Склад комплексного поживного середовища для отримання ентомоцидного біопрепарату

Склад комплексного поживного середовища для отримання ентомоцидного біопрепарату, що містить органічні і мінеральні компоненти та використовується для вирощування бактеріальних ку 3 60707 вирощування ентомоцидних штамів, наприклад КМОНУ 10020. Недоліком відомого складу є мала продуктивність та низька ентомоцидна активність вирощеного штаму. Задачею, на рішення якої спрямована корисна модель, є розробка оптимального складу поживного середовища для культивування штаму з ентомоцидною активністю, який використовується як продуцент біопрепарату проти шкідників їстівних грибів, зокрема грибного комарика Bradysia pilistriata Frey. (Sciaridae). Ця задача вирішується складом комплексного поживного середовища для отримання ентомоцидного біопрепарату, що містить органічні і мінеральні компоненти та використовується для вирощування бактеріальних культур, згідно з корисною моделлю, бактеріальну культуру Bacillus thuringiensis КМОНУ - 10020 вирощують на рідкому комплексному органо-мінеральному середовищі, яке містить грибний бульйон - 1000 мл (гриби - 200 r, NaCl - 3 г, вода - 1000 мл), з додатками: Na2HPO4 - 3 г, КН2РО4 - 1,5 г, NaCl - 1,5 г, NH4С1 0,5 г, MgSO4  7Н2О - 0,1 г, що забезпечує добрий та швидкий ріст штаму, наявність спорокристалічного комплексу, який значно підвищує ентомопатогенну активність біопрепарату проти основного шкідника їстівних грибів - грибного комарика Bradysia pilistriata Frey. (Sciaridae). Готується пропоноване поживне середовище наступним чином. Спочатку готують органічну частину складу. Для цього 200 г грибів, наприклад гливи, відварюють в 1 л води, додають 3 г повареної солі (NaCl), фільтрують. В отриманий грибний бульон додають мінеральні складові, г/л: Na2HPO4 - 3, КН2РО4 - 1,5, NaCl -1,5, NH4Cl - 0,5, MgSO4  7Н2О 0,1. Штам бактерій В. thuringiensis КМОНУ 10020 після добового попереднього вирощування на косяку, змивають фізіологічним розчином, готують бактеріальну суспензію з чисельністю КУО в 1 мл 4 на рівні 1  10 , яку вводять у виготовлене поживне середовище. Отриманий біопрепарат інкубують в термостаті при 28±5 °С протягом 72 годин. Загальними ознаками пропонованого складу поживного середовища і складу поживного середовища по прототипу є те, що виготовлену бактеріальну суспензію вводять у поживне середовище, що містить органічні та мінеральні компоненти. Відмітними ознаками пропонованого складу поживного середовища від прототипу є те, що добову культуру бактерій В. thuringiensis КМОНУ 10020 вирощують на комплексному органомінеральному поживному середовищі складу: грибний бульйон гливи - 1000 мл, мінеральні додатки, г/л: Na2HPO4 - 3, КН2РО4 - 1,5, NaCl -1,5, NH4Cl 0,5, MgSO4  7Н2О - 0,1. У результаті застосування такого складу середовища підвищується продуктивність бактеріальної культури В. thuringiensis КМОНУ 10020 і як наслідок підвищується кількість спор та кристалів, що приводить до значного зростання ентомопатогенної активності штаму. У лабораторних умовах науково-навчального біотехнологічного центру Одеського національного університету ім. І. І. Мечникова проведені порівняльні випробування вирощування ентомоцидного штаму В. thuringiensis КМОНУ 10020 на двох поживних середовищах: стандартному середовищі МПБ по прототипу та пропонованому комплексному поживному середовищі. Оцінку продуктивності штамів на вказаних середовищах визначали за показником оптичної щільності та здійснювали на спектрофотометрі «Спекол - 10» з довжиною хвилі 540 нм. Оптичну щільність вимірювали у терміни: 0,2,4, 6,24, 48, та 72 години після внесення бактеріальної суспензії у виготовлені стерильні поживні середовища. Ростові характеристики штаму В. thuringiensis КМОНУ 10020 за оптичною щільністю D540 У залежності від складу середовища представлені у таблиці 1. 9 Таблиця 1 Термін спостережень, години Ріст штаму на середовищіпрототипі Ріст штаму на пропонованому середовищі 0 2 4 6 24 48 72 0.04 0,09 0,12 0,15 0,21 0,30 0,71 0,03 0,38 0,45 0,60 1,85 2,0 2,8 З результатів вимірювань видно, що пропонований склад поживного середовища на відміну від середовища по прототипу сприяє продуктивному росту культури. Так, якщо через дві години щільність культури на традиційному середовищі (прототип) збільшилась у 2 рази і склала - 0,09, то на пропонованому збільшилась у 10 разів і склала 0,38; на 24 годину цей показник на традиційному (прототип) склав лише 0,21, на пропонованому 1,85, на 72 годину - 0,71 та 2,8 відповідно. Після вирощування культури В. thuringiensis КМОНУ 10020 впродовж 72 годин визначали активність її ларвіцидної дії на грибного комарика Bradysia pilistriata Frey. (Sciaridae) пo відсотку загибелі личинок. Ларвіцидна активність штаму В. thuringiensis КМОНУ 10020 (% загибелі личинок) у залежності від складу поживного середовища відображена в таблиці 2. 5 60707 6 Таблиця 2 Ларвіцидна активність (% загибелі личинок Bradysia pilistriata Frey. Sciaridae) 43,3±5,1 93,3±10,3 Поживне середовище Стандартне середовище МПБ (по прототипу) Пропоноване середовище З результатів досліджень видно, що ларвіцидна активність штаму В. thuringiensis КМОНУ 10020 при вирощуванні на пропонованому поживному середовищі більш ніж у 2 рази перевищує ларвіцидну активність штаму, вирощеному на стандартному поживному середовищі. Таким чином, проведені дослідження показали, що пропонований склад комплексного органомінерального поживного середовища для вирощу Комп’ютерна верстка Л. Купенко вання ентомоцидних штамів, що використовуються як продуцент біопрепаратів проти шкідників їстівних грибів забезпечує добрий ріст культури В. thuringiensis КМОНУ 10020, що у свою чергу приводить до створення більшої кількості спор та кристалів, тим самим викликає загибель більшої кількості личинок грибних комариків Bradysia pilistriata Frey. (Sciaridae), тобто зростає ентомоцидний ефект використання штаму мікроорганізму. Підписне Тираж 24 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601