Контрольний штам “бузун-хдзва” teschovirus suis збудника ензоотичного енцефаломієліту (тешенської хвороби) свиней

Контрольний штам TESCHOVIRUS SUIS збудника ензоотичного енцефаломієліту свиней (тешенської хвороби), депонований в Колекції мікроорганізмів Харківської державної зооветеринарної академії за №12 від 06 08 2002р. придатний для бютехнолопчного контролю вакцинних та діагностичних препаратів при тешенській хворобі Винахід належить до галузі ветеринарної вірусологи, зокрема до штамів тешовірусів, що можуть бути використані для контролю імуногенності та захисного потенціалу вакцин проти тешенської хвороби (ТХ) на підприємствах біологічної промисловості Видоми різноманітні вірулентні (контрольні) штами збудника, які використовуються для бютехнолопчного контролю вакцин проти ТХ Ці штами здатні при штрацеребральному введенні забезпечити захворювання з ознаками ТХ у неімунних ПІДСВИНКІВ 2-4 місячного віку За технічним рішенням щодо їх застосування вони є близькими до застереженого об'єкту (див , наприклад, "Вакцина проти тешенської хвороби свиней шактивована культуральна емульгована" ТУУ 46 15 051-94) Недоліками зазначених штамів збудника ТХ є наступне Підсвинки МОЛОДШОГО віку є несприйнятливими до ТХ Інтрацеребральні ІН'ЄКЦІЙ підсвинкам старшого віку небезпечні фатальним ушкодженням мозку, який на ПІЗНІХ стадіях розвитку стає надто чутливим до маніпуляцій з лобовими долями, а лобові кістки стають надто твердими для трепанації Інші способи введення цих контрольних штамів свиням не є ефективними щодо відтворення клінічної маніфестацій ТХ, вони призводять лише до субімунізуючої інфекції свиней (М В Рево Вирусы и вирусные заболевания сельскохозяйственных животных, Госсельхозиздат УССР, Киев-1956, С 295-296, тощо) ськими свинками, зараженими цим штамом Проте штам "Навля-96", виділений з мозку хворого підсвинка, здатен визивати захворювання хоч і у свиней любого віку, але лише при контактній передачі від заражених ним морських свинок (А И Бузун, О Н Андреева Оптимизация лабораторной модели дополнительного биологического хозяина возбудителя болезни Тешена В сб трудов международной конференции по нейроинфекциям животных, 31 05-2 06 2001, Покров, 2001) В основу передбачуваного винаходу поставлена задача одержання контрольного штаму збудника ТХ свиней, який дозволяв би проводити оцінку протективної активності вакцин без застосування штрацеребрального чи контактного зараження свиней, а також без обмежень за їх віком Це значно спростило б бютехнолопчний контроль вакцин проти ТХ Поставлена задача вирішується завдяки використанню контрольний штам («пробійника») вірус ТХ, виділеного, на відміну від відомих штамів, від домової миші Mussa domestica дикої популяції, з вогнища ТХ у Полтавській області Штам характеризується високою нейровірулентністю для свиней при штраперитонеальному застосуванні, але який імунологічне не відрізняється від відомих епізоотичне актуальних штамів та ІЗОЛЯТІВ Цей штам названо "Бузун-ХДЗВА" і він є спроможним, на відміну від відомих штамів, визвати ТХ у неімунних свиней віком від 1,5 МІСЯЦІВ при штраперітонеальному зараженні, що й дозволяє використовувати його в якості "пробійника" в бютехнолопчному контролі вакцин та диагностикумів при ТХ Прототипом може бути штам "Навля-96" (Патент РФ №2176520 від 27 012000, виданий 10 12 2001, "Бюллетень изобретении РФ", 2001, №34), який здатен визивати захворювання у неімунних свиней при їх утриманні в контакті з мор Згідно З результатами