Спосіб моделювання панкреатиту в експерименті

Спосіб моделювання панкреатиту в експерименті, який включає введення діючої речовини внутрішньочеревинно, який відрізняється тим, G що щурам вводять N -нітро-L-аргінін. (19) (21) u201015739 (22) 27.12.2010 (24) 25.07.2011 (46) 25.07.2011, Бюл.№ 14, 2011 р. (72) КРИЛОВА ОЛЕНА ОЛЕКСАНДРІВНА, РУДЕНКО АНАТОЛІЙ ІВАНОВИЧ, ГАЙДАР ЮРІЙ АДОЛЬФОВИЧ, МАКАРЧУК ВІКТОРІЯ АНАТОЛІЇВНА, ОПИХАЙЛО МАКСИМ СЕРГІЙОВИЧ, ЧЕЛКАН ВІРА ВОЛОДИМИРІВНА 3 нак, відтворення цієї моделі потребує тривалого часу та зусиль. Існує модель відтворення ХП шляхом щоденного введення щурам розчину кальцію хлориду (50 мг/кг, внутрішньочеревно) протягом 7 тижнів (Демидов С.М. Оптимизация лечения хронического панкреатита путем сочетанного воздействия инфракрасного лазерного излучения и введения даларгина в экспериментальных условиях / С.М. Демидов, А.А. Горбунов, И.В. Гомонюк // Вісник морської медицини.-2001. - № 2 (14). – С. 13-16). Даний спосіб, як найбільш близький до того, що заявляється, за суттю та ефектом який досягається, вибрано за прототип. Недоліком способу є те, що необхідно тривале введення розчину кальцію хлориду для відтворення моделі панкреатиту. В основу корисної моделі, що заявляється, поставлена задача розробити ефективну модель панкреатиту, яку можна відтворити за невеликий проміжок часу, яка максимально характеризує зміни підшлункової залози при панкреатиті у людей та дає змогу прослідити всю динаміку патологічного процесу - від норми через передпатологічний стан до панкреатиту. Загальними ознаками прототипу та способу що заявляється є те, що для відтворення моделі панкреатиту щурам діюча речовина вводиться внутрішньочеревинно. Відмінними ознаками є те, що для відтворення G моделі панкреатиту використовується N -нітро-Lаргінін. Вирішення поставленої задачі виконували шляхом експериментальних досліджень на 30 білих щурах-самцях лінії Вістар, масою 220-280 г. За 16-20 годин до експерименту тварин піддавали харчовій депривації при вільному доступі до води. Всього було проведено 2-е серії експериментів. Блокування NO-синтази здійснювалося за допомоG гою внутрішньочеревної ін'єкції N -нітро-L-аргініну (L-NNA, виробництво Sigma-Aldrich) (40 мг/кг маси тіла). В 1-й серії досліджень (n=10) тваринам вводили неспецифічний інгібітор NOS нітро-L-аргініну протягом 6-ти та протягом 12-ти днів. В 2-й контрольній серії щурам внутрішньочеревинно вводили стерильний фізіологічний розчин. Екскреторну функцію ПЗ оцінювали за активністю амілази, ліпази та трипсину крові за відомими методами. Після закінчення дослідження тварин декапітували після попереднього введення етаміналу натрію (85 мг/кг), підшлункову залозу резекували та відразу фіксували в середовищі Bown і готували мікроскопічні зрізи тканини із забарвленням гематоксилін-еозин та за Маллорі-Слінченко. Для уточнення ступеня макроморфологічних змін підшлункової залози, її видаляли, промивали фізіологічним розчином та фіксували в розчині Боуєна. Моделювання недостатності NO-синтази (на 6 день) не супроводжувалося погіршенням загального стану тварин, тоді як у подальшому, на 12 день спостерігались зміни - поведінка щурів в умовах звичайного середовища перебування (в клітці) ставала більш пасивною стосовно будь-якого пе 61631 4 ресування; погіршувався апетит, а також відмічалось незначне зменшення на 5,0-9,0 грамів маси тіла кожної тварини. Зміна загального стану тварин супроводжувалась морфологічними змінами підшлункової залози. Так, у більшості щурів на 12-й день недостатності NО-синтази визначались морфологічні зміни. При морфологічному дослідженні у всіх щурів, яким вводили інгібітор NOS, було виявлено панкреатит з різним ступенем ушкодження паренхіми. Характерна наявність повнокрів'я, стазу в дрібних судинах, вираженого набряку навколо часточок ПЗ, що вказує на порушення кровообігу в залозі із наступним руйнуванням ацинарної тканини. На 6 добу у ПЗ усіх щурів спостерігались різних розмірів вогнища ушкодження ацинарної тканини, а саме: мембрани ацинарних клітин місцями не контурувались, відзначались виражений перицеллюлярний набряк, гіперхромія ядер ацинарних клітин, місцями - зменшення їх розмірів, наявність помірно вираженої дифузної інфільтрації строми лімфоцитами і переважно сегментоядерними нейтрофілами. Примітно, що біля великих проток також виявлялась помірно виражена дифузна лімфогістиоцитарна інфільтрація з наявністю сегментоядерних нейтрофілів і поодиноких плазмоцитів. Місцями серед пошкодженої ацинарної тканини зустрічались 4-5 незмінених ацинарних клітин, які вціліли. При цьому, запальна реакція в основному проявлялась перидуктулярно, особливо поблизу великих вивідних протоків. При цьому встановлено, що острівці Лангерганса не постраждали - серед патологічно зміненої тканини виявлялись звичайної форми і розмірів інтактні острівці ендокринної тканини. У контрольних тварин спостерігалась гістологічно незмінена ПЗ. Морфологічні зміни супроводжувались змінами зовнішньосекреторної функції ПЗ. На 6-у добу рівень ферментативної активності ПЗ зростав: достовірно збільшився рівень -амілази та ліпази в 1,4 рази, активність трипсину - майже у 9,0 раз (таблиця). В подальшому на 12 добу моделювання панкреатиту активність в крові щурів амілази та ліпази незначно зросла по відношенню до 6-ї доби, тоді як активність трипсину навпаки достовірно знизилась в 1,4 рази. Цей факт можна розглядати як захисний адаптаційно-компенсаторний механізм спрямований проти пошкодження ПЗ. Отже неспецифічне інгібування усіх ізоформ NOS спричиняє ураження ПЗ, яке виникає внаслідок інгібування iNOS, eNOS і nNOS, тобто пов'язане на ранніх етапах як з порушенням перфузії, так і з нітроергічною ланкою регуляції, а в подальшому і антимікробним захистом ПЗ. У зв'язку з цим правомірним є створення нової моделі експериментального панкреатиту, що ґрунтується на інгібуванні неспецифічної NOS. 5 61631 6 Таблиця Ферментативна активність сироватки крові щурів при тривалому введенні нітро-Lаргініну Показник -амілаза, г/чмл Ліпаза, мл нМоль/сл Трипсин, мкМ/мл/хв Контроль (n=8) М±m 93,32±19,63 2,01±0,02 3,50±1,42 6-та доба (n=8) М±m 132,66±2,49* 2,38±0,11* 9,02±2,65 12-та доба (n=6) М±m 142,2±3,31* 2,40±0,14* 2,66±0,92* Примітка * - р