Готова лікарська форма протамінсульфату

Готова лікарська форма протамінсульфату, яка містить діючу речовину - субстанцію про Винахід відноситься до хіміко-фармацевтичної промисловості і може використовуватися у виробництві препаратів антигеморапчної дії на основі протамінсульфату Діюча речовина препаратів такого типу - субстанція протамінсульфату -являє собою полікатіонну пептидну похідну, яку одержують зі сперми лосося Вона містить аргінін (біля 67 %), серін, аланін та ІНШІ амінокислоти Відомо, що препарат протамінсульфату віднесений до життєво необхідних важливих лікарських засобів і широко використовується при необхідності нейтралізувати дію збиткового екзогенного гепарину, зокрема, при передозуванні гепарину, після операцій з екстракорпоральним кровообігом та використанням гепарину, при «гепариноподібних» порушеннях здатності крові до згортання та як цитостатичний засіб, який подавляє ріст деяких пухлин (М Д Машковский, Лекарственные средства, ч 1, стр 469, Москва, 0 0 0 «Новая волна», 2002 г, Wright J Clinical trial ofprotamme in the treatment of malignant diseases, Br J Cancer, 1968, 22 415-421) При введенні протаміну в присутності гепарину утворюється стабільна сполука за рахунок взаємодії позитивно заряджених груп аргініну з негативно зарядженими групами гепарину, що нівелює антикоагуляційні властивості гепарину Існує три типи препаратів протамінсульфату, які окрім активної субстанції містять 1-ий тип од тамінсульфату, консервант, ІЗОТОНІЧНИЙ агент натрію хлорид, речовину, яка коригує рН розчину, кислоту хлористоводневу та воду, яка відрізняється тим, що як консервант вона містить м-крезол при наступному співвідношенні компонентів, г/л субстанція протамінсульфату 7,5-9,2 м-крезол 1,0-1,25 натрію хлорид 7,5 - 8,5 кислота хлористоводнева 0,056-0,065 вода до 1 л норазового використання - ІЗОТОНІЧНИЙ агент та не містить консервантів, 2-ий тип - стерильний сухий препарат та супроводжуючий розчинник одноразового чи багаторазового використання, і найбільш досконалий та вигідний при багаторазовому використанні препарат, який містить консерванти (фенол, метіл-4-пдроксібензоат, пропіл-4пдроксібензоат або їх суміші) та може містити або не містити ІЗОТОНІЧНИЙ агент, найчастіше, натрію хлорид (в залежності від концентрації протамінсульфату) Для виготовлення готових лікарських форм антидотів гепарину використовуються субстанції протамінсульфату та його похідної протамшпдрохлориду, а також синтетичні аналоги субстанцій, одержані за допомогою пептидного синтезу, або генно-інженерні продукти Відомо, ЩО у багатьох пацієнтів використання готової лікарської форми протаміну часто призводить до виникнення таких побічних ефектів, як алергічні реакції, зниження кров'яного тиску, брадикардія, збільшення легеневого артеріального тиску, зменшення вживання кисню, тромбоцитопенія та лейкопенія (патент WO 95/13083, кл А61К 37/00, 38/00, С07К 4/00,7/00 "Нові пептиди для усування антикоагуляційної дії гепарину та низькомолекулярного гепарину", 1994 р , WO 94/04176, кл А61К 37/02, 37/08, С07К 7/10 "Нові пептиди для усування антикоагуляційної дії гепарину", 1992 р, WO 94/04181, кл А61К 37/02, С07К 5/10 "Ней о (О 60231 тралізація гепарину мультімерними пептидами , 1992 р) Але, як показують дослідження самих авторів цих винаходів, якщо вдається знизити токсичність субстанції протаміну за рахунок, наприклад, зниження позитивного заряду аналога протаміну, то не вдається досягти такої ефективної нейтралізації гепаринів та здатності розщеплюватися ферментами крові, як у природних протамінсульфатів, тобто, не вдається задовольнити головні вимоги, які ставляться до цих препаратів ефективна нейтралізація гепаринів, низька токсичність та здатність розщеплюватись ферментами крові У той же час, здійснені численні спроби знайти окрім протаміну ІНШІ агенти для нейтралізації гепарину та проведені широкі дослідження у цій галузі нічого більш підходящого за протамін не виявили Найбільш близьким за складом до препарату, що заявляється, є готова лікарська форма протамінсульфату, яка містить як діючу речовину субстанцію протамінсульфату з наступними характеристиками це суміш пептидів А, В,С, D у відсотковому відношенні 16,65 25,54 36,13 21,68, ВІДПОВІДНО, у КІЛЬКОСТІ 10,0 -11,5 г/л, як консервант - фенол у КІЛЬКОСТІ 2,4 - 3,0 г/л, як ІЗОТОНІЧНИЙ агент натрію хлорид у КІЛЬКОСТІ 7,0 - 8,2 г/л, як речовину, яка коригує рН розчину, кислоту хлористоводневу у КІЛЬКОСТІ 0,08 - 0,09 г/л та воду - до 1 л (Сертификат соответствия № 77/6467 ЦС и ККЛ от 25 01 2000 г) Недоліками цього препарату є його токсичність за