Штам campylobacter jejuni subspecies jejuni c.2008 для виготовлення імунобіологічних препаратів

Штам Campylobacter jejuni subspecies jejuni C.2008 для виготовлення імунобіологічних препаратів, який здатний до прискореного росту, високого накопичення бактеріальної маси та в РА не дає перехресних реакцій з гетерологічними культурами (сальмонелами, шигелами і стафілококами), що депоновано за № 478 у Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів (м. Київ). (19) (21) u201100255 (22) 10.01.2011 (24) 10.08.2011 (46) 10.08.2011, Бюл.№ 15, 2011 р. (72) КАСЯНЕНКО ОКСАНА ІВАНІВНА, ФОТІНА ТЕТЯНА ІВАНІВНА (73) СУМСЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ АГРАРНИЙ УНІВЕРСИТЕТ 3 О.І.) виділені із м'яса птиці культури Campylobacter jejuni subspecies jejuni, які депоновано за номером № 478 у Депозитарії Державного науковоконтрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів (м. Київ). (Оцінка ризиків мікробіологічної безпеки продуктів забою птиці та обладнання в умовах агропродовольчих ринків / О.І. Касяненко, Т.І. Фотіна // Збірник наукових праць Луганського національного аграрного університету, 2008. № 92. - С. 231-234. Ізоляти адаптували до середовища поживного щільного для культивування кампілобактерій (ТУ У 24.4-14332579-056:2010), яке використовуються в технологічному процесі одержання діагностичної сироватки кампілобактеріозної аглютинуючої, культивуючи його на означеному живильному середовищі впродовж 2-3 генерацій з застосуванням способу підвищеного накопичення бактеріальної маси кампілобактерій. Поставлена задача вирішується завдяки тому, що можливість використання вітчизняною біологічною промисловістю циркулюючих штамів Campylobacter jejuni для виробництва імунобіологічних препаратів дозволяє підвищити специфічну активність діагностичних кампілобактеріозних аглютинуючих сироваток, спростити та знизити вартість процесу їх одержання і разом з тим підвищити вихід цільового продукту. Приклад 1. Морфологічні властивості штаму. Грамнегативний. Збудник фарбується аніліновими фарбниками і досить чітко фуксином Пфейфера в розведенні 1:5 (1-2 хв.). Кампілобактерії представлені грамнегативними поліморфними тонкими паличками. В мазках Campylobacter jejuni мають вигляд коми, S-подібної форми, крил чайки при з'єднанні двох клітин в короткий ланцюг. Приклад 2. Культуральні властивості. Інкубацію посівів проводили при температурі +37,0 та +42,0 °C у мікроаерофільних і капнофільних умовах. Оптимальний склад газового середовища складає: 5 % кисню, 10 % вуглекислого газу, 85 % азоту. Для культивування кампілобактерій використовували середовище поживне щільне для культивування кампілобактерій (ТУ У 24.414332579-056:2010). На поживному середовищі ріст кампілобактерій виявляли у вигляді вологих, блискучих негемолітичних колоній, сіруватоматового кольору. Також виявляли ізольовані колонії круглої форми, добре контуровані, помірно випуклі, матові в падаючому світлі та при розгляді збоку, негемолітичні, які поступово досягають 1-3 мм у діаметрі. В напіврідкому поживному середовищі (МПППА) бактерії росли у вигляді тонких тендітних дисків, які повільно піднімаються до поверхні середовища і ставали більш щільними. Через 24-72 години культури утворювали дифузний шар (1-3 мм) під поверхнею поживного середовища. Ріст досліджуваних культур кампілобактерій виявили в МПППА з 1 % гліцину, 1 % бичачої жовчі. Не виявили ознак росту культур на МПППА з 3,5 % хлористого натрію. Приклад 3. Ідентифікація Campylobacter jejuni. Визначення виду кампілобактерій проведено за результатами температурного