Спосіб виготовлення пастоподібного ентомоцидного біопрепарату на основі бактерій bacillus thuringiensis

1 Спосіб виготовлення пастоподібного ентомоцидного біопрепарату на основі Bacillus thunngiensis, що включає приготування поживних середовищ, вирощування мікроорганізмів, перевірку на наявність сторонньої мікрофлори, центрифугування та уведення стабілізаторів, який відрізняється тим, що як складові поживного середовища для культивування бактерій вибрані меляса і кукурудзяний екстракт, а для тривалого зберігання ентомоцидної властивості препарату введені стабілізатори карбоксіметилцелюлоза і бензойна кислота 2 Спосіб по п 1, який відрізняється тим, що поживне середовище містить 1,5 % меляси і 2,0 % кукурудзяного екстракту, а кінцевий продукт - паста містить стабілізатори 0,2% карбоксиметилцелюлози і 0,1 % бензойної кислоти Винахід відноситься до прикладної мікробіологи, а саме до способу виготовлення пастоподібного препарату для захисту сільськогосподарських рослин від шкідливих комах родів Coleoptera на основі бактерій Bacillus thunngiensis За найближчий аналог обраний спосіб виготовлення біопрепарату бітоксібациліну на основі бактерій Bacillus thunngiensis першого серотипу (ТУ-59 05 104 23-80) Бітоксібацилін (БТБ) - сухий бактеріальний інсектицидний препарат, який одержують мікробіологічним шляхом Препарат призначено для боротьби з колорадським жуком і бавовняною совкою До складу БТБ входять спорокристалевий комплекс, термостабільний екзотоксин, залишки середовища і наповнювач - каолін Кристалоутворюючи ентомопатогенні бактерії роду Bacillus thunngiensis є грам позитивні факультативні аероби Вегетативні клітини - палички, рухомі, мають перитрихіальні джгутики та здатність до утворення ланцюжків Розмір клітин 0,8 - 1,3 х 3,0 - б.Омкм Спори в спорангії розташовані субтермшально, на протилежному КІНЦІ спорангія знаходяться білкові включення (кристали) ендотоксину Культури бактерій на агаризованому середо вищі утворюють круглясті, сірувато-кремового кольору колони з матовою поверхнею і вихлястими краями Джерелом виділення утворюючих кристали бацил є комахи, птахи, рослини, тварини, а також грунт і вода Спосіб виготовлення сухого бітоксібациліну включає 1 Розмноження посівного матеріалу скошеному м'ясопептоному агарі 2 Трикратний пасаж із поступовим збільшенням об'єму ферментерів у виробничих середовищах, які складаються з кормових дріжджів, глюкози та стандартного набору солей для поживних мікробіологічних середовищ 3 Сепарування або центрифугування 4 Люфілізація, сублімацюнніа сушка Ознаками прототипу, які співпадають з суттєвими ознаками винаходу, є спосіб розмноження і отримання інокуляційного матеріалу, стерилізація середовищ та технологія культивування бактерій Недоліком прототипу є висока енергетична та економічна вартість кінцевого процесу - сушіння і відсутність деяких компонентів сировини в Україні для виробництва препарату В основу винаходу, що заявляється, постав (21)2002097414 ( 2 2 ) 1 2 09 2002 ( 2 4 ) 1 5 04 2 0 0 3 CO го о (О ю 56033 робничим рідким поживним середовищем, яке в якості джерела вуглецю містить мелясу, а азоту кукурудзяний екстракт Культуру другого пасажу використовують для засіву виробничого поживного середовища у ферментері 3 Культивування культури бактерій у ферментері для Одержання великого об'єму рідкої спорової культури проводять з коефіцієнтом заповнення робочої камери поживним середовищем 0,6% при температурі 28 - 40°С протягом 48 годин Рідка культура містить ВІЛЬНІ спори і білкові кристали та залишки середовища 4 Центрифугування протягом 10 хвилин при бтис обертах за хвилину Після зливу центрифугату осад, що залишається являє собою пастоподібну масу коричневого кольору з вологістю 25 Технічним результатом винаходу, що заявля30% з титром спор 20 - 25млрд в 1 г ється, є зниження енергоємності та трудових витрат технологічного процесу при збереженні якості 5 Стабілізація пасти, тобто додаток стабілізапрепарату тору білку - карбоксілметілцелюлози і антисептика - бензойної кислоти Масу перемішують до повного Поставлена задача вирішується шляхом прирозчину компонентів готування поживних середовищ, вирощування мікроорганізмів, перевірки на наявність сторонньої 6 Фасування мікрофлори, центрифугування та уведення стабіПриклад Спосіб здійснюється таким чином лізаторів, при цьому в якості складових поживного На скошеному м'ясопептоному