Спосіб лікування андрогенного дефіциту у щурів

Спосіб лікування андрогенного дефіциту у щурів, який здійснюють шляхом введення препарату, який відрізняється тим, що здійснюють двостороннє інтратестикулярне введення піддослідним тваринам культури стовбурових клітин у кількількості 200 000 клітин. (19) (21) u201100632 (22) 20.01.2011 (24) 26.09.2011 (46) 26.09.2011, Бюл.№ 18, 2011 р. (72) АНТОНЯН ІГОР МИХАЙЛОВИЧ (73) ХАРКІВСЬКА МЕДИЧНА АКАДЕМІЯ ПІСЛЯДИПЛОМНОЇ ОСВІТИ 3 62911 а також масові показники органів-мішеней (сім'яники, сім'яні пухирці, ВЧПЗ, придатки яєчок). Поставлена задача вирішується тим, що в способі лікування андрогенного дефіциту у щурів, який здійснюють шляхом введення препарату, згідно з корисною моделлю, здійснюють двостороннє інтратестикулярне введення піддослідним тваринам культури стовбурових клітин у кількості 200000 клітин. Останнім часом багато вчених звертаються при лікуванні різних патологічних станів до використання стовбурових клітин. Не є виключенням й урологія (Kanatsu-Shinohara M, Takehashi M, Shinohara T.Brief history, pitfalls, and prospects of mammalian spermatogonial stem cell research/M.Kanatsu-Shinohara, M. Takehashi, T. Shinohara // Cold Spring Harb Symp Quant Biol.2008. – Vol.73. – P.17-23;Genetic reconstruction of mouse spermatogonial stem cell self-renewal in vitro by Ras-cyclin D2 activation/J.Lee, M. KanatsuShinohara, H. Morimoto [et al.] // Cell.Stem.Cell.2009. – № 5(1). – P.76-86.). Експериментальні дані свідчать про те, що їх використання дає стійкий ефект й призводить до нормалізації сперматогенезу. Спосіб, що заявляється, пояснюємо на прикладі. Завданням нашого експерименту було підібрати ефективну кількість стовбурових клітин для лікування андрогенного дефіциту у щурів. Для цього нами була використана модель захворювання, створена за допомогою хлориду кадмію 4 (CdC l2) (Рішення про видачу патенту на к/модель з-ка № U201008563 від 08.07.2010). Моделювання гіпогонадизму проводилось на статевозрілих щурах-самцях, яких розділили на 5 груп, де 1 група - інтактна, групи 2-5 отримали CdCl2 в концентрації 150 мкг/100 г ваги тварини задля моделювання експериментальної патології. Концентрація токсину, яка використовувалась для моделювання патології, була визначена експериментальним шляхом у попередніх дослідженнях. Тваринам 3 групи культуру стовбурових клітин вводили в кожне яєчко у кількості 80000 клітин, тваринам 4 групи - у кількості 100000 клітин в кожне яєчко, тваринам 5 групи - у кількості 200000 клітин в кожне яєчко. Культуру стовбурових клітин отримували згідно з розробленою методикою (Технології виділення клітин строми кісткового мозку людини, розмноження in vitro та індукції в нервові клітини та остеобласти: Метод. рек. / Щегельська О.А., Микулинський Ю.Ю., Омельченко О.А. та ін. – ХМАПО – Харків, 2004. – С. 7-10.). Ефективність терапії оцінювалась за такими показниками сироватки крові: тестостерон (Т), естрадіол (Е), Т/Е, фруктоза, а також маса сім'яників, вентральної частини передміхурової залози (ВЧПЗ), сім'яних пухирців, придатків яєчок та гіпофізу. Оцінка усіх показників в групах 3-5 проводилась на 28 добу експерименту. В результаті проведеного експерименту були отримані результати, наведені в табл. 1. Таблиця 1 Вплив культури стовбурових клітин на показники гормонального стану щурів на моделі ураження CdСl2. Т, нмоль/мл Інтактна група Експериментальна патологія 80000 клітин 100000 клітин 200000 клітин Е, нмоль/мл Т/Е 23,4±2,0 * 9,7±0,7 *,*** 15,1±1,3 ** 19,0±1,4 ** 22,6±1,6 0,24±0,02 * 0,44±0,02 ** 0,26±0,02 ** 0,26±0,02 ** 0,21±0,02 130,8±23,5 * 24,1±3,0 *, ** 59,9±4,6 *,** 78,8±7,2 ** 119,2±11,0 * Примітки: - вірогідна відмінність від інтактної групи; гії. Як видно із табл. 1, після введення самцям щурів токсину рівень тестостерону значно знизився у порівнянні з інтактною групою - на 58,5 %, рівень естрадіолу значно зріс - на 83,3 %, відношення Т/Е значно