідке поживне середовище для культивування мікоплазм, що містить мікоплазменний бульйон з пептоном, дріжджовий екстракт, сироватку крові теплокровних тварин та глюкозу, яке відрізняється тим, що як дріжджовий екстракт використовують сухі пекарські дріжджі "Саф-момент" з рН 7,77,9, як пептон- сухий ферментативний пептон виробництва "Синбіаз" та додатково містить 10% розчин аргініну, 5% розчин ацетату талію, розчин 3 54866 глюкоза 0,4-0,6 пеніцилін 1000Од на 1см (див. патент України №18522 МПК С12С7/00, A61D 99/00, бюл. №11 15.11.2006р.) Недоліком цього поживного середовища залишається невисока культуральна активність. Крім того, на ньому неможливо візуально виявляти ріст видів мікоплазм, що ростуть без опалесценції та помутніння. В основу корисної моделі поставлено завдання удосконалення рідкого поживного середовища з метою забезпечення високого росту мікоплазм та розширення асортименту селективних поживних середовищ для лабораторних випробувань. Поставлене завдання вирішується в заявленому поживному середовищі для культивування мікоплазм, яке містить мікоплазмений бульйон з пептоном, дріжджовий екстракт, сироватку крові теплокровних тварин, глюкозу, 10% розчин аргініну, 5% розчин ацетату талію, розчин бензілпеніциліну натрію 1000000Од 0,1% розчин фенолового червоного. В якості дріжджового екстракту використовують сухі пекарські дріжджі "Саф-момент" з рН 7,7-7,9, а в якості пептону - сухій ферментативний пептон виробництва "Синбіаз". Склад запропонованого рідкого поживного середовища має наступне співвідношення компонентів, в мл/л: мікоплазмений бульйон, в тому числі сухого ферментативного пептону виробництва "Синбіаз" 4г на 100мл м'ясної води 681,00-684,00 сухі пекарські дріжджі "Сафмомент" з рН 7,7-7,9 70,00-80,00 сироватка крові теплокровних тварин 200,00-204,00 10% розчин аргініну 25,00-28,00 40% розчин глюкози 7,25-7,35 5% розчин ацетату талію 4,00-4,00 розчин бензілпеніциліну натрію 1000000Од 1,25-1,27 0,1% розчин фенолового червоного 1,50-1,70. Заявлене співвідношення компонентів та заявлений рН дріжджів є оптимальним відносно поставленої мети. При зменшенні або збільшенні заявлених інтервалів ріст мікоплазм уповільнюється або стає відсутнім. Крім того, збільшення компонентів в середовищі є економічно недоцільним. 4 Поживне середовище, що пропонується, виготовляється з сертифікованої сировини, містить в своєму складі феноловий індикатор завдяки якому має рожеве забарвлення, що дає змогу візуально в короткий термін виявляти ріст мікоплазм. Виготовлення поживного середовища для культивування мікоплазм передбачає почергове додавання всіх компонентів. Спочатку готують мікоплазменний бульйон шляхом змішування його з м'ясною водою та додаванням сухого ферментативного пептону виробництва "Синбіаз" в такій пропорції щоб в бульйоні кількість пептонів було в межах 1,5-2,5%, а амінного азоту - 0,2-0,5%. Дріжджовий екстракт готують з сухих пекарські дріжджів "Саф-момент" виробництва Київ, які розчиняють в бідистильованої воді до рН 7,7-7,9. Отриманий екстракт стерилізують шляхом автоклавування при 121°С на протязі 30 хвилин і провіряють на стерильність витримкою в термостаті при 37-38°С на протязі 1 доби. Термін використання отриманого екстракту 30-40 днів. В отриману суміш додають решту компонентів. В кінці додають феноловий червоний, та визначають рН отриманого середовища 7,7-7,9. Для перевірки поживне середовище стерилізують в термостаті на протязі доби при 37-38°С. Приклад 1 У пробирки із запропонованим поживним середовищем висівали по 1,20см (10-100 КУО) суспензії тест культур М.Granularum, M hyorchinis, M.arginini. Поживне середовище до виконання досліду мало рожевий колір. В якості контролю залишали пробірки в термостаті при температурі 37°С. Через 24-72 години інкубації в пробірках з середовищем засіяних тест культурами спостерігали зміну кольору з рожевого на M.arginini, жовтий - М.Granularum, M hyorchinis - малиновий. Контрольні пробірки залишались без змін кольору середовища. Приклад 2 При ізоляції мікоплазм з патологічного матеріалу використовуючи заявлене середовище вдалося виділити 15 польових штамів мікоплазм. Заявлене поживне середовище перевіряли за рівнем врожайності мікоплазм М.granularum, М hyorchinis, M.arginini зокрема шляхом визначення кількості колоній утворюючих одиниць (КУО). Отримані дані приведені в таблиці. Таблиця № п/п 1 2 3 4 5 6 Контрольні середовища Himedia Edwarda BBL Заявлене поживне середовище М.granularum 9,6*107 1,2*107 1,3*107 8 2,8*10 3,6*108 1,9*108 Як показане з таблиці, заявлене рідке поживне середовище для мікоплазм має якісний характерний ріст мікоплазм свиней штамів М.Granularum, M КУО М hyorchinis 1,3*107 1,2*107 3,1*107 8 4,3*10 2,5*109 5,8*108 M.arginini 3,3*107 2,4*107 2,9*107 9 4,7*10 3,9*109 3,5*109 hyorchinis, M.arginini та дозволяє накопичувати бактеріальну масу з концентрацією 25,5млрд. Мю тис/см для культивування мікоплазм свиней. 5 54866 Запропоноване рідке поживне середовище для культивування мікоплазм може знайти застосування в лабораторіях ветеринарної так і гуман Комп’ютерна верстка А. Рябко 6 ної медицини при діагностичних дослідженнях та біологічних підприємствах. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601