агарі у пробірках середовища для культивування бактерій обрані розмножують посівний матеріал, що одержано з меляса та кукурудзяний екстракт, а для тривалого колекції зберігання ентомоцидної властивості препарату Виготовляють середовища, які використовувведені стабілізатори карбоксіметилцелюлоза і ють для одержання маточної культури і рідкої спобензойна кислота рової культури Співробітниками Південного філіалу Інституту Склад середовища (г/л) сільськогосподарської мікробіологи УААН і ІнстиК2НРО4 0,2, туту агроекології та біотехнологм УААН розроблеКН2РО4 0,5, но технологію виробництва та стабілізації пастоМеляса 15,0, подібного препарату на основі Bacillus Кукурудзяний екстракт 20,0, thunngiensis, виділених з комах півдня України Вода водопровідна 1000 Вибір цього виду біопрепарату обумовлено До стерилізації рН середовища 8,0 - 8,2 встарядом причин новлюють 10% розчином NaOH Після стерилізації рН середовища мусить бути 7,4 - 7,8 висока активність проти шкідливих комах роду Coleoptera і Lepidoptera, ВІДПОВІДНО потрібному об'єму виготовлення можливість створення малотоннажних регіопрепарату розчин розливають у колби або бутлі і нальних виробництв, стерилізують при 1 атмосфері протягом ЗО хвилин, потім охолоджують Перевіряють якість стерилізазначно нижча енергоємність технологічного ції методом висіву однієї краплини середовища на процесу виготовлення за рахунок виключення м'ясопептоний агар з вуглеводами процесу сушки, нижча собівартість кінцевого продукту, Дотримуючись правил антисептики в поживне середовище поміщають посівний матеріал бактетехнологічність застосування (персистентність рій, якій отримують згідно технології на скошеному пастоподібного препарату, при обробці рослин не м'ясопептоному агарі Маточну культуру бактерій потребує використання клейких речовин, вирощують на качалці при 220об/хв і температурі більша екологічна безпечність (більша частка 28 - 32°С протягом 1 8 - 2 0 годин Титр вегетативнебезпечного водорозчинного екзотоксину ВІДДІних клітин бактерій маточної культури - не менш ЛЯЄТЬСЯ і утилізується з центр и фугато м) Усі пере1млрд в1мл лічені властивості дозволяють отримати високоякісний ентомоцидний біопрепарат зі строком Маточной культурою (1 - 2% від об'єму серезберігання до 5 МІСЯЦІВ довища) інокулюють середовище у ферментері, і вирощують з дотриманням технологічних парамеГотовий пастоподібний препарат містить спотрів аерація 0,8 - 1,0об/об/хв, температурі 28 ри бактерій, білкові кристали ендотоксину, невели32°С протягом двох діб при постійної роботі мішакі залишки екзотоксину та компонентів середовилки Титр спор зрілої культури не менш 2млрд ща, має в'язку консистенцію, характерний неприємний (але не гнилосний) запах і темно коПастоподібну масу одержують шляхом ричневий колір центрифугування спорової культури протягом 10 хвилин при бтис об/хв і зливу надосадної рідини Спосіб виготовлення пастоподібного препарату включає ряд основних етапів Стабілізацію пасти проводять у змішувачу при постійному перемішуванні, додаючи карбоксиме1 Зберігання та розмноження посівного матетилцелюлозу - 0,2% і бензойну кислоту - 0,1% від ріалу на скошеному м'ясопептоному агарі об'єму пасти Титр одержаної пасти становить 20 2 Одержання маточної культури бактерій, 25млрд спор в 1г шляхом двох 16-годинних пасажів у колбах із вилено технічну створення енергозберігаючого способу виготовлення вітчизняного ентомоцидного біологічного препарату для контролю чисельності шкідливих комах зі строком зберігання не менш 5 МІСЯЦІВ Перевагами роз - робленого способу виготовлення препарату є використання більш дешевих та доступних в Україні складових середовищ для культивування бактерій (меляса та кукурудзяний екстракт), енергозберігаюча технологія культивування (технічна зрілість культури у запропонованому середовищі досягається через 48 годин проти 72 годин у прототипі), а спосіб одержання кінцевого продукту введенням стабілізаторів виключає енергоємний процес сублімаційного висушування 5 56033 6 Застосовують пасту як водяну суспензію при лежно від фази розвитку рослин проти личинок нормі 6кг пасти на 1га посадок Витрати робочої листя гризучих комах Технічна ефективність рідини при обробці посадок картоплі - 300л/га складає від 85 до 100% Обробку рослин проводять обприскувачем неза Підписано до друку 05 05 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24