тесту. В три пробірки з м'ясо-печінковим лептонним напіврідким агаром внесли по дві краплі зависі мікроорганізмів, 62017 4 концентрація якої становила 1 млрд. мікробних тіл 3 в 1 см за оптичним стандартом мутності. Посіви інкубували в мікроаерофільних умовах Пробірки при температурі 25 °C, 37 °C і 42 °C. За результати температурного тесту встановлено, що досліджувані культури кампілобактерій росли при температурі 37 °C і 42 °C. При температурі 25 °C ріст культур не виявлено. Рухливість культур визначали в препаратах "роздавлена крапля". Мікроорганізми досліджуваного штаму С. jejuni були рухливі. Рух характеризувався як інтенсивний, гвинтоподібний. За результатами вивчення гемолітичних властивостей ізолятів встановлено, що досліджуваний штам мікроорганізмів не утворював навколо колоній зон гемолізу. Визначення роду Campylobacter проводили за здатністю культур продукувати цитохромоксидазу і каталазу. Постановку тесту на цитохромоксидазу проводили шляхом нанесення добової агарової культури на фільтрувальний папір, додаючи суміш, яка складається з трьох частин: 1 %-го водного розчину диметилпарафенілендіаміну гідрохлориду та двох частин1 %-го спиртового розчину альфа-нафтолу. Виявили зміну кольору колоній на темно-синій через 20 секунд, що свідчить про позитивну реакцію. Як позитивний контроль ставили реакцію з добовою агаровою культурою псевдо монади, а як негативний - з Е. соlі. Перевірку свіжовиділених культур на наявність каталазної активності здійснювали експрес-методом. Досліджувану культуру на предметному склі змішували з краплею 3 %-го розчину перекису водню. Облік реакції проводили через декілька секунд. Виявили появу пухирців, що свідчить про позитивну реакцію. Диференціацію кампілобактерій підвиду jejuni здійснювали за результатами тесту гідролізу гіпурату натрію. Свіжоприготовлений 1 % розчин гіпурату нагрію розливали в преципітаційні пробірки 3 по 0,4 см . Дві петлі добової агарової культури суспензували в розчині гіпурату. Пробірки інкубували в термостаті при +37 °C протягом двох годин. Після інкубації по стінкам пробірок нашарували 0,2 3 см 3,5 % нингідринового реактиву в суміші рівних частин ацетону і бутанолу. Пробірки при цьому не струшували. Інкубацію продовжували ще 10 хвилин при тій же температурі. Облік реакції проводили на основі зміни кольору реактиву. Виявили появу темно-фіолетового кольору, що свідчить про гідроліз гіпурату з утворенням гліцину. Досліджуваний штам мікроорганізмів чутливий до налідиксової кислоти, брильянтової зелені в розведенні 1:33000 та 1:100000. Штам резистентний до поліміксину, ванкоміцину, триметоприму, амфотерицину та цефалотину. Приклад 4. Патогенність. Патогенність культур Campylobacter jejuni subspecies jejuni С.2008 вивчали на кролях, масою 3,5-4 кг. Досліджуваний штам мікроорганізмів патогенний для лабораторних тварин. При патологоанатомічному дослідженні виявляли: в одній або обох частках печінки виявляють просоподібні утворення сіро-білого кольору, некротичні вогнища сягають від 0,5 до 15 мм. Зміни в шлунковокишковому тракті характеризуються геморагіями в тонкому і товстому відділах кишечника, ентерита 5 62017 ми різного ступеня та виразково-некротичними ураженнями ділянки біфуркації сліпих кишок. Виявлено запальні процеси в сечостатевій системі: ниркової миски, сечоводів, сечового міхура та сфі Комп’ютерна верстка І.Скворцова 6 нктерів. Сечовий міхур збільшений в розмірах в 24 рази, заповнений каламутною сечею світложовтого кольору, слизова оболонка вкрита смугастими крововиливами. Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601