рахунок використання великої КІЛЬКОСТІ субстанції протамінсульфату та фенолу як консерванта Завданням винаходу є створення високоефективного препарату протигеморапчної дії зі зниженою токсичністю Поставлене завдання вирішується тим, що готова лікарська форма протамінсульфату, яка містить діючу речовину, консервант, ІЗОТОНІЧНИЙ агент, речовину, яка коригує рН розчину, та воду, у ВІДПОВІДНОСТІ з винаходом у якості консерванту містить м-крезол при наступному співвідношенні компонентів, г/л субстанція протамінсульфату 7,59,2 г, м-крезол -1,0-1,25 г, натрію хлорид - 7,5-8,5 г, кислота хлористоводнева - 0,056-0,065 г, вода - до 1л Субстанція протамінсульфату, яка використовується в препараті, що заявляється, має наступні характеристики це суміш пептидів А, В,С, D, з молекулярною масою від 4,046 до 4,319 кД, у відсотковому відношенні 18,12 29,54 29,89 21,78, ВІДПОВІДНО, з активністю не менше 120 МО/мгта з залишковою протеолітичною активністю не більше 0,075 аб од Використання такої високоактивної субстанції дозволяє зменшити її загальну КІЛЬКІСТЬ при досягненні потрібної ефективності препарату, а отже знизити токсичність готової лікарської форми Окрім того, відомо, що крезоли за рН розчину від 2 до 10 є більш ефективними по відношенню до широкого спектру мікроорганізмів, дріжджів та грибків у порівнянні з фенолом ("Технология и стандартизация лекарств" (ГНЦЛС), Ф А Конев и др, г Харьков, 0 0 0 "Puper", 1996 г) Ефективність м-крезола як консерванта у готовій лікарській формі протамінсульфату у КІЛЬКОСТІ 1,1 г/л була перевірена авторами рішення, що заявляється, методами, які описані у Державній фармакопеї України 2001 року Як референтні мікроорганізми були використані Candida albicans ATCC 10231, Pseudomonas aemgmosa ATCC 9027 і Staphylococcus aureus ATCC 6538 P Результати досліджень показали, що препарат має виражену антимікробну активність по відношенню до вказаних вище штамів Отже, можливість використання у готовій лікарській формі протамінсульфату невеликої КІЛЬКОСТІ токсичного консерванту також дозволила зменшити токсичність готової лікарської форми протамінсульфату Окрім того, рН препарату, який заявляється, дорівнює від більше за 4 до 5,5, в порівняні з 3,14 для препарату-прототипу, що свідчить про більшу фізіологічність препарату, який заявляється Досягнення поставленого завдання ілюструється прикладом конкретного виконання Приклад 1 8 г натрію хлориду розчинили у 800 мл води, при перемішуванні додали 8,4 г протаміну сульфату Після ЙОГО розчинення додали 1,1г м-крезолу, та перемішували до повного розчинення Потім рН розчину довели до 4,5 за допомогою хлористоводневої кислоти у КІЛЬКОСТІ 0,059 г Об'єм суміші довели до 1000 мл водою, піддали стерилізуючій фільтрації, розлили у флакони та закупорили Активність одержаного препарату визначили при титруванні розчинів протамін сульфату гепарином на титраторі Шотта з використанням фототроду DP 550 Виявили, що 1 мл препарату мав активність 1150 ОД Стабільність одержаного препарату визначили при прискореному зберіганні за температури 37 °С протягом 40 діб За допомогою аналітичної високоефективної рідинної хроматографії визначили відсотковий склад пептидів до і після інкубації Виявили, що склад препарату залишається у межах помилки досліду, тобто, гідроліз не відбувається Ефективність готової лікарської форми протамінсульфату in vitro визначали і порівнювали за здатністю нейтралізувати гепарин у перфузаті, взятому з екстракорпорального контуру апарату штучного кровообігу під час перфузм Критерієм оцінки була мінімальна нейтралізуюча доза досліджуваного препарату та препарату-прототипу Для проведення досліджень були приготовлені робочі розчини препарату, що заявляється, та препарату-прототипу, які містили по 1 мг/мл порівнюваних препаратів, а потім були приготовлені їх розведення у концентрації від 50 до 400 мкг/мл з інтервалом 50 мкг/мл Пробірки з розчинами розміщували у термостаті за температури 37°С на 15 хвилин Результат зчитувався по пробірці, у котрій відбулося згортання крові за додатку найменшої КІЛЬКОСТІ препарату, що заявляється, або препарату прототипу Результати проведених 23 досліджень in vitro зведені в таблицю Мінімальна доза (мкг/мл), яка нейтралізує гепарин у перфузаті 60231 № прикладу 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Препарат, що заявляється 10 10 20 ЗО 15 20 25 25 20 35 25 ЗО 25 20 25 25 Комп'ютерна верстка М Клюкш Препаратпрототип 25 15 25 ЗО 20 25 25 20 20 35 35 35 25 25 ЗО 25 17 18 19 20 21 22 23 Середнє значення Р 25 20 25 20 20 20 20 ЗО 20 25 20 35 20 20 22,174 ±1,21 25,43 ±1,214