реакції нейтралізації визначено, що цей вірус, як і штам "Навля-96" нале О (О ю 56044 жить до тешовірусів свиней і не відрізняється від нього за індексом нейтралізацій (Таблиця 1) В свою чергу, штам «Навля-96» не відрізняється за протективним антигеном від сучасних епізоотич них варіантів збудника ТХ (Бузун А И , Середа А Д , Жестерев В И и др Совершенствование вакцинопрофилактики болезни Тешена Ветеринария, 2001, №12, С 19-21) Таблиця 1 Визначення імунологічної спорідненості штамма "Бузун-ХДЗВА" зі штамом "Навля-96" збудника тешенської хвороби за індексом нейтралізації (ІН) в ІдТЦДбсДмл № опыта 1 2 Схема постановки опыта Шт Шт Шт Шт Шт Шт Шт Шт Навля-96 Навля-96 + СС до шт Навля-96 Бузун-ХДЗВА Бузун-ХДЗВА + СС до шт, Навля-96 Навля-96 Навля-96 + СС до шт Бузун-ХДЗВА Бузун-ХДЗВА Бузун-ХДЗВА + СС до шт Бузун-ХДЗВА Результаты титрования вируса в присутствии специфических сывороток (Ig ТЦД50/мл) 8,0 0 4,75 0 8,0 0 4,75 0 ІН(в %) 100 100 100 100 Зауваження СС- сироватка морської свинки специфічна до ВІДПОВІДНОГО вірусу, взята в дослід в дозі 20 нейтралізуючих одиниць (Романенко В П , Прус О Г Ретроспективний аналіз сироваток крові як метод діагностики ентеровірусних захворювань свиней "Мікробюл Ж", 1973, 35, С 401 -402), Шт - штам Штам "Бузун-ХДЗВА" було адаптовано до організму білих лабораторних мишей, а його цитопатична активність оцінена в пробірочних культурах клітин перещеплюваної лінії РК-15 Цей штам характеризується наступними ознаками Таксономічна характеристика Вірус є стійким до розчинників жирів (хлороформу, фреону, тощо) При електронній мікроскопи має форму та розміри, типові для ентеровірусів В реакціях нейтралізації та імуноферментного аналізу визначається наявність антигенів, загальних для всіх ентеровірусів свиней 1-госеротипу Маркерні характеристики Вірус репродукується в культуральній системі первинних (ПС) та перещеплюваних Адаптаційні властивості та конта- клітин свині (СПЭВ, РК-15, SK-6, ПТП) при оптимальній температурі (37,5±0,5°С) гіозні сть до інфекційних титрів 8,0-9,0 Ід ТЦД50/мл Штам є контагіозним для щурів, мишей, морських свинок, свиней Вірус не патогенний для гризунів при внутрішньом'язовому, підшкірному та штраПатогенні та нейровірулентні вла- перітонеальному способах зараження, проте вшиває у них короткотермінову віремию та персистенцію вірусу Має нейровірулентні властивості для свиней, спричистивості няючи захворювання й загибель інокульованих тварин При штраперітонеальному введенні неімунним проти тешенської хвороби свиням Властивості корисної речовини, віком старше 1,5 МІСЯЦІВ вірус визиває у них гостре клінічне захворювання з летальним наслідком Тому вірус придатен для використовування у якості "пробійника" що виробляється вірусом при контролі вакцинних препаратів Не агглютинує еритроцити миші, морської свинки, свині, курей та качок без додаткової обробки Повністю втрачає інфекційні властивості після прогріву протягом 2 годин при 56°С, Терморезистентність (Т56 - ознака) але частково зберігає антигенну активність Хлороформ, ефір, фреон та ІНШІ жиророзчинники не пригнічують інфекційної активності вірусу Вірус є чутливим до антитіл проти гетеролопчних ентеровірусів свиІнпбиторочутливість ней, до термолабільних р-шпбиторам нативних сироваток великої рогатої худоби та свиней Вірус шактивують розчини формальдегиду, сірчанокислої МІДІ, теотропину, кристалл-вюлета в різних концентраціях Стабільність генетичних та імуно- Стабільність генетичних та імунобюлопчних