Штам bacillus subtilis bs 2931 – антагоніст збудника парші та опіку плодових

Штам Bacillus subtiiis BS 2931 - антагоніст збудника парші та опіку плодових, колекція загальноуніверситетської лабораторії' біотехнологи, Ужгородський державний університет. кауера позитивна. Може використовувати цитрат натрію як єдине джерело вуглецю, а також у присутності органічних субстратів. Ацетат натрію не використовує. Утворює лізиндекарбоксилазу, розщеплює малонат натрію з утворенням лужних продуктів слабо. Індол та сірководень не утворює. Аргініндекарбоксилаза, аргініндегідролаза, фенілаланіндезаміназа, уреаза ; відсутність. Ксилозу, сорбіт, дульцит, мальтозу, лактозу, цукрозу - не використовує. Газ із глюкози не утворює. Еритроцити людини в умовах підвищеного вмісту СОг не гемолізує, лецитиназна активність у присутності хлориду натрію відсутня, а при його відсутності наявна. Тест мацерації зрізів картоплі (сорт «Пікассо») негативний. Наявна целюлазна активність. Штам не є фітотоксичним на листі та зелених пагонах груш, яблунь, кінських бобів, пагонах персика Штам не пригнічує проростання та розвиток злаків (пшениця, кукурудза, ячмінь), бобових (кінські боби, люпин та квасоля). Приклад 1. До 2-добових макроколоній антагоніста, що виросли на периферії поверхні пластини картопляного агару у чашці Петрі, перпендикулярними штрихами інокулюють культури збудника опіку плодових із ізотонічних суспензій 108 кфо/мл Потім культивують при 30°С на протязі 2-3 днів до появи зон затримки росту між колоніями антагоніста та збудника опіку. За розмірами зон встановлюють чутливість конкретних штамів Е. amylovora до антимікробної речовини В. subtiiis BS2931 (Табл. 1). Приклад 2. Зрізи поверхні зелених груш сорту «Конференція» обробляють суспензією В. subtiiis BS 2931 (10 12 кфо/мл), дають підсохнути в потоці стерильного повітря і інокулюють по краплині (0,01 мл) суспензії Е. amylovora штам 684 (10 е кфо/мл), або будь-який інший з наведених штамів О CM ю со 35420 опіку плодових. Загнивання плодів, виділення з уражених плодів спостерігаються тільки в контролі (груші, інокульовані лише збудником опіку). Приклад 3. Зрізи груш притуляли до добового газону В. subtilis BS 2931, далі інокулювали суспензію опіку плодових (10 8 кфо/мл), як описано вище. Оброблені бацилами груші не розвивають симптомів опіку. Приклад 4. Фільтрат 4-добової культури В subtilis BS 2931 вирощеної на бульйоні або визначеному рідкому поживному середовищі заморожують при - 70°С, а далі ліофілізують при -20°С. Залишок розчиняють у стерильній водопровідній воді так, щоб одержати 20-кратний концентрат. До 1 мл суспензії конидій (10 спор/мл), одержаної шляхом змивів листя яблуні із симптомами парші додають 9 мл концентрату. Поки спори ще не осіли, краплину суміші наносять на стерильне предметне скло в чашці Петрі з вологим фільтрпапером Витримують при 18-20Х на протязі доби, а далі краплини накривають покривними скельцями і лід світловим мікроскопом оглядають препарати по 5 незалежних поль зору на препарат. Приклад 5. До 25 мл сусла у 250 мл колбах Ерленмеєра додають по 0,02 мл суспензії антагоніста (10е кфо/мл) та збудника парші (10 s спор/мл) з чистої культури. Культивують при 24°С на протязі доби. Далі проводять мікроскопію 3 незалежних проб по 5 поль зору на препарат. Встановлюють довжину первинних гіф у пробах із спільного культивування та в контролі, коли спори гриба інкубували без бацил Таким чином, пропонований штам є антагоністом як бактеріального опіку плодових, так і парші. Він може бути використаний для створення препарату для захисту рослин від вказаних хвороб. 1. Abo-E1-Dahab, El-Goorani M. А. 1964: Antagonistic effect of a Bacillus subtilis strain upon Erwinia amylovora. Phytopathology 54: 1285 -1286. 2. Шарга Б. М., Туряниця А. І. Антагоніст збудника опіку плодових. Патент України. № 18402, С1, A01N 63/04; C12N 1/14; Бюл. №6, 25. 12. 97. (прототип) 3. Майданик С. М Штам бактерий Bacillus sp. для получения препарата против парши яблони. Авторское свидетельство СССР № 1347445 C12N 1/20, A01N 63/00// (C12N1/20; С12 R 1:07) 28 01.86 (для служебного пользования экз № 000356), (прототип) Таблиця 1 Антагоністична активність Е. amylovora до збудника опіку плодових на чашках Петрі Штам Е. amylovora Рослина-господар •Чутливість до антибіотику В. subtilis BS 2931 Еа-4# яблуня + Еа- 95 # яблуня ++ 659* яблуня ++ 691 * яблуня ++ Єа-311# айва + 610* глід ++ 651 * глід ++ Еа103# мушмула + 684* глід ++ NCPPB 2024 груша ++ NCPPB 8705 груша ++ 661 * горобина (Sorbus sp.) ++ Примітка: # штам одержано від д-ра V. Gavrilovic (Югославія), * штам одержано від д-ра P. Sobiczewski (Польща), + штам чутливий до антибіотику (зона затримки росту між макроколонією антагоніста та збудника опіку 1-15 мм), ++ штам високочутливий до антибіотику (зона затримки росту між макроколонією антагоніста та збудника опіку більша 15 мм ). 35420 Таблиця 2 Антагоністична активність В. subtitis BS 2931 до збудника парші Fusicladium dentriticum Середовище Розвиток збудника парші Кількість пророслих конидій, n %± SE Довжина первинних гіф Стерильна водопровідна вода (контроль) 65 ±11 160±25 20-кратний концентрат фільтрату 4-добової 0 0 3±0,4 10±3 (мкм), n ± SE культури Змішана добова сусло-культура Примітка: SE - стандартна похибка, п - середнє значення за результатами 15 визначень. Тираж 50 екз. Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101 (03122) 3 - 7 2 - 8 9 (03122) 2 - 5 7 - 0 3