Спосіб стимуляції проліферативних процесів у рані шкіри щурів шляхом трансплантації в ділянку рани мезенхімальних стовбурових клітин

Спосіб стимуляції проліферативних процесів у рані шкіри щурів шляхом трансплантації в ділянку рани мезенхімальних стовбурових клітин, що включає іммобілізацію клітин та подальшу трансплантацію отриманої конструкції в ділянку рани 3 57834 ушкодженням шкірного покриву. Поставлене завдання досягається тим, що у способі стимуляції проліферативних процесів у рані шкіри щурів шляхом трансплантації в ділянку рани алогенних мезенхімальних стовбурових клітин здійснюють іммобілізацію МСК щурів у біологічний матрикс, а отриману біоконструкцію трансплантують під струп ділянки ушкодження шкіри. Запропонований нами спосіб полягає в культивуванні МСК кісткового мозку щурів при посадковій концентрації 30 тис. клітин на см2 культурального посуду в DMEM, доповненому 15 %-ми ембріональної сироватки теляти, 10 мкл/см3 антибіотика-антимікотика (вміст СО2 = 5 %, t = 37 °С). При досягненні щільності моношару клітин в культуральному посуді до 80-90 %, за допомогою розчину трипсин/ЕДТА (0,5/0,2 %) необхідно зняти клітинний моношар. Суспензію клітин розпіпетувати, перенести в центрифужну пробірку та відцентрифугувати при 300g протягом 5 хв. Злити (DMEM, доповнене 15 %-ми ембріональної сироватки теляти, 10 мкл/см3 антибіотика-антимікотика) в об'ємі 1 см3. Здійснити підрахунок клітин в камері Горяєва. Вмістиме пробірки повторно відцентрифугувати при 300g протягом 5 хв., злити над осадову рідину. Іммобілізацію клітин здійснити з допомогою 10 %-го желатинового матриксу, який готують наступ Комп’ютерна верстка А. Крулевський 4 ним чином: до культурального середовища об'ємом 10 см3 (DMEM, доповнене 15 %-ми ембріональної сироватки теляти та 10 мкл/см3 антибіотикаантимікотика) поступово внести 1,0 г желатину (gelatin from bovine skin, type В), розмішуючи при цьому на магнітні мішалці (t = 35-40 °С) до повного розчинення гранул желатину. Приготовлену суспензію профільтрувати через нітроцелюлозний фільтр з діаметром пор - 0,22 мкм. До клітинного осаду додати желатиновий матрикс (t = 35-38 °С) з розрахунку 1 см3 матриксу на 7,5 млн. клітин та розпіпетувати до утворення однорідної суспензії. Для стимуляції проліферативних процесів у рані шкіри з сторони її неушкодженої ділянки, у чотирьох місцях навколо рани, під струп ділянки дефекту з допомогою інсулінового шприца ін'єкувати по 25 мкл іммобілізованих в 10 %-ому розчинові желатину мезенхімальних стовбурових клітин (з розрахунку 100 мкл на рану площею 1 см2). При збільшенні площі рани необхідно збільшити об'єм введення клітин та кількість місць введення, а саме: на кожен додатковий 1 см2 додати одне місце введення та 100 мкл біоконструкції, при цьому, загальний її об'єм необхідно розділити на загальну кількість місць введення. Для запобігання можливому витіканню желатину необхідно на місця введення нанести клей БФ-6 та пересвідчитися у його загустіванні. Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601