знизилось - на 81,6 %, рівень фруктози знизився на 44,7 %. Такі зміни свідчать про те, що андрогенна насиченість організмів піддослідних тварин значно знизилась. Введення тваринам в яєчки культури стовбурових клітин на тлі ураження CdCl2 привело до позитивних змін щодо андрогенної насиченості (табл. 1). При інтратестикулярному введенні тваринам культури стовбурових клітин у кількості 80000 клітин було відмічено зростання рівня тестостерону та фруктози у порівнянні з групою негативного ** Фруктоза, нмоль/мл 1,03±0,06 * 0,57±0,05 0,89±0,05** ** 0,96±0,05 ** 1,01±0,05 - вірогідна відмінність від експериментальної патоло контролю: на 23,1 % та на 31,1 %, відповідно. Вміст естрадіолу знизився на 75,0 %. Відповідно, відношення Т/Е зросло на 27,4 %. Введення клітин у кількості 100000 клітин в кожне яєчко викликало такі позитивні зміни андрогенної насиченості організмів у порівнянні з групою негативного контролю: рівень тестостерону зріс на 45,7 %, фруктози - на 37,9 %, вміст естрадіолу знизився на 75,0 %, а відношення Т/Е зросло на 41,8 %. В експерименті з введенням піддослідним тваринам культури стовбурових клітин в кількості 200000 клітин в кожне яєчко спостерігалися наступні зміни андрогенної насиченості організму у порівнянні з групою негативного контролю: вміст тестостерону виріс на 55,1 %, фруктози - на 42,7 %, 5 62911 вміст естрадіолу знизився на 95,8 %, відношення Т/Е зросло на 72,7 %. Крім визначення андрогенного статусу піддослідних тварин нами проводилось вивчення орга 6 нів-мішеней до андрогенів: сім'яників, вентральної частини передміхурової залози (ВЧПЗ), придатків яєчок та гіпофізу. Результати цього вивчення наведені в табл. 2. Таблиця 2 Вплив культури стовбурових клітин на масу органів-мішеней щурів на моделі ураження CdCl2. Маса органів, мг сім'яники, мг Інтактна група Експериментальна патологія 80000 клітин 100000 клітин 200000 клітин 3546,3±15,5 * 2861,8±17,5 **,* 3367,6±20,8 **,* 3418,7±24,5 ** 3543,7 ±, 19,9 сім'яні пухир- Придатки яєці, мг чок, мг 1004,9±20,2 1006,1±17,6 1079,1±15,0 * * * 604,3±18,1 827,2±22,3 854,5±21,6 **,* **,* **,* 854,7±22,0 902,3±16,1 991,7±17,7 **,* **,* **,* 902,0±21,3 926,3±16,8 1017,7±19,0 ** ** ** 985,5±19,1 987,4±17,9 1051,0±20,9 * вчпз, мг Примітки: - вірогідна відмінність від інтактної групи; патології. Як видно з таблиці 2, динаміка змін маси статевих органів також була позитивною після введення тваринам стовбурових клітин на тлі ураження CdCl2. Після введення токсину маса статевих органів знизилась: маса сім'яників - на 19,3 %, ВЧПЗ - на 39,9 %, сім'яних пухирців - на 17,8 %, придатків яєчок - на 20,8 %, а маса гіпофізу залишилась незмінною. Введення піддослідним тваринам культури клітин у кількості 80000 призвело до таких змін: у порівнянні з експериментальною патологією маса сім'яників зросла на 14,3 %, маса ВЧПЗ - на 24,9 %, сім'яних пухирців - на 7,5 %, придатків сім'яників - на 12,7 %, маса гіпофізу не змінилась. Використання клітин у кількості 100000 призвела до таких змін: маса сім'яників зросла на Комп’ютерна верстка І. Скворцова ** гіпофіз, мг 6,7±0,14 6,7±0,12 6,7±0,1 6,6±0,11 6,8±0,1 - вірогідна відмінність від експериментальної 15,7 %, ВЧПЗ - на 29,6 %, сім'яних пухирців - на 9,8 %, придатків сім'яників - на 15,1 %, маса гіпофізу виявилась нижчою на 1,5 %. Після введення тваринам клітин у кількості 200000 були зареєстровані наступні зміни: маса сім'яників зросла на 19,2 %, маса ВЧПЗ - на 37,9 %, сім'яних пухирців - на 15,9 %, придатків на 18,2 %, маса гіпофізу виявилась більшою на 1,5 %. Таким чином, результати експерименту свідчать про те, що двостороннє інтратестикулярне введення піддослідним тваринам культури стовбурових клітин у кількості 200000 на тлі ураження тварин CdCl2 привело до найбільш позитивних змін щодо андрогенної насиченості організму тварин й вагових змін статевих органів. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601