Спосіб визначення ефективності протипаразитарного (антилямблійного) засобу

Спосіб визначення ефективності протипаразитарного (антилямблійного) засобу, що включає відтворення взаємодії живого збудника лямбліозу з протипаразитарним засобом та оцінку результа 3 56411 лямблій, і змішують з аналогічним об'ємом водного розчину протипаразитарного засобу, інкубують суміш при 18-22°С впродовж 30хв., а результат оцінюють у полі зору мікроскопу за методом поляризованої флуоресценції за критерієм індукованої протипаразитарним засобом цитодеструкції. Перелік фігур. Фіг.1. Світіння тіл лямблій в мікропрепараті за методом поляризованої флуоресценції. Фіг.2. Деструктивні зміни клітин лямблій, взятих із зіскрібка зі слизової оболонки язика, під впливом орнідазолу. Люмінесцентний мікроскоп Люмам 8 3м: об. 9х ок. 15х. Фіг.3. Характер взаємодії лямблій із зіскобу слизової оболонки язика з цефазоліном. Люмінесцентний мікроскоп Люмам 8 3м: об. 9х ок.15х. Фіг.4. Характер взаємодії лямблій із зіскобу слизової оболонки язика з лінкоміцином. Люмінесцентний мікроскоп Люмам 8 3м: об. 9х ок.15х. Спосіб здійснюють наступним чином. На предметне скло вносять краплину отриманого від хворого матеріалу, наприклад, зіскоб із слизової оболонки язика або/і краплину хімусу, отриманого при діагностичному зондуванні, або краплину фекалій, після чого досліджують на наявність у мікропрепараті живих лямблій, а при позитивному результаті попереднього визначення змішують з аналогічним об'ємом водного розчину протипаразитарного засобу. Отриману суміш інкубують при 18-22°С впродовж 30хв., після чого мікропрепарат досліджують у полі зору мікроскопу за методом поляризованої флуоресценції. Аналогічним чином визначають вплив на ізольовані лямблії контрольних препаратів, наприклад, антибіотиків. Приклад 1. Хвора Н., 48 років, з діагнозом: гострий алергічний контактний дерматит, асоційований із лямбліозом, при паразитологічному аналізі біологічного матеріалу, отриманого з фекалій та зіскобу із слизової оболонки язика виявлено наявність лямблій у вегетативній і цистоїдній формі. З метою призначення оптимального лікування на предметне скло вносили по краплині отриманого 4 матеріалу, зокрема зіскоб із слизової оболонки язика, і після пересвідчення в наявності в мікропрепараті живих лямблій краплину матеріалу змішували з аналогічним об'ємом водного розчину протипаразитарного засобу, зокрема орнідазолом (1:10000). Аналогічним чином готували ще декілька мікропрепаратів - для контролю, наприклад, з внесенням по краплині антибіотиків лінкоміцину та цефазоліну. Усі мікропрепарати витримували при 18-22°С впродовж 30хв., після чого досліджували за методом поляризованої флуоресценції у полі зору мікроскопу. Протипаразитарну активність засобів оцінювали за критерієм цитодеструкції паразитів у мікропрепаратах. З наведених мікрофотографій видно, що виділені з організму хворої Н. лямблії найбільш чутливі до дії орнідазолу, що проявилося у клітинній деструкції паразитів, тоді як антибіотики лінкоміцин та цефазолін не виявили протипаразитарної дії. Відповідно до отриманих результатів хворій Н. було призначено лікування орнідазолом у таблетках по 0,5 г двічі на день протягом 10 днів, яке завершилося клінічним одужанням та позитивним антипаразитарним ефектом: трикратний паразитологічний аналіз не виявив лямблій у жодному із взятих на дослідження біоматеріалів. Приклад 2. За запропонованим способом проведено порівняльне визначення ефективності протипаразитарного (антилямблійного) засобу у 12 хворих на рожеві вугри. Перед лікуванням у кожного з 12 пацієнтів за допомогою запропонованого засобу проводили тестові проби на чутливість лямблій до таких лікувальних засобів як орнідазол, цефазолін та лінкоміцин. У результаті індивідуалізованого підбору оптимального за критерієм цитодеструктивної дії протипаразитарного засобу, результати якого наведені в таблиці, у 10 з 12 хворих ((83±11) %) лікування виявилося ефективним при застосуванні орнідазолу. Ще у двох хворих позитивний ефект був досягнутий після комбінованої терапії орнідазолом і лінкоміцином. Таблиця Рівень ефективності і пріоритетності лікувального засобу Лікувальний засіб орнідазол цефазолін лінкоміцин Результат тестової проби на ефективність засобу ++++ +++ ++ +/± 8 2 2 3 3 4 2 5 3 3 1 Показник ефективності протипаразитарного лікування, виражений відсотком досягнутого найвищого рівня (++++) до усіх інших результатів (див. табл.), оцінювали як показник пріоритетності засобу при вирішенні доцільності його призначення з лікувальною метою. Отже, за допомогою запропонованого способу забезпечується можливість - індивідуалізованого вибору оптимального протипаразитарного засобу безпосередньо перед проведенням терапії, що суттєво оптимізує лікувальний процес в цілому. Показник пріоритетності засобу 50,0±12,5 18,7±9,7 31,0±11,6 Таким чином, запропонований спосіб забезпечує вищий, ніж за способом-прототипом, рівень точності, технологічності та інформативності клініко-лабораторного дослідження. До переваги запропонованого способу слід віднести методичну можливість оцінювати протипаразитарну активність засобу як такого, особливо, при розробці і випробуванні нових антилямблійних засобів, в силу чого спосіб може знайти застосування не тільки в медичній практиці, але й наукових дослі 5 56411 дженнях при проведенні доклінічних та клінічних випробувань нових антилямблійних засобів. Джерела інформації: 1. Шкільна М.І. Клініко-патогенетичні особливості деяких форм кропив'янки та дерматитів алергічного ґенезу на тлі лямбліозу / Автореф. канд. дис мед. наук. - Харків, 2010. - 19с. 2. Шкільна М.І., Дем'яненко В.В. Біофізичні засади клініко-лабораторної інформативності поля Комп’ютерна верстка Л. Купенко 6 ризаційної флуоресценції лямблій / Розвиток наукових досліджень 2007 // Матеріали Третьої міжнар. науково-практ. конф. 26-28 листопада 2007 р. - т.5. - Полтава: ІнтерГрафіка, 2007. - С. 77-79. 3. Пат.29303 U. Спосіб діагностичного визначення лямблій. Андрейчин М.А., Шкільна М.І. - № u200709882; 03.09.2007; опубл. 10,01,2008; Бюл. №1. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601