ознак зберігалась за умов пасажуванбюлопчних ознак ня протягом 7 пасажів в морських свинках (термін спостереження) Контамінація бактеріями, грибами, мікоплазмами та сторонніми віру- Не контамінований бактеріями, грибами, мікоплазмами та сторонніми вірусами сами Властивості агглютинацм Стандартні умови вирощування Перещеплювані культури клітин нирки свині (виробнича ЛІНІЯ РК-15), вирощені в матрасах, пробірках, планшетах або ролерним способом в бутлях зі скла чи пластика, инокулють вірусом тешенської хвороби штам "Бузун-ХДЗВА" та інкубують при 37°С до повного розвитку цитопатичної дії (ЦПД), тобто до повної деструкції моношару клітин 56044 у вигляді закруглення та об'єднання уражених кліСЯЦІВ щеплюють вакциною проти тешенської хвотин в грони, з наступним відшаруванням у культуроби, яку вивчають на захисну активність, згідно з ральну рідину При множині зараження (М) 0,001 настановою з и застосування Через 21 день після ТЦДбо/клітшу ЦПД розвивається через 96 годити щеплення вакцинованих і двох невакцинованих інкубації в стационарних умовах і, приблизно чеПІДСВИНКІВ штраперитонеально заражають вірусом рез 72 години при ролерному культивування При птама "Бузун-ХДЗВА" в дозі 1000 ЛД50 ПІДСВИНКІВ збільшенні М до О.ОІТЦДбо/клітшу ЦПД наступає спостерігають протягом місяця Починаючи з 8 дня через 48, а при М 0,1 ТЦДбо/клитшу - через 24 годипісля зараження невакциновані підсвинки захвони рюють на тешенську хворобу і гинуть від неї в паралітичній фазі захворювання на 15 день після Перед висушуванням штамм стабілізують пазараження і пізніше Захисну активність перевірясажем через білих лабораторних мишей Для цьоємої вакцини оцінюють за КЛІНІЧНИМ станом та імуго не менше 4-х мишей штраперитонеально заранологічним статутом щеплених нею ПІДСВИНКІВ чежують культуральним вірусом і через 3-7 тижнів рез ЗО днів після контрольного зараження після цього, з дотриманням необхідних правил від інокульованих тварин відбирають патматеріал З Приклад 2 Застосування штаму для контролю патматеріалу евтаназованих тварин готують 30діагности кумів 50% суспензію Отриману суспензію обробляють ПІДСВИНКІВ (П=2 І більше) віком старше 1,5 МІхлороформом у співвідношенні 1 10 і надосад СЯЦІВ заражають вірусом штама "Бузун-ХДЗВА" як змішують зі знежиреним молоком або іншими стазазначено в прикладі 2 Починаючи з 3-5 доби пісбілізаторами люфілізують в ампулах, та зберігаля зараження від ПІДСВИНКІВ відбирають КЛІНІЧНІ ють при температурі не вище 6°С Вірус освіжують зразки (крові, сечі, калу), які досліджують діагноспасажуванням в культурі клітин РК-15 один раз в тикумом, що перевіряється на придатність Такі ж два років дослідження проводять зі зразками патматеріалу (мозком, підшлунковою залозою, кишечником), Виділений від гризуна у вогнищі ТХ на теритовідібраним від вимушено забитих хворих чи загирії Полтавської області штамм "Бузун-ХДЗВА" Епнувших від захворювання на тешенську хворобу terovirus suis збудника ензоотичного енцефаломіПІДСВИНКІВ Діагностичну ефективність перевіряєєліту свиней (тешенської хвороби) наразі мого препарату оцінюють за результатами дослівикористовується в академії, як виробничий для дження зразків на тешовірус або антитіла до нього розробки та виготовлення біологічних препаратів від заражених та незаражених вірусом "БузунПриклад 1 Застосування штаму для контролю ХДЗВА" тварин вакцини ПІДСВИНКІВ (П=2 І більше) віком старше 1,5 МІ Підписано до друку 